溶组织内阿米巴培养方法

当受检者疑有溶组织内阿米巴感染，而直接粪便检查为阴性时，可作阿米巴人工培养，培养方法有常规培养、有菌培养和无菌培养。

（一) 常规培养

取脓液、粘液处稀便0．5 ml，或黄豆大小的成形便，直接接种至试管内与开云app安装不了怎么办 网培养液混匀；或将粪便自然沉淀后，取沉淀物0．5 ml 接种至试管内。置试管于37℃温箱中培养，培养后24小时、48小时、72小时取培养液中的混浊部分涂片镜检， 查出虫体即可确诊。

常用的培养基有营养琼脂双相培养基和洛克氏液鸡蛋血清培养基：

1．营养琼脂双相培养基

分固相和液相两部分：

（1) 固相部分：牛肉浸膏3g，蛋白胨5g，琼脂15g，NaCl8g，蒸馏水1000 ml。

（2) 液相部分：NaCl 8g，KCl 0．2g，CaCl₂ 0．2 g，M gCl₂ 0．01g，Na₂HPO₄ 2g，KH₂PO₄ 2g，蒸馏水1000 ml 。

配制液相部分，KCl 和CaCl₂各加少许蒸馏水分别另装小瓶，高压灭菌（121℃，20 min)，冷却后再合并在一起。固相部分的各成分经沸水浴2～3 小时完全溶解后（若有残渣，须经4层纱布过滤除渣)，趁热分装试管，每管5 ml，加棉塞，高压灭菌后置成斜面，冷却后放入4℃ 冰箱备用。接种前每管加液相部分4．5 ml，灭活小牛血清0．5 ml，米粉20 mg（180℃烤箱消毒3次)，青霉素、链霉素各1000 U／ml 。

2．洛克液鸡蛋血清培养基

培养基成分：洛克液70 ml，灭活马血清（每管0．5 ml)，米粉（每管20 mg)，鸡蛋4个。先配制洛克液：NaCl 9．0g 、CaCl₂ 0．2g、KCl 0．4g、NaHCO₃ 0．2g、葡萄糖2．5g、蒸馏水1000 ml，高压灭菌（110℃，15 min)。鸡蛋用肥皂水刷洗，再用70％酒精抹洗后，破壳装入有70 ml洛克氏液烧瓶内，加玻璃珠充分摇动，分装至消毒试管内，每管约5 ml，斜置并加热至70℃ 1h使之凝固为斜面，翌日再高压消毒20分钟。接种前每管加洛克液4．5 ml，马血清0．5 ml，无菌米粉20 mg，青霉素、链霉素各1000 U／ml 。

（二) 有菌培养（共生培养)

在含有琼脂斜面的6 ml 有螺旋盖的培养管中加入10 mg米粉、120μl红霉素液和足够遮盖斜面量的邻苯二甲酸氢钾（50 mmol，pH6．3，115℃ 20 min高压灭菌)和BRS液4∶1混合液，加入约50 mg粪便、混匀。37℃培养24小时，倾去培养上清液，再加入适量4∶1 混合液、少量米粉和60 μl 红霉素液。37℃再培养48小时后，取米粉与粪渣混合物一滴，以碘液染色或直接观察有无滋养体。若未发现虫体，再加入米粉后，继续培养24小时。若有虫体可将少量培养混合液转入新鲜培养基中继续转种培养。这种有菌培养方法也可培养结肠内阿米巴、微小内蜒阿米巴和哈门氏内阿米巴等多种阿米巴。其培养基组成是：

1．琼脂斜面

15g 琼脂和7．5g 氯化钠溶于1000 ml 蒸馏水中，取1．5～2 ml 盐水琼脂置于6 ml 培养管中高压灭菌（121℃，15 min)，当冷却至75℃左右倾放使其形成斜面。

2．红霉素溶液

在无菌容器中加入20 ml 70％酒精、再加0．5g 红霉素粉剂溶解后，在4℃放置2小时以上，然后加灭菌水至50 ml 。

3．米粉

大米粉高压消毒（121℃，30 min) 或180℃干燥灭菌。

4．BRS 溶液

NaCl 50g 、（NH₄)₂SO₄ 10g、柠檬酸（2H₂O)20g、MgSO₄（7H₂O)0．5g、KH₂PO₄ 5g、乳酸（90％纯度)4 ml，加水至950 ml，调节p H 至7．0，最终调节容量至1000 ml，分装高压灭菌，制备成贮存液。使用时将100 ml 贮存液加入850 ml 双蒸水，调节p H7．0分装高压灭菌，即为R溶液工作液。25 ml R溶液工作液与1个克隆大肠杆菌，37℃ 振摇培养48小时，即为BR溶液。在BR溶液中加入等量血清（56℃ 30 min灭活的牛或马血清)，继续培养24～48小时，即为BRS溶液。

（三)无菌培养（纯种培养)

无菌培养主要用于溶组织内阿米巴的克隆培养，是在有菌培养的基础上，将虫体转种至无菌培养基中，使其逐渐转为无菌培养，并可进一步克隆化。由于虫体对培养基的要求甚高，难度较大，一般不用于临床检验。