这一反应过程,可用以下简图(图8-1)说明。图中黑圈表示标记抗原,白圈表示非标记抗原,长条代表抗体,每个抗体有两个结合位点,标记抗原与非标记抗原对抗体有同等的结合能力。
图8-1 放射免疫分析原理示意图
从图中可见,当标记抗原与抗体量一定时,结合率(B/B+F)随抗原量增加而降低。在实际工作中,以B/T的值为纵座标,标准物的浓度为横座标,绘成曲线,即竞争性抑制曲线,或称准确曲线。将未知浓度的样品按同样条件操作,所得结合率(%)与标准曲线相比,即可查出样品中待测抗原的浓度。
放射免疫分析典型的操作程序如下:首先配制一系列已知浓度的标准溶液,并各取一定体积;于其中加入一定量的标记抗原和特异性抗体;在一定条件下使之反应平衡后,采取适当方法将B与F分离;分别测量其放射性;绘制标准曲线(图8-2)。对样品中抗原的测定,则可在同样条件下操作,在标准曲线上查得含量。
图8-2 标准曲线左:横座标为等份刻度; 右:横座标为对数刻度
由此可见,要成功地进行放射免疫分析,必须解决好以下3个关键性技术问题:
(1)标记抗原:要求其纯度高、免疫化学活性好、比放射性强、用量适当。
(2)制备抗体:要求其特异性高、选用的稀释度适当。
(3)分离B与F:理想的分离方法应当是分离完全、稳定可靠、操作简单、适用范围广。