Hitachi 7170A全自动生化分析仪是日立公司系列仪器之一,由于其质量稳定,故障率低,目前在国内使用较广。从2002年开始,仪器开始配备离子选择电极(ISE)模块。ISE试剂由稀释液、参比液和内标液组成,采用间接测定法检测离子,结果准确可靠。常规工作中,使用ISE测定的样本量较多,内标液耗量很大,远高于稀释液与医生招聘网参比液,但原装配套试剂价格高昂。因此,为降低检验成本,本文作者研制ISE的内标液,经过几个月的测试和验证,试剂稳定性好,结果可靠。
ISE已在临床生物化学领域得到十分广泛的应用,可分为直接测定法与间接测定法两种。大型生化分析仪上的ISE模块多用间接电位法检测:样本与标准液要用指定离子强度和pH值的缓冲液作定量稀释,再进入电极管道,测量其电位,应注意问接ISE法与直接ISE法相比结果会偏低,因为在做间接ISE法时,将一定量体积的总血浆进行稀释,而实际上只有93% 的血浆水(含有电解质)加到稀释液中。目前检测项目一般是K+、Na+、C1-。需要用到3种试剂:参比液、内标液、稀释液。仪器还需要使用外部标准液定标,质控液做质控,以及清洗液保养。内标液是ISE试剂重要组成部分,其主要作用是抑制偏差产生。分析开始后,内标液先加入稀释槽中,吸到流路测定其相对参比电极的电位,反应后期被加到稀释槽清洗稀释槽。这样,被测液体经常与内标液同时测定,以内标液为基准进行修正。
本研究是根据ISE测定K+、Na+、C1-的原理,选择NaC1、KC1和NaHCO3配制内标液的无机离子浓度和渗透压。由于常用的盐酸、硫酸等对离子浓度会造成影响。因此,采用甲醛作为防腐剂。实验结果证明,对结果无影响。BIS-Tris常用于蛋白电泳的缓冲系统,组成不连续液系统,对蛋白质的分辨率比连续液获得的要高。本研究中BIS-Tris和硼酸组成内标液的缓冲系统,一方面调节pH值,另一方面是内标液主要的离子强度调节剂。另外,考虑内标液离子浓度不高,对溶液的pH值、渗透压及防腐剂要求较高,由于电极反应性受标准液pH值、离子强度、渗透压等的影响,所以配内标液时,要加适量的磷酸盐,可作为稳定剂,使自配内标液和原装内标液在pH值、冰点渗透压、电极反应性完全一致,保证结果的准确性。
考虑本研究中内标液的改变是检测系统的改变,因此初步做3种基本的性能评估:精密度、准确度和可报告范围。结果显示,自配内标液的pH值、电导率、渗透压、无机离子与进口原装内标液基本一致;精密度评估中自配内标X靶、s和CV与原装内标液非常接近;准确度评估两者数据无差异(P>0.05);线性评估中可直接判断该测定方法可报告范围在实验已涉及范围,说明白研试剂评估选用的线性范围与仪器ISE的设计要求一致,能满足临床需求。实验证明,自配内标液所测结果准确、可靠、精密度高、稳定性好,完全可以代替原装内标液,大大降低成本,同时也为同类仪器的其他试剂的开发提供线索和参考。