（二)顺序饱和加样程序
1．基本原理先将标准物或血样品与抗血清混匀，免疫反应6～24h，使抗原与抗体充分结合，甚至达到平衡，然后再加入标记抗原，与抗体反应12～24h，最后分离B与F，这称为顺序饱和分析法。
应用顺序饱和加样，可以提高测定方法的灵敏度。Utiger在做人促甲状腺激素（TSH)放射免疫分析时，将标记物延至第2天加入，发现其灵敏度增加两倍。如果缩短最后的温育时间，仍可取得满意的结果。所以一般认为，在顺序饱和加样中，第1次温育时间可以长，而第2次温育时间要短，这样可以提高灵敏度。但也有相反的意见，认为顺序饱和加样，是使用过量抗体，会使灵敏度受到一定影响。如果使用抗体不过量，温育时间缩短，在抗原和抗体结合未达到平衡饱和时就加入标记物，这样既不影响加灵敏度，反而比较稳定，甚至可提高灵敏度。
2．加样程序 以人血浆精氨酸加压素RIA测定程序为例（直接测定)。
（1)加样（单位μl；总反应体积600μl)
| 标准曲线 | 血浆 | |||||||||
| T | NSB | Bo | 1Pg | 5Pg | 10Pg | 50Pg | 100Pg | 500Pg | ||
| 管号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
| AVP标准液 | / | / | / | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | / |
| 样品 | / | / | / | / | / | / | / | / | / | 300 |
| 无肽血浆 | / | 300 | 300 | 300 | 300 | 300 | 300 | 300 | 300 | / |
| AVP抗血清 | / | / | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
| 缓冲液 | / | 200 | 100 | / | / | / | / | / | / | 100 |
| 在4。C下孵育12～24h | ||||||||||
|
125 I-AVP |
100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 | 100 |
（2)孵育：4℃，24h。
（3)分离B与F。
无肽血浆，用于血浆的直接测定。其制备方法为：在电磁搅拌下，抽取2%加膜活性炭溶液5ml，共两管，离心、去上清。血浆5ml，倒入上述活性炭管中，加盖，充分振荡10min，离心，上清倒入上述另一活性炭管中，振荡10min，再离心，取上清，即无肽血浆。血浆中的生物活性物质被活性炭吸附而去除。
（三)计数、绘制标准曲线与测定样品含量
以活性炭分离B与F，沉淀计数是F的cpm。T—F—NSB，得B的cpm数。
计算标准管与样品管结合（B)的cpm数及与零标准管结合（B0)的比（B/B0×100%)。
用半对数纸，以标准管的B/B0为纵座标，以各标准管含量为横座标，绘制标准曲线。
根据样品的结合率（B/B0×100%)，从标准曲线中找出被测样品抗原的含量，再换算成每毫升血浆含某抗原的量，或每毫克（组织湿重)含某抗原的量。
三、放射免疫分析的质量控制
（一)质量控制的目的和内容
放射免疫分析的质量控制实际上就是控制测定误差，监督测定结果。它包括两方面的内容：一方面对测定结果做精确分析；另一方面鉴定常规测定方法，对那些测定结果不好的方法加以改进，并建立新的测定方法。质量控制分四个方面：
1．在一个测定方法内产生的误差。
2．在同一实验室内不同方法之间产生的误差。
这两种情况属于内部质量控制。
3．用同一测定方法，在各实验室之间产生的误差。
4．采用不同方法，在各实验室之间产生的误差。
后两种情况属于外部质量控制。
