二、免疫论断及新技术应用
（一)皮内试验
利用宿主的速发型变态反应，将特异抗原液注入皮内，观测皮丘及红晕反应以判断有无特异抗体（IgE)的存在称皮内试验（intradermal test，IDT)。
皮内试验用于多种寄生虫病的检测，如血吸虫病、肺吸虫病等。最常用于血吸虫病的调查，操作简单，并且可即时观察结果，适宜现场应用。大多用粗制可溶性血吸虫虫卵抗原（稀释度为1：4000)或成虫冷浸抗原（稀释度为1：8000)敏感性高，其阳性率在93％～97％，但有部分假阳性反应（2.1％～3.5％)，并且对其他寄生虫病交叉反应较高。皮内试验可用作①过筛方法，先作皮试，阳性者再作进一步追查；②临床辅助诊断；③考核预防效果，用作检查新感染的方法，特别对儿童。
（二)染色试验
染色试验（dye test，DT)是比较独特的免疫反应，是目前诊断弓形虫病较好的方法，已广泛用于该病的临床诊断和流行病学调查。
新鲜弓形虫滋养体和正常血清混合，在37℃作用1小时或室温数小时后，大部分弓形虫失去原来的新月形，而变为圆形或椭圆形，用碱性美蓝染色时着色很深。但新鲜弓形虫和免疫血清混合时，虫体仍保持原有形态，用碱性美蓝染色时，着色很浅或不着色。其原因可能是由于弓形虫受到特异体抗体和辅助因子协同作用后，虫体细胞变性，结果虫体对碱性美蓝不易着色。
材料和试剂以弓形虫速殖子为抗原；采用正常人血清为致活因子。碱性美蓝溶液，取美蓝10g加入95％酒精100ml，制成饱和酒精溶液，过滤后取3ml加pH11，要求临用时新鲜配制。待检血清经56℃30分钟灭活，冰箱保存备用。
方法将待检血清用生理盐水倍比稀释，每孔0.1ml，加上述稀释的弓形虫速殖子0.1ml，置37℃水浴1小时，加碱性美蓝溶液0.02ml／孔，37℃水浴15分钟，以每孔聚悬液1滴于载玻片上，加盖玻片，高倍显微镜检查，计数100个弓形虫速殖子，统计着色和不着色速殖子比例数。
结果判定以能使50％弓形虫不着色的血清最高稀释度为该血清染色试验阳性效价。阳性血清稀释度1：8为隐性感染；1：256为活动性感染；1：1024为急性感染。
（三)环卵沉淀试验
环卵沉淀试验（circumoval precipitin test，COPT)是以血吸虫整卵为抗原的特异免疫血清学试验，卵内毛蚴或胚胎分泌排泄的抗原物质经卵壳微孔渗出与检测血清内的特异抗体结合，可在虫卵周围形成特殊的复合物沉淀，在光镜下判读反应强度并计数反应卵的百分率称环沉率。
1．常规法用载玻片或凹玻片进行，加样本血清后，挑取适量鲜卵或干卵（约100～150个，从感染动物肝分离)，覆盖24×24mm盖片，四周用石蜡密封，37℃保温48小时后，低倍镜观察结果，必要时需观察72小时的反应结果。典型的阳性反应为泡状、指状、片状或细长卷曲状的折光性沉淀物，边缘整齐，与卵壳牢固粘连。阴性反应必须观察全片；阳性者观察100个成熟卵，计环沉率及反应强度比例。环沉率是指100个成熟虫卵中出现沉淀物的虫卵数。凡环沉率≥5％者可报告为阳性，（在基本消灭和消灭血吸虫病地区环沉率≥3％者可判为阳性)，1％～4％者为弱阳性。环沉率在治疗上具有参考意义。
2．分级强度判定
“－”折光淡，与虫卵似连非连；“影状”物（外形不甚规则，低倍镜下有折光，高倍镜下为颗粒状)及出现直径小于10μm的泡状沉淀物者，皆为阴性。
“＋”虫卵外周出现泡状沉淀物（＞10μm)，累计面积小于虫卵面积的1／2；或呈指状的细长卷曲样沉淀物，不超过虫卵的长径。
“＋＋”虫卵外周出现泡状沉淀物的面积大于虫卵面积的1／2；或细长卷曲样沉淀相当或超过虫卵的长径。
“＋＋＋”虫卵外周出现泡状沉淀物的面积大于虫卵本身面积；或细长卷曲样沉淀物相当或超过虫卵长径的2倍。
3．近年来对COPT的方法作了一些改进如①双面胶纸条法：将双面胶纸条制特定的式样作COPT，可省略蜡封片法的繁琐步骤，具有操作简易，方法规范，提高工效和避免空气污染的优点。双面胶纸条法COPT（DGS－COPT)已在现场扩大应用，今后若能将该法配套干卵，则更能提高它的应用价值；②血吸虫干卵抗原片（或膜片)环卵沉淀试验，利用环卵抗原活性物质的耐热特性，将分离的纯卵超声和热处理，定量滴加，烤干固定于载玻片或预制的聚乙稀薄膜上。此种干卵膜片，保存时间较长（4℃半年)，已有市售商品。试验时只需加入血清试样，湿盒孵育，判读结果与常规法相同。干卵膜片法还具有简化操作规程，提高卵抗原的规范要求，并可长期保存等优点。
COPT可作为诊断血吸虫病的血清学方法之一，及临床治疗病人的依据；可用作考核治疗和防治效果的方法；并且用于血清流行病学调查及监测疫情的方法。
（四)间接血凝试验
间接血凝试验（indirect haemagglutination test，IHA)是以红细胞作免疫配体的载体，并以红细胞凝集读数的血清学方法。最常用的红细胞为绵羊或人（O型)红细胞，来源方便。目前均用醛化红细胞，可保存半年而不失其免疫吸附性能。
操作步骤如下：
1．红细胞鞣化和致敏 ①取醛化红细胞用0.15mol／L，pH7.2PBS离心洗涤2次，并用PBS配成2.5％悬液；②加等量1:2000鞣酸溶液（鞣酸不同批号，质量相差较大必须预试测定适宜浓度)37℃孵育20分钟，经常摇动；③离心去上清，PBS洗1次，再用0.15mol／L，pH6.4PBS配成10％悬液；④每份悬液加等量适当稀释的抗原液，置于37℃水浴箱中30分钟（每5分钟振动一次)，离心去上清，pH7.2PBS洗2次，再用含1％正常兔血清（NRS)10％蔗糖缓冲液配成5％细胞悬液。加1‰叠氮钠防腐，存4℃或减压冻干备用，每批致敏细胞均需用已知阳性和阴性血清滴定灵敏度或特异性。阳性滴度在1:640以上，阴性血清不出现反应者可用。
2．微量血凝试验 在U型（或V型)微量血凝板上，将被试血清用1％NRS或BSA生理盐水作倍比系列稀释，每孔含稀释血清0.05ml。每孔加0.01ml致敏红细胞悬液（可用标定过的OT针头滴加)，充分振荡摇匀，加盖于室温静置1～2小时读取结果。
3．根据红细胞在孔底的沉积类型而定。“－”，红细胞沉于管底，呈圆点形，外周光滑；“±”，红细胞沉于管底，周围不光滑或中心有白色小点；“＋”，红细胞沉积范围很小，呈较明显的环形圈；“＋＋”，红细胞沉积范围较小，其中可出现淡淡的环形圈；“＋＋＋”，红细胞布满管底呈毛玻璃状；“＋＋＋＋”，红细胞呈片状凝集或边缘卷曲。呈明显阳性反应（＋)的最高稀释度为该血清的滴度或效价。
目前对血吸虫病应用纯化虫卵抗原间接血凝试验。采用经SephadexG－100柱层析纯化的血吸虫卵抗原致敏红细胞作IHA，提高了方法的敏感性，特异性和重现性，为在疫区扩大应用提供了条件。
IHA操作简便，敏感性高，适于现场使用，可作为辅助论断病人，流行病学调查及综合查病方法。先后在多种寄生虫感染中应用，如血吸虫，疟疾、猪囊虫，旋毛虫，肺吸虫，阿米巴，弓形虫，肝吸虫等。有些已制成商品诊断药盒。不足之处是不能提供检测抗体的亚型类别，和容易发生异常的非特异凝集。另外抗原的标准化，操作方法规范化急待解决，以提高其诊断效果和可比性。
