作者单位：深圳市横岗人民医院，广东 深圳 518115
【摘要】 目的：探讨慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞凋亡信号蛋白的表达情况及临床意义。方法：提取35例慢性乙型肝炎患者和35例健康人外周血单核细胞，应用流式细胞术分析慢性乙型肝炎患者外周血Th细胞凋亡信号蛋白Fas、FasL和Bcl2表达情况。结果：慢性乙肝患者Th细胞Fas、FasL表达明显高于健康对照组（P<0.05)，但Bcl2表达在两组间差异无统计学意义（P>0.05)。结论：外周血Th细胞凋亡异常可能与慢性乙型肝炎患者细胞免疫效应低下及疾病发展相关。
【关键词】 慢性乙型肝炎；辅助性T细胞；凋亡蛋白
Analysis and clinical significance of expression of apoptotic related proteins on peripheral blood Th cell in chronic hepatitis B patients
LUO Zujun,LI Yanhua
The People’s Hospital of Henggang,Shenzhen，Guangdong 518115，China
Abstract： Objective To explore the expression of apoptotic related protein on peripheral blood Th cells in chronic hepatitis B and evaluate its clinical significance. Methods Peripheral blood monocytes were separated from 35 healthy persons and 35 patients with chronic hepatitis B and its apoptotic related proteins Fas, FasL and Bcl2 were detected by FCM. Results The expression of Fas, FasL on Th in chronic hepatitis B patients is higher than that on healthy controls（P<0.05), while the difference of Bcl2 between patients and controls is no statistic significance（P>0.05).Conclusion The high expression of apoptotic related protein Fas, FasL on Th in chronic hepatitis B patients enhances the apoptosis of Th cells,which leads to lower cell immunity function and negative progress of patients.
Key words： Chronic hepatitis B; Th cell; Apoptosis proteins
乙型肝炎是一种免疫相关性疾病，HBV感染机体后并不直接对肝细胞造成损伤，是通过诱发机体免疫效应间接损伤肝细胞。同时，乙肝病毒得以清除，这种免疫反应要是通过淋巴细胞亚群的改变，CD4+T细胞数量和功能的改变是其中重要的环节［1］。本文通过检测慢性乙肝患者CD4+T细胞凋亡相关蛋白表达情况，探讨慢性乙肝患者细胞免疫功能状态，分析它们在慢性HBV发病中的临床意义。
1 资料与方法
1.1 病例资料
35例慢性乙型肝炎均为我院2006年7月至2007年5月间收治的患者，年龄18岁～62岁，平均年龄42岁，其中男性18例，女性17例。根据2000年第十次全国病毒性肝炎会议标准诊断［2］。对照组为健康人，年龄17岁～65岁，平均年龄43岁，其中男性20例，女性15例。
1.2 主要试剂及仪器
淋巴细胞分离液购于AXISSHIED公司、流式细胞仪为Beckman EPICSXL型，PECD4抗体购自BD公司,FasFITC、FasLFITC和 Bcl2FITC抗体 购自Santa Cruz公司。
1.3 方法
无菌采集患者和健康人外周静脉血5 ml，肝素抗凝，以淋巴细胞分离液分离得淋巴细胞，溶血素溶解细胞，经T细胞分离富聚柱得纯化的T细胞，然后用PBS洗涤并调整至1×106/ ml，分别加入FasFITC/CD4PE, FasLFITC/CD4PE和Bcl2FITC/CD4PE两组单抗，放置30 min后，上流式细胞仪，分析每管10 000个细胞，小鼠抗人单克隆IgG1FITC作为阴性对照管，得出Fas、 FasL和Bcl2蛋白表达的百分率。
1.4 统计学处理
全部数据均经SPSS10.0统计学软件分析，计算各组均数和标准差，用±s表示，组间差异用t检验分析。
2 结果
由下表可见，慢性乙型肝炎CD4+T细胞Fas、FasL与健康对照组相比差异有统计学意义（P<0.05)，而慢性乙型肝炎患者CD4+T细胞Bcl2表达与健康对照组差异无统计学意义（P>0.05)。表1 慢性乙型肝炎患者Th细胞Fas、FasL和Bcl2表达情况（略)注：与健康对照比较*P＜0.05;△P＞0.05。
3 讨论
慢性乙型肝炎是临床常见病，目前认为其与宿主机体免疫状态特别是细胞免疫功能失调密切相关［3］。CD4+T细胞主要代表辅助性T细胞(Th细胞),它对B细胞、细胞毒性T细胞（CTL)及其他免疫细胞的增殖和分化具有促进作用。有研究表明，慢性乙肝患者外周血CD4+T细胞绝对数和相对数（CD4+/CD8+)都明显降低［4］，这意味着CD4+T数量和质量的异常在慢性乙型肝炎进展中起重要的作用。www.med126.comFasL是表达于活化免疫细胞的膜分子，它与相应受体结合，通过FasFasL信号途径可介导细胞凋亡，而Bcl2是体内重要的抗凋亡蛋白分子，能阻断凋亡信号传递的最后通路而抑制凋亡。所以，这两种凋亡蛋白表达在一定程度上调节体内CD4+T细胞的数量和功能，但是该蛋白在慢性HBV患者体内的表达情况尚未完全明确。
我们研究结果显示慢性乙肝患者CD4+T细胞表面Fas、FasL的表达显著高于健康人群，而Bcl2在两组间差异无显著性。这可能是由于乙肝患者体内活化的CD4+T细胞增多，细胞免疫活性上调，但免疫效应的结果是在清除病毒感染的同时，通过FasFasL途径诱导Th细胞凋亡，也就是活化诱导凋亡（AICD)方式，促使患者免疫调节失衡，细胞免疫紊乱，这或许是慢性乙肝患者CD4+T细胞数量下降的潜在机制。
FasL是T细胞活化的标志之一，因此Th细胞表面FasL的表达可能与慢性HBV的病情密切相关。在慢性HBV患者外周血CD4+T细胞表面FasL表达量和细胞数量结合起来可能有如下几点临床意义：细胞数量正常，FasL表达量上升表明机体针对乙肝病毒免疫力增强，病情较轻；细胞数量下降而FasL表达量增加，表明机体免疫系统在对乙肝病毒实行细胞免疫同时，引起自身凋亡，导致效应细胞数量减少；细胞数量和FasL表达量均下降，说明效应细胞数减少且细胞免疫功能低下，病情有可能恶化［5］。
因此，我们可以通过检测慢性HBV患者外周血CD4+T细胞的数量及其凋亡相关蛋白Fas/FasL的表达来预测病情的发展，为临床诊断与治疗提供实验依据。
【参考文献】
［1］Maini MK, Boni C, Lee CK, et al.The role of virusspecific CD8+cells in liver damage and viral control during persistent hepatitis B virus infection［J］.J EXP Med,2000,191:12691280.
［2］中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝病学分会.病毒学肝炎防治方案［J］.肝脏,2000,5:257263.
［3］王敏,王福生,刘敬超.慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群与病程相关性研究［J］.肝脏,2003,8:1820.
［4］杜美华,高涛,王介非，等.从淋巴细胞亚群绝对值探讨慢性乙型肝炎细胞免疫［J］.肝脏,2006,8:260261.
［5］俎燕会，陈士俊.慢性乙型肝炎患者外周血T淋巴细胞凋亡变化及其意义［J］.山东医药,2006,46(11):7475.
