(二)滤色系统
滤色系统是荧光显微镜的重要部位,由激发滤板和压制滤板组成。滤板型号,各厂家名称常不统一。滤板一般都以基本色调命名,前面字母代表色调,后面字母代表玻璃,数字代表型号特点。如德国产品(Schott)BG12,就是种蓝色玻璃,B是蓝色的第一个字母,G是玻璃的第一个字母;我国产品的名称已统一用拼音字母表示,如相当于BG12的蓝色滤板名为QB24,Q是青色(蓝色)拼音的第一个字母,B是玻璃拼音的第一个字母。不过有的滤板也可以透光分界滤长命名,如K530,就是表示压制滤长530nm以下的光而透过530nm以上的光。还有的厂家的滤板完全以数字命名,如美国Corning厂的NO:5-58,即相当于BG12。
用于荧光显微镜的主要滤板如表3-1。
表3-1 荧光显微镜常用滤板型号和透光特点
基本色调 | 相应名称 | 2mm厚透光范围(峰值)nm | |||
上海电器元件厂 | 德国(Schott) | 苏联 | 日本 | ||
黑紫 | ZWB-1 | UG-1 | yΦC-2 | DV-1 | 300~400(365) |
黑紫 | ZWB-2 | UG-5 | yΦC-1 | 280~240(360) | |
靛蓝 | ZB-2 | BG-1 | ΦC-1 | BG-1 | 300~500(380) |
靛蓝 | ZB-3 | BG-3 | CC-4 | BG-3 | 260~520(400) |
靛蓝 | QB-24 | BG-12 | CC-8 | BG-12 | 310~570(420) |
淡蓝 | QB-10 | BG-38 | C3C-5 | 310~720(460) | |
QB-12 | -8 | ||||
-11 | |||||
橙黄 | CB-3 | OG-1(K530) | OC-11 | OG-1 | 530以上 |
橙黄 | JB-8 | OG-4(K510) | ЖC-18 | FY-5 | 510以上 |
绿橙 | JB-7 | GG-11(K490) | ЖC-17 | FY-3 | 480以上 |
FY-4 | |||||
淡绿 | JB-4 | GG-3(K430) | жC-11 | US-10 | 420以上 |
引自:五九一节 五部队编:荧光显微术,见参考资料)
1.激发滤板 根据光源和荧光色素的特点,可选用以下三类激发滤板,提供一定波长范围的激发光。
紫外光激发滤板:此滤板可使400nm以下的紫外光透过,阻挡400nm以上的可见光通过。常用型号为UG-1或UG-5,外加一块BG-38,以除去红色尾波。
紫外蓝光激发滤板:此滤板可使300~450nm范围内的光通过。常用型号为ZB-2或ZB-3,外加BG-38。
紫蓝光激发滤板:它可使350~490nm的光通过。常用型号为QB24(BG12)。
最大吸收峰在500nm以上者的荧光素(如罗达明色素)可用蓝绿滤板(如B-7)激发。
近年开始采用金属膜干涉滤板,由于针对性强,波长适当,因而激发效果比较玻璃滤更好。如西德Leitz厂的FITC专用KP490滤板和罗达明的S546绿色滤板,均远比玻璃滤板效果好。
激发滤板分薄厚两种,一般暗视野选用薄滤板,亮视野荧光显微镜可选用厚一些。基本要求是以获得最明亮的荧光和最好的背景为准。
2.压制滤板 压制滤板的作用是完全阻挡激发光通过,提供相应滤长范围的荧光。与激发滤板相对应,常用以下3种压制滤板:
紫外光压制滤板:可通过可见光、阻挡紫外光通过。能与UG-1或UG-5组合。常用GG-3K430或GG-6K460。
紫蓝光压制滤板:能通过510nm以上滤长的荧光(绿到红),能与BG-12组合。通常用OG-4K510或OG-1K530。
紫外紫光压制滤板:能通过460nm以上波长的荧光(蓝到红),可与BG-3组合,常用OG-11K470AK 490,K510。