作者：张庆侠，郝建华，倪琳婷，程琼，周天祥
作者单位：深圳市第六人民医院，广东 深圳 518052
【摘要】 目的：比较经典法、改良法和微柱凝胶法抗人球蛋白试验检测孕妇血清中IgG抗A（B)效价的差异。方法：用经典法、改良法和微柱凝胶法分别检测136例孕妇血清中IgG抗A（B)效价 ，计算其阳性率，再以经典法为标准计算改良法和微柱凝胶法的特异性和敏感性。结果： 经典法、改良法和微柱凝胶法检测孕妇血清中IgG抗A效价的阳性率分别为22.8%、25.0%和33.8%，IgG抗B效价的阳性率分别为19.1%、20.5%和31.6%。与经典法比较,改良法敏感性为98.1%，特异性为96.3%；微柱凝胶法敏感性为100%，特异性为63.4%。经统计学比较，,改良法和经典法的阳性率无统计学意义（P>0.05)，而微柱凝胶法阳性率明显高于经典法（P<0.01)。结论：改良法和经典法检测孕妇血清中IgG抗A（B)效价的结果具有良好的一致性 ，而微柱凝胶法阳性率明显高于经典法，需重新设定临床意义决定值。
【关键词】 孕妇；IgG抗A（B)效价；抗人球蛋白试验；经典；改良；微柱凝胶
Comparing the Results of the Determination of AntiA(B) IgG Titers with Three Assays in the Pregnant Women
ZHANG Qingxia，HAO Jianhua，NI Linting，CHENG Qiong,ZHOU Tianxiang
The Sixth People’s Hospital of Shenzhen，Shenzhen,Guangdong 518052,China
Abstract:Objective To study comparatively the different of microcolumn gel(MCG),improvement and classic Coombs，test in the determination of antiA(B)IgG titers of the pregnant women.Methods Sera were obtained from 136 pregnant women，AntiA(B)IgG titers were determined respectively by the MCG，improvement and classic Coombs，test .The positive rate，sensitivity and specificity of three assays were evaluated.Results The positive rate of antiA IgG titers with MCG，improvement and classic Coombs，test were separately 33.8%、25.0% and 22.8% ,that of antiB IgG titerswere respectively 31.6%、20.5% and 19.1% in the pregnant women. The positive rate of antiA(B) IgG titers with improvement and classic Coombs，test were not different（P>0.05);The positive rate of antiA(B) IgG titers with MCG were significant higher than classic one(P<0.01). Thesensitivity and specificity of improvement Coombs，test were separately 98.1% and 96.3% comparing with classic one and the same of MCG were respectively 100% and 63.4% .Conclusion The improvement and classic Coombs，test showed good agreement in their result ,but MCG has higher positive rate than classicCoombs，test ,which is necessary to decide reference value ofits results.
Key words:Pregnant women;AntiA(B)IgG titers;Coombs test;Classic；Improvement;Microcolumn gel
母儿ABO血型不合，激活母体免疫系统，产生对胎儿红细胞抗原的特异抗体，其中IgG抗A（B)抗体是引起新生儿溶血病（HDN)的主要原因之一。临床上常用经典抗人球蛋白法(经典法)检测血清IgG抗A（B)抗体预测HDN发生的可能性［1］，此方法操作复杂且耗时长,限制了临床的应用。近年来改良抗人球蛋白法IgG抗A（B)抗体测定试剂合(改良法) ［2］和微柱凝胶抗人球蛋白法(微柱凝胶法) ［3］的应用使此种检测变的简单、快速,但目前这些方法的一致性尚未见系统报道。本文利用经典法、改良法和微柱凝胶法分别检测孕妇血清中IgG抗A（B)效价，用统计学分析三种检测方法的差异，报道如下。
1 资料与方法
1.1 对象
来自我院产科门诊孕20周以上夫妇ABO血型不同的O型孕妇136例,年龄19岁～38岁,平均年龄(28.6±4.0)岁。
1.2 材料
抗A抗B血型定型试剂,抗人球蛋白试剂为上海血液生物医药有限责任公司产品； 改良抗人球蛋白法IgG抗A（B)抗体测定试剂盒由深圳市伯劳特生物制品有限公司提供；抗人球蛋白微柱凝胶卡和西班牙戴安娜半自动血型系统由北京斑珀斯技贸有限公司提供。
1.3 方法
取O型孕妇静脉血，分离血清，分别用经典法、改良法和微柱凝胶法检测IgG抗A（B)效价。
1.3.1 经典法
按照全国临床检验操作规程第三版［IgG抗A（B)测定］的方法检测［4］。
1.3.2 改良法
按IgG抗A（B)抗体测定试剂盒使用说明书检测。
1.3.3 微柱凝胶法
按抗人球蛋白微柱凝胶卡使用说明书操作。
1.4 统计学分析
样本阳性率的差异采用χ2检验。
2 结果
按照经典法检测结果，IgG抗A（B)效价≤32为阴性，≥64为阳性［5］，则经典法、改良法和微柱凝胶法检测136孕妇血清IgG抗A效价的阳性率分别为22.8%、25.0%和33.8%；IgG抗B效价的阳性率分别为19.1%、20.5%和31.6%。经χ2检验，经典法和改良法阳性率无明显差异（P>0.05)，而微柱凝胶法阳性率明显高于经典法（P<0.01)，见表1。表1 三种方法检测136例孕妇血清IgG抗A(B)效价的比较（略)注：*改良法与经典法比较P>0.05；△微柱凝胶法与经典法比较P<0.01。
在经典法检测阳性孕妇54例中,改良法检测53例呈阳性，1例呈阴性；微柱凝胶法检测54例均呈阳性。经典法检测阴性孕妇82例中，改良法检测79例呈阴性，3例呈阳性；微柱凝胶法检测52例呈阴性，30例呈阳性。以经典法为标准，改良法的敏感性为98.1%(53/54)，特异性为96.3%(79/82)，www.med126.com见表2；微柱凝胶法的敏感性为100%(54/54)，特异性为63.4%(52/82)，见表3。表2 改良法与经典法检测136例孕妇血清IgG抗A(B)效价的比较(略)表3 微柱凝胶法与经典法检测136例孕妇血清IgG抗A(B)效价的比较(略)
3 讨论
ABO抗原在自然界存在较广，孕妇在妊娠前可能已接受了不同程度的A（B)类抗原的刺激产生血型抗体， O型的血型抗体含有较多的IgG，它可以通过胎盘进入胎儿血液，使红细胞致敏引起新生儿溶血和黄疸，临床上通常检测孕妇血清IgG抗A（B)效价预测HDN可能性［6］。据文献报道当IgG抗A（B)效价＜64时，很少发生HDN，随着IgG抗体效价升高，HDN发生率明显增加［7］。但目前检测孕妇血清IgG抗A（B)效价的方法较多，各种方法的敏感性不同，造成同一标本用不同检测方法结果差异较大，给临床诊治带来困难。
抗人球蛋白试验是由英国免疫学家Coombs于1945年发明,用于检测Rh血型的不完全抗体,又称Coombs试验。其原理是IgG类免疫球蛋白多以单体形式存在，它只能和一个抗原相结合，而不能把几个抗原联合起来，故在盐水介质中不表现凝集反应；另外，IgG分子较小，无法克服红细胞膜之间的相互排斥距离，故不能将二个邻近的红细胞架接起来，但若将抗人球蛋白血清加到吸附了半抗体的红细胞悬液中，抗人球蛋白便起到一种桥梁作用使致敏红细胞发生凝集，从而显示不完全抗体的存在。到目前为止，此试验仍是国际上公认的检测孕妇血清IgG抗A（B)效价的经典方法，根据其测定的结果，将IgG抗A（B)效价大于或等于64作为临床意义决定值预测HDN可能性已普遍得到学者的认可［8］，但此方法操作繁锁,耗时长，需要实验室自配试剂，不便于临床应用。
改良法是在经典法基础上，用二硫苏糖醇替代巯基乙醇裂解IgM分子，使裂解时间从2 h减至30 min；用低离子介质促进IgG抗体致敏红细胞使致敏时间从1 h减至30 min；用抗人IgG代替广谱的抗人球蛋白试剂提高抗原抗体反应的特异性。本文结果显示，与经典法比较，改良法敏感性为98.1%，特异性为96.3%，两者的结果具有良好的一致性，而且改良法明显缩短了操作时间，又有统一的商品试剂盒，便于临床普及。
微柱凝胶技术由法国科学家Lappierre于1986年发明,1994年获得美国FDA认证，目前在许多发达国家已作为常规技术应用于红细胞血型鉴定、交叉配血、抗体筛查和HDN的检查。其原理是利用红细胞在凝胶微柱中的移动来指示肉眼所不能见的红细胞与相应抗体发生的血清学反应。检测时首先将待检血清用巯基乙醇裂解IgM抗体，然后和A(B)型红细胞混合加在凝胶微柱上部反应,待检血清中IgG抗A（B)就会与相应红细胞结合，再与凝胶中抗人球蛋白结合形成凝集反应，经离心后观察：凝集的红细胞被阻挡在微柱中凝胶的上部或中央，判断凝集反应阳性；未被抗体结合的红细胞能通过凝胶的缝隙到达微柱的底部，判断凝集反应阴性。因其操作简单，实验中不用洗涤红细胞，减少了生物污染，保障了操作人员的安全，而且可以实现自动化操作和电脑化管理。本文结果显示，与经典法比较其敏感性为100%，而特异性仅为63.4%，假阳性率达36.6%。李建新等［9］用微柱凝胶法和传统试管法（经典法)平行检测53例O型孕妇IgG抗A（B)的平均抗体效价为160和45，前者比后者高3.56倍，两法差异非常显著（P<0.001)，提出微柱凝胶法灵敏度过高，需对其决定值进行界定。吴定昌等［10］用微柱凝胶法检测201例孕妇，IgG抗A（B)抗体效价≥64的阳性例数为164例，总阳性率为81.6%，认为微柱凝胶法比传统试管法检测IgG抗A（B)效价高，结果更敏感（P<0.01)，通过回归方程计算，微柱凝胶法临床意义决定值的效价为138。可见微柱凝胶法用于检测IgG抗A（B)抗体效价需重新设定临床意义决定值，以免给临床造成误诊。
综上所述，改良法和经典法检测孕妇血清中IgG抗A（B)效价的结果具有良好的一致性 ，而微柱凝胶法阳性率明显高于经典法，需重新设定临床意义决定值。
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［10］吴定昌，江慧.微柱凝胶法检测201例孕妇AB0血型抗体效价结果分析［J］.江西医学检验，2007，25(1):97,82.
