全血细胞培养染色体技术常用试剂配制

　　一、国内实验室应用试剂配制

　　（一)培养液

　　（1)RPMI1640培养液：称取RPMI培养基9.8g，碳酸氢钠1.9g、青霉素100u/ml，加双蒸水至1000ml，调节　pH7.2～7.4无菌过滤冻存备用。

　　（2)小牛血清商品：成都生物制品厂。

　　（3)植物凝集素（PHA)：自制或成品（重庆药检所)。

　　（4)pH调整液：5%NaHCO₃溶液高压灭菌（8磅15min)，0.1N稀盐酸液100ml。

　　（5)秋水仙素：10mg/ml无菌过滤高压灭菌（8磅10min)。

　　（6)磷酸缓冲液：pH7.4。

　　磷酸氢二钠28.8g(H₂O)、磷酸二氢钾2.67g(无水)，溶于1000ml双蒸水中，加肝素，终浓度为100u/ml。

　　（7)Giemsa染色液：

　　Giemsa粉剂　　　　　　　　　　　1g

　　甘油　　　　　　　　　　　　　　66ml

　　在研钵中，加入少量甘油油仔细研磨然后放甘油全部加磨，60℃温箱中保温2h，冷却后加入甲醇66ml。装入有色瓶中混合待用。染色时用pH7.4磷酸缓冲液稀释10倍，随配随用。医.学.全.在线.网.站.提供

　　（二)固定液

　　（1)甲酸：冰乙酸3：1混合即用。

　　（2)PBS缓冲液配制：

　　NaCl　　 16g　　 Na₂HPO₄(12H₂O)　　5.65g

　　KCl　　　0.4g 　KH₂PO₄0.4g

　　加双蒸水至1000ml pH7.0。

　　取5%胰酶（生理盐水配制)1ml加入50ml PBS液中（最终浓度为0.025%)，4℃冰箱待用。

　　二、细胞培养（Bhatl B和McGee JOD,1990)

　　1．完全培养基

　　RPMI　　　　　　　　　　　　 76.0ml

　　胎牛血清 　　　　　　　　　　20.0ml

　　植物凝集素　　　　　　　　　　2.0ml

　　抗生素/抗菌素溶液（100×)　　1.0ml

　　L-谷氨酰胺（100×)　　　　　1.0ml

　　2.BudR(5’-Bromo-2-deoxyuridine, 5’-溴-2-脱氧尿嘧啶)溶解10mg/ml BudR于dH₂O中，0.2μm滤膜过滤除菌，分装后-20℃储存，BudR要在柔光（弱光)下操作。

　　3．胸腺嘧啶（Thymidine,Thd)　　按250μg/ml溶解于dH₂O中，过滤后分装储存于-20℃。

　　4．Colcemid(Sigma)　　5.0μg/ml溶于dH₂O中，过滤后分装储存于-20℃。

　　5．KCl（0.75mol/L)　　溶解560mg于100ml dH₂O中，新鲜配制37℃保存。

　　6．固定剂　　甲醇冰醋酸按3：1（V/V)混合即可，现用现配，置冰上待用。

　　7．缺口平移试剂盒（Amersham和BRL公司)

　　8．生物素7-dATP(BRL)

　　9.糖原（BRL)

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