尿液有形成分检查是最常用的尿液常规检查项目之一。UF-100流式尿液有形成分分析仪除能计数RBC、WBC数量外，还能给出红细胞均一型、非均一型和混合型等实用信息，对沁尿系统疾病的诊断、鉴别血尿来源具有重要临床应用价值。但普遍存在的现状是尿液从采集到用UF-100检测，往往需要3-4h，甚至更长，我们在实际工作中发现尿液随放置时间延长，RBC数量和形态会发生改变。本研究对尿液放置时间是否对RBC检测信息产生影响进行试验观察。
一、材料与医师招聘方法
1．材料：(1)标本来源：选择血尿标本(UF-100测定RBC数>25/μl)359例。其中经肾穿刺活检、泌尿系统检查及详细病史确诊为肾小球病变138例(包括急、慢性肾小球肾炎，肾功能不全，肾病综合征，IrA肾炎等)，非肾小球疾病40例(包括尿路感染、输尿管结石、泌尿系统肿瘤等)，泌尿系统出血原因待查181例。
(2)仪器：流式尿液有形成分分析仪UF-100(日本Sysmex公司制造)及配套试剂(稀释液A5015、鞘液G6004、双色荧光染料A6002)、质控品uF-CHECK、Olympus普通光学显微镜和相差显微镜。
2．方法：(1)用Sysmex的质控品对仪器进行室内质控测定，合格后进行常规标本测定。(2)留取新鲜尿液30m1分置3个专用试管内，充分混匀，室温2O℃一25℃下检测及存放。于即时、2h、4h时，分别对每份标本进行测定。记录RBC计数及各项参数结果。(3)留取新鲜尿液10ml于刻度离心管中，用标准离心机400×g离心5min，弃去上清尿。残留0．2ml，摇匀，用相差显微镜观察尿液红细胞形态，计数变异RBC百分比。
3．统计学分析：采用SPSS11．5统计软件对数据进行统计学分析，应用t检验，判断标本在室温条件下放置时间对检测RBC计数及其相关参数的影响。P<0．05为差异有统计学意义。
二、结果
1．室温条件下尿液放置时间对鉴别血尿来源结果的影响：以肾穿刺活检和临床综合诊断结果为金标准，判断肾病组和非肾病组尿液标本在室温条件下放置时间对检测RBC变异型信息提示的影响，并计算敏感度和特异度，见表1（省略)。即刻、2h和4h诊断RBC变异型信息的敏感度分别为94．9％、85．5％和82．6％；特异度分别为82．5％、82．5％和70．0％．室温条件下尿液放置时间对检测RBC计数及其相关参数的影响：用UF-100测定359例标本，根据RBC信息提示结果将标本分为非均一型血尿组、混合型血尿组和均一型血尿组，分析尿液标本在室温条件下放置时间对UF-100检测RBC计数及其相关参数的影响，见表2。
以新鲜尿液即时检测结果为标准，标本在室温条件下放置时间，对非均一型RBC组的影响较大，RBC计数结果在放置2h时就有改变，与即刻结果比较，差异有统计学意义(t=4．49，P<0．01)；反映RBC横截面积大小的P70-Fsc参数和RBC形态大小变异程度的Fsc-DW参数随放置时间延长而降低；Non1ysedRBC％为未溶解RBC百分比，是指具有较高前向散射光强度的RBC比例，正常情况下仪器对NonlysedRBC％值的要求是不低于20％，否则判为检测结果不可靠，需人工复检，结果表明随时间延长该值逐渐降低(t=13．11，P<0．01)，说明RBC在放置过程中有部分溶解和破坏。243例非均一型血尿组标本即时检测时只有1例NonlysedRBC％值<20％，放置2h时增至19例，NonlysedRBC％最低值为7．4％；放置4h时增加至20例，其中有4例Non-lysedRBC％值<5％，最低值为0．4％。混合型血尿组各参数的变化也有类似的表现，但其程度较非均一性组低。对均一型血尿组，除Fsc-DW参数差异有统计学意义外(t=3．31，P<0．05)外，其余参数差异均无统计学意义。提示放置时间对非均一型红细胞的影响较均一型红细胞更敏感。
三、讨论
“肾小球性”与“非肾小球性”血尿的鉴别对各种泌尿系统疾病的诊断和治疗具有十分重要的意义，因为二者的病因完全不同，采取进一步检查和治疗的原则亦不同。来源于肾小球的RBC在体内因血管内压力而受损，在肾小管各段又受不同渗透压和
pH值作用，红细胞多为非均一型(大小不一、形态多样、影红细胞等)，容积变小，甚至有破裂。这些细胞在离体后随放置时间延长，其数量和形态的变异性会因尿液渗透压、pH值和溶质成分的变化而进一步发生改变，另外细菌的大量繁殖也会促使其变化J，尿结晶形成的增多也会导致仪器误认，以至于给出错误的信息。本实验结果证实：UF-100对肾小球血尿诊断敏感度随放置时间的延长有所下降，从即时检测时的94．9％降为2h时的85．5％，4h时的82．6％。非肾小球来源的血尿，因其红细胞未经过肾小球滤膜挤压损伤，在肾小管滤液中流经的时间也短，受滤液、pH值和渗透压变化的影响较小，因此红细胞形态基本保持一致或变化较小，尿液排出后放置4h，其数量和形态的改变尽管不大，但也有12．5％(5／40)的RBC信息提示从均一型转向混合型甚至非均一型，这部分标本经再次留取新鲜尿液复查，并结合相差显微镜检查，其变异RBC％值<40％，证实为均一型RBC。
RBC Fsc-DW参数反映RBC形态大小和变异程度，当大小不等、形状不同的RBC增多时，Fsc-DW值就变大，反之则变小。RBC均一型血尿组标本在放置2h后，Fsc-DW值逐渐升高，说明这时体系中RBC处于大小不一、形态不等的状态，尤其是有菌尿和(或)结晶存在的情况下，尿中RBC更易变形，且体积往往变小，结晶的产生也常被仪器误认，致使给出错误的RBC信息提示，这将直接导致临床的误诊。有研究报道对于这些改变可以通过观察RBC-MFL及RBC-FLDWSD参数值是否偏高来判断仪器对RBC提示信息是否可靠，因为RBC没有细胞核，荧光强度低，而细菌和结晶的荧光强度较RBC强。RBC非均一型血尿组组和混合型血尿组标本在放置2h后，Fsc-DW值逐渐降低，说明这时体系中RBC的变异性有所减少。我们对这部分标本用相差显微镜观察，有部分标本的变异RBC数减低，新鲜尿液即时观察时所见的变异型RBC(棘形、锯齿形、环形、口形、裂形等)在室温放置2h以后，有些消失不见，而出现较多影红细胞、红细胞碎片等，可能原因是尿液在存放过程中受多种因素的影响，如尿pH值、比重、利尿剂的应用(尿液稀释渗透压过低)、尿素分解形成碱性尿等，致使变异的RBC部分溶解、破裂或释出血红蛋白而成为影红细胞，有些轻微皱缩变形的红细胞因肿胀而变成形态正常红细胞，此时用仪器检测，RBC的形态变异性减低，RBC计数结果降低，Non．1ysedRBC％值降低，RBC提示信息改变。
尿液标本在室温中放置，会造成UF-100对尿红细胞提示信息改变、尿RBC参数改变，其中对非均一性RBC的影响较均一性RBC更敏感。鉴于此，使用UF-100检测尿液RBC参数时，尿液必须新鲜，且在2h内完成。按照多数医院的工作规律，患者清晨6时留取晨尿，8时送至检验科，加上标本检测的前序工作，到上机检测完毕，最快也要3～4h，这一问题不解决，会直接影响UF-100尿液RBC的检测质量。
