原位杂交组织化学常用试剂及处理

　　二、关于探针的标记

　　（一)cRNA探针的同位素标记

　　1．标记液（转录标记)

　　2．转录缓冲液

　　※：用地高辛或生物素标记时，用UTP替代。

　　3．标记终止液

　　4．标记探针水解液

　　先用dH₂O悬浮探针，再加入后两种试剂，轻轻振摇混合，于60℃条件下反应。

　　5．探针水解时间

　　注：L_O－探针初始长度（kb)

　　L_f－探针的终长度（kb)

　　K－0.11kb/min

　　6．探针水解终止液

　　每次加入充分混合，临用前配。

　　7．探针沉淀液

　　每次加入，充分混合，新鲜配制。

　　（二)寡聚核苷酸3’端标记（cRNA探针)

　　1．标记反应液

　　2．终止液：0.2mol/L EDTA

　　3.探针沉淀液

　　（三)cRNA探针非同位素标记（地高辛及生物素)

　　1．标记液

　　△：生物素标记时为10mmol/L的生物素-11-UTP

　　※：为检测标记率而加。

　　2．转录标记终止液

　　（1)0.2mol/L EDTA：用于地高辛标记法

　　（2)生物素标记终止液：

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