第一个无菌大白鼠群是美国Lobund小组于1951年建立的。第二个无菌大白鼠群是Gustafsson于1956年在瑞典建成。1959年Reyniers在Tempa大学建立无菌动物实验室。印度的无菌动物群于1959年在印度大学医学中心建立。
随着无菌动物研究的开展,无菌动物的饲养装置也不断地改进。1915年德国的科斯特首次创造无菌动物培育隔离器。1928年美国圣母大学细菌学实验室的Reyniers创造了不锈钢制的无菌动物大型隔离器。从此开展了无菌动物的系统实验。现在美国有48个无菌动物研究单位,仅国立卫生研究院的5个研究所里,就分别设有无菌动物研究室。1930年Gustafsson设计了第二型隔离器,整个隔离器的原料是不锈钢的。在日本,自1946年开始培育无菌动物,1959年宫川用不锈钢做隔离器的主体部分,并附有小的玻璃观察窗和灵敏的机械手,使不锈钢隔离器达到比较完善的地步。但这种隔离器既笨重造价又昂贵,不可能大量推广使用,因而也限制了无菌动物工作的开展。在日本现有24个单位从事无菌动物研究工作,仅在东京就有9个无菌动物研究单位。50年代,发明了用过氧乙酸进行表面灭菌的方法以后,1957年P.C.Trexler在美国印第安那州圣母大学Lobund研究室里创造了塑料膜隔离器,用无毒聚氯乙烯薄膜制造隔离器的主体部分。由于这类隔离器制作方便,既轻便又实用,所需用费用又不高,仅为不锈钢隔离器的几十分之一,灭菌方法也大为简便,因此日渐广泛地得到应用,促进了无菌动物研究的发展。
1978年Lobund研究室的Morris Pollard博士来华讲学时给我国赠送了一具Trexler隔离器,中国医科院动物中心已仿制成功,上海、苏州等地也已制作成功,并已小批量生产。近二年来,Trexler教授亲自来华讲学,传授隔离器和无菌动物饲养繁殖技术,促进了我国无菌动物研究的发展。现在北京、上海等地已有几个单位在研究无菌动物。
此外,澳大利亚、比利时、西德、苏联、捷克、英国、法国、意大利等国和地区,都已建立了包括无菌动物在内的实验动物中心。
对无菌动物的研究最初只是为了探讨高等动物与体内微生物之间的关系。19世纪末,Nattal氏及Thierfelder氏用剖腹术取出了妊娠豚鼠的胎儿,在无菌环境下饲养了10天。随后,Schettelus发现鸡的胚胎是无菌的,后来成功地进行了雏鸡的无菌化。无菌动物所具有的独特优越性使其成为一种新型的实验动物。随着生物学的进步和技术的发展,试行了各种动物的无菌化,现在无菌动物的品种已经很多,不仅小鼠、大鼠、豚鼠和家兔等小动物已有无菌动物,而且狗、猫、猴、猪、山羊、绵羊和牛等大动物以及鸡、火鸡、鹌鹑、青蛙、蛇甚至蚕、苍蝇、白蚁等也都有了无菌动物。这些都是为了适应科学发展的需要而培育的,其中的小鼠、大鼠、豚鼠,国外一些发达国家已能大量生产,并比较方便地应用于日常研究中了。已育成的无菌动物见表6-2。
表6-2 已育成的无菌动物
种 类 |
培育者及育成时间 |
小 鼠 |
Pleasants,1959 |
大 鼠 |
Reyniers等,1946:Gustafsson,1948;Pleasants,1959 |
豚 鼠 |
Miyakawa等,1958;Tanami,1959;Pnillips等,1959;Horton和Hickey,1961;Newton和Dewitt,1961 |
兔 |
Wostmann和Pleasants,1959;Luckey,1963 |
狗 |
Glimsedt,1946 |
猫 |
Bleby,1969 |
山羊、绵羊 |
Smith,1961,1966 |
猪 |
Whitenair,等,1960 |
马 驹 |
Drummond等,1973 |
猴 |
Reyniers,1942 |
鸡 |
Reyniers,1943 |
鹌 鹑 |
Woodard等,1965;Miles,1966 |
只要饲料配备适当,无菌动物发育正常,外观和普通动物相同,但是其机能、结构和普通动物有很大的不同。无菌动物受两个因素影响,即微生物和因饲养比较聚集而致的肾上腺增大。
无菌动物的特征主要反映在下面二个方面
(一)形态学改变
1.消化系统:主要变化在肠道
⑴无菌动物肠道肌层薄,更为特异的是盲肠肥大,比普通动物要大5-6倍。无菌豚鼠的盲肠可达体重的1/3。主要是由于肠壁薄、张力低而增大。由于盲肠膨大,肠壁菲薄,常因盲肠扭转或肠壁破裂而死亡。如给无菌动物注入梭状芽孢杆菌则可缩小盲肠体积。医学全.在线提供
⑵肠粘膜绒毛增多。
⑶肝脏重量下降。
2.循环系统:心脏相对缩小。
3.血液系统:白细胞增加。普通动物白细胞总数波动范围大,无菌动物白细胞数值恒定。
4.网状内皮系统:脾脏缩小,无三级滤泡,网状内皮细胞功能降低。