五、抗着丝点抗体的检测方法
1．HEP-2细胞涂片的制备HEP-2细胞系人喉癌上皮细胞，在完全Eagle培养液中，37℃，二氧化碳孵育48～72h，使细胞生长达到一定数量，约1.2～1.5×106/ml，经胰酶消化后，可以传代或分装到置有玻片的培养皿中，继续用Eagle液培养及上述条件孵育，48h细胞不仅贴附于玻片上并已长成单细胞层。取出玻片用丙酮固定15min，自然干燥后待用，或保存于-20℃或4℃中。
表15-3 各种抗核抗体及临床意义
| 抗体名 | 别名 | 临床意义 |
| 抗Sm抗体 | SLE标记抗体，阳性率15～28%，常伴抗RNP抗体，有补体减少及肾受累 | |
| 抗RNP抗体 | ||
| 抗U1-snRNP抗体 | 抗MO抗体 | 各种自身免疫病均可出现，单独高效价见于混合结缔组织病（MCTD)。 |
| 抗SS-B抗体 | 抗La抗体 | 干燥综合征的标记抗体（27%) |
| 抗Ha抗体 | SLE 5%，同时抗SS-A阳性 | |
| 抗SS-A抗体 | 抗RO抗体 | 干燥综合征为78%阳性，SLE49%系统性硬皮病23% |
| 抗Scl-70抗体 | 抗Og抗体 | 系统性硬皮病的标记抗体44% |
| 抗Scl-86抗体 | 抗Scl-抗体 | 阳性系统性硬皮病进行性。局部者阴性。 |
| 抗Ki抗体 | SLE特有12%阳性。 | |
| 抗PCNA抗体 | 抗Ne抗体 | SLE阳性1%。 |
| 抗JO-1抗体 | 多发性肌炎的标记抗本（24%)，阳性者多有肺病变 | |
| 抗KO-1抗体 | 多发性肌炎60% | |
| 抗PM-1抗体 | 多见于系统性硬皮症（55%) | |
| 抗Ma抗体 | 分类不明的胶原病 | |
| 抗MOS抗体 | 同上 | |
| 抗RANA抗体 | 抗SS-C抗体 | 类风湿性关节 炎80%～90% |
| 抗dsDNA抗体 | SLE所特有60% | |
| 抗ssDNA抗体 | 见于各种胶原病 |
注：Sm（Smith)；RNP：核糖核蛋白；Sn：为小核；SSB：干燥综合征B；SS-A：干燥综合征-A，Scl-70：硬皮病70，抗原分子量70000；PCNA：增殖细胞抗原；PM-1：多发性肌炎-；RANA：类风湿性关节 核抗原；dsDNA：双链DNA；ssDNA：单链DNA。
2．染色方法用间接免疫荧光法。
3．结果着丝点抗原是紧附于染色体着丝点的DNA蛋白质，当与相应抗体结合后荧光图型为约46个圆的荧光亮点。国际上多用HEP-2细胞，因这种细胞核大，分裂相旺盛，着丝点容易显露，这种抗体在进行性系统性硬化症（PSS)中阳性率可达31%～98%，是PSS的CREST型的标记抗体，CRESF是指具有软组织钙化，雷诺现象，食管功能低下，指端硬化，毛细血管扩张的PSS患者。
六、抗甲状腺自身抗体（Thyroid Autoantiodies)的检测方法
Roitt等（1956)和Witebsby等（1957)就发现桥本氏病人血清中有对甲状腺提取的抗体活性，后来White（1957)首次用间接免疫荧光染色方法研究桥本氏病人血清存在对甲状腺胶质（thyroid colloid)的抗体获得成功。此后，Landing等（1958)和Holbrow等（1959)以不固定的甲状腺切片作抗原。检查出慢性甲状腺炎（Chronie thyroiditis)病人血清中有和细胞浆结合而呈现明亮染色的抗体。Blizzard等（1960),Doniach 等（1960)发现第二胶质抗体，血高γ球蛋白，沉淀素阴性，鞣酸细胞血凝试验阴性，抗甲状腺微粒体补体结合试验阴性。Balfoour等（1961)用免疫荧光法研究一些甲状腺病人时总结指出：甲状腺胶质抗体有三种不同的荧光形态：一种是呈三维状云絮状，是一种血清沉淀素阳性产生的抗甲状腺球蛋白抗体。另一种是胶质部分荧光呈裂纹形，胶质无明显阳性荧光，而胶质边缘和裂纹处呈明亮荧光，鞣酸化细胞血凝反应阳性，沉淀素反应阴性。第三种即上述的胶质呈均匀荧光形状，证实这是一种称第二胶质的抗体。近30多年的研究证明免疫荧光方法检查甲状腺自身抗体是一个特异、敏感、简便的方法，对于临床诊断和治疗，随访和预后，甲状腺某些疾病的自身免疫性质的发病机理研究等，都有一定的实用价值。我们20年大量研究结果也证明确实如此。用免疫荧光法检查甲状腺自身抗体已成为许多国家中，诊断甲状腺疾病的常规检查项目之一。
检查这种抗体的免疫荧光方法要求取正常人的甲状腺或手术摘出的甲状腺组织，用冰冻节 片（3～6μm)用作甲状腺球蛋白抗体检查切片需要经56℃纯甲醇固定3min；用作甲状腺微粒体抗原切片无需固定处理，因固定会破坏微粒体的抗原性。按常规间接方法进行。
关于甲状腺抗体的研究已报告有甲状腺球蛋白抗体，微粒体抗体，第二胶质抗体，甲状腺刺激免疫球蛋白抗体，甲状腺激素T4及T3抗体，细胞表面的促甲状腺激素受体的抗体等。
表15-4 不同甲状腺疾病甲状腺自身抗体的阳性率（%)
| 诊断 | 甲状腺上皮微粒体抗体（%) | 甲状腺球蛋白抗体（%) | 甲状腺抗体总阳性率（%) | LATS（%) |
| 桥本氏病 | 89 | 78 | 98 | － |
| Graves’s病 | 37 | 85 | 53 | 80 |
| 原发性甲低 | 57 | 52 | 75 | － |
| 正常对照 | 5 | 7 | 6 | － |
七、平滑肌抗体（Smooth muscle antibody , SMA)的检测
Johnson（1965)首次用免疫荧光组织化学间接法在狼疮样肝炎病人血清中发现了SMA，用鼠胃滑肌作抗原。Whitingham用病人自身平滑肌作抗原，证实了SMA的自身免疫性。狼疮性肝炎或慢性活动性肝炎病人血清中SMA的阳性率可达80%以上。Donidht和Whitehouse先后报告了急生病毒性肝炎病人血清中SMA为IgM，而慢性活动性肝炎病人血清中SMA在发病初期（1～4期)为IgM，而后为IgG。Anderson利用纯化肌浆蛋白为抗原与肝炎病人血清中分离的IgM和IgM类SMA进行吸收试验，证明了SMA的特异性。Holborrow Gamel和Renbe先后观察了SMA与鼠肝细胞，肾小球及人的甲状腺上皮细胞和血小板等组织为抗原的免疫荧光染色结果，证明这些组织的抗原性均与平滑肌肌动蛋白有着共同性抗原。
现在多以大白鼠胃壁和肾组织血管壁平滑肌的4～6μm冰冻切片和抗原，附贴在干净的盖玻片上，电扇吹干，放入4℃干燥剂中保存，用前可固定于95%（4℃)酒精中1min，或不固定进行间接免疫荧光检测。
染色结果可见胃壁平滑肌，粘膜肌层和肌丝，小血管壁平滑肌等呈现出明亮的黄绿色荧光。有人用荧光检查急性期甲、乙二型肝炎暂时出现SMA的阳性率达80%，稀释血清应在1：10以上的确定为阳性，一般认为，肝细胞表面存在肌动蛋白样物质。慢性活动肝炎患者滴度在1：80以上，急性肝炎患者SMA属IgM类，滴度1：25以上，慢性迁延性肝炎患者SMA也常阳性，滴度1：25左右。使用皮质激素者SMA转阴或滴度降低。健康输血员用原血清或1：5稀释，常有9%～18%的低滴度SMA阳性，似无诊断意义，SMA与性别，年龄无关。
非肝病的SMA阳性者，主要见于传染性单核细胞增生症，类风湿性关节 炎，支原体感染疣，恶性肿瘤（如乳腺癌)。除传染性单核症滴度可达1：320外，一般常≤1:25，其血清与非肌性结构细胞不产生反应。
平滑肌抗体是抗肌球蛋白和肌纤维收缩蛋白的抗体，当肝细胞损害时，释放抗原引起的自身免疫反应。已证实慢性活动性肝炎病人血清中平滑肌抗体是具有特异性的血清学标志，但必须是高效价（1：80)以上，因在人群中常见低效价（1：10～1：20)。临床的研究指出，平滑肌抗体与生化指标改变程度相关，说明高效介平滑肌抗体与肝脏损害有关。Kurki等研究SMA在慢性活动性肝炎等的意义。
Middelton等报告检查了70例肾衰病人自身抗体，肾移植后3个月平滑肌抗体IgM类阳性率占76%，而移植前14%。SLE常是SMA呈阴性结果，可作鉴别诊断参考。
