如果在测定活性之前所贮的样品酶活性有了降低,无论所用的仪器如何先进,也不能获得准确的结果。在适当的条件下酶会失活,因而必须强调在收集样品之后应尽可能快速测试酶活性,最好当天进行测定。关于酶样品的贮存与医学网处理应注意以下几点:
1.酶活力测定最常用的样品是血清或血浆。制备血浆所用的抗凝剂可抑制某些酶的活性,如E DTA 能抑制A LP ,草酸盐抑制LDH ,肝素对CK 及某些其他酶有轻微的抑制作用,故一般样品以血清为佳。
2.多数血清酶以较高浓度存在于红细胞、白细胞或血小板中。因此分离血清时应注意避免溶血。
3.光照对C K 活性有抑制作用,因此,主张C K 测定的血清应贮存于4 ℃ 的暗处,测定时应该注意避光。
4.由于血清白蛋白对酶蛋白有稳定作用,在它的存在下,某些酶(如转氨酶)在室温下可保存1~2 天而无明显失活。
5.有些酶由于自身的特性,在贮存时需特别加以注意。例如L DH 同工酶(L DH 3 、LDH 4 、LDH 5) 在冰箱保存不稳定,在室温反而稳定时间较长,所以测定L DH 活力的血清样品,应置于室温下,2~3天内可保持稳定,不能存放冰箱过夜。
6.由于酶很容易发生表面变性,因此在操作时应避免形成泡沫。
7.巯基(-SH )对于大多数酶来说是十分重要的,可能起如下几方面的作用:① 参与催化;② 和底物结合;③ 组成变构部位;④ 维持酶的三级或四级结构。因此,使巯基保持天然状态是使许多酶稳定化的最重要的条件之一,基于这个理由,在酶的活性测定、抽提、制备以及保存过程中,常可添加-S H 保护剂,如半胱氨酸、谷胱甘肽、2-巯基乙醇、二硫苏糖醇、二硫赤藓糖醇等。