突发性细菌性食物中毒事件时有发生，如何快速、准确地检测病原微生物致关重要。开展模拟食物中毒的室间质控工作，既锻炼了各级卫生检验工作者的快速反应能力，又提高了卫生检验的质量，可保证结果的快速、准确和科学。现将本次质控考核检验及相关问题报告如下。
1.材料与医.学全在线方法
1.1 材料
1.1.1 质控考核盲样机井水样1份(已染菌)，要求做细菌分离鉴定。
附流行病学调查资料：某月下旬，某建筑工地陆续出现腹泻病人，其主要症状为头痛、发烧(38～40℃)、呕吐、腹痛、腹泻(多为黄绿色水样便)，严重者有粘血便。现场调查，建筑工地使用自备机井水。曾有一急性胃肠炎病人，其沾有呕吐物和粪便的衣物用具曾在井边清洗。其后一场暴雨，3天后工地出现首例病人。
1.1.2 试剂 培养基：由杭州天和微生物试剂有限公司和杭州微生物试剂厂生产。微量生化鉴定管：由北京陆桥技术有限责任公司生产。诊断血清：由兰州生物制品研究所生产。API20E生化鉴定基条：由法国梅里埃公司生产。上述各种试剂均在有效期内。
1．2 方法按照中华人民共和国国家标准GB/T 4789-2003《食品卫生检验方法微生物学部分》和《全国临床检验操作规程》第2版微生物学检验进行，同时作室内质量控制，保证检验结果的准确可靠。
2..结果
2.1 病例讨论根据流调资料提供的病史、临床症状、粪便颜色、发病时间等，可排除霍乱弧菌、球菌和病毒污染机井水的可能。
2.2 增菌培养根据病例讨论，再结合水样沉淀涂片G染色为G-杆菌，故选择1% NaCl肉汤、GN、SF、氯化钠、结晶紫4种增菌培养基增菌，经(36±1)℃、22小时培养后观察，结果见表l。
2.3 分离培养 将增菌后1％NaC1肉汤转种普琼、血平板、EMB、MAC、HE、KS、TCBS各种培养基，经(36±1)℃ ．22 h培养后观察菌落生长情况，结果见表2。
2.4 形态学检查挑取各平板上不同菌落特征的单个菌落分别涂片作革兰染色，镜检可见两种形态，表2中菌① 形态为：G-短杆菌，其两端钝圆；菌②形态为：G-直杆菌。
2.5 初步生化反应
2.5.1 氧化酶试验采用纸片法，菌① 和菌②氧化酶均为阴性(纸片显淡黄色)
2.5.2 接种三糖铁(TSI)和动力靛基质尿素(MlU)培养基将纯培养平板上菌①和菌②分别接种TSI、MIU培养基，经(36±1)℃、22小时培养后观察，结果见表3。从初步生化反应可知：菌①疑为埃希菌属或者志贺菌属细菌；菌②疑为枸橼酸杆菌属或沙门菌属细菌。
2.6 进一步鉴定
2.6.1 血清学试验 菌①仅与肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)中OK多价血清发生强凝集(3+)，进一步与其单价血清028ac∶K73发生强凝集(3+)；菌②不与沙门菌A-F群O多价血清发生凝集反应。
2.6.2 鉴别试验
2.6.2.1 枸橼酸杆菌属与沙门菌属的鉴别试验 菌②作补充生化试验，结果分别为β-半乳糖苷酶(+)，赖氨酸脱羧酶(-)、丙二酸盐(-)，明胶液化(-)，综合考虑菌②为枸橼酸杆菌属细菌。枸橼酸杆菌属种的鉴别菌②作生化试验：侧金盏花醇(-)，并结合丙二酸盐，H2S，靛基质试验结果，可判定菌②为弗劳地氏枸橼酸杆菌。
2.7 系统生化反应制备一定浓度菌①和菌② 的生理盐水菌悬液，分别接种AP120E生化鉴定基条，经(36±1)℃、72小时培养。连续观察结果获得两菌的数码。查AP120E生化图谱索引手册可知：菌①：数码为1144552；菌名为大肠埃希氏菌1型；％id=89.9。T=0.93。菌②：数码为1744552；菌名为弗劳地氏枸橼酸杆菌；％id=98.8，T=0.73。
2.8 最终鉴定结果机井水样中已污染两种细菌。分别为肠杆菌科埃希菌属中EIEC的028ac∶K73血清型和枸橼酸杆菌属的弗劳地枸橼酸杆菌。
3.讨论
细菌性食物中毒是常见的食物中毒类型，我国每年发生的此类中毒事件占食物中毒事件总数的30%～90%。人数占食物中毒总人数的60%～90%。细菌性食物中毒具有全年易发性和发病普遍性的特点，对人群危害性大。加强对此类突发事件的应急处理，提高应对能力和病原菌分离鉴定水平是本次室间质控考核的目的。由于盲样基质为井水，营养条件较差，且样品中细菌量少，实验室收到样品后应及时进行增菌培养，使其恢复生物活性，然后分离病原菌作进一步鉴定。样品的及时处理。同时反映了卫生检验工作者的应急反应能力，为日常工作中快速、准确地检测食物中毒病原菌打下基础。模拟食物中毒事件进行室间质控考核尚属首次。作者认为卫生检验工作者除了具备过硬的微生物检验操作技能外，还必须全面掌握食品卫生检验及医学检验的相关知识。从分析食物中毒的流行特征和病人的临床病史、症状和体征入手，全面考虑污染样品中可能存在的病原菌，合理选择增菌和分离培养基，力求不漏检，提高检出率，并把这一思路贯穿于常规工作中。无论是室间质控考核，还是常规样品检测，都必须有室内质量控制的保证。室内质量控制应有合适的质控频率；应与常规工作一起进行，不能为质控菌株设计单独的操作程序。更不能固定专人操作；当质控标准菌株的内在敏感性发生改变时要及时更换新的菌种。只有这样，才能保证样品处理、细菌染色、培养基和试剂使用、培养条件选择等准确可靠，最终确保样品检测结果的正确无误。本次质控考核样品无背景干扰，而常规工作中样本含杂菌较多。这在一定程度上增加了检测的难度。根据各类食物中毒的流行特征与病人的临床特点，有针对性地采集标本，首先直接涂片染色镜检，筛选出优势菌和非优势菌分别作进一步鉴定，避免分离培养鉴定过程中遗漏病原菌。影响食物中毒样本的检出率。同时。应注意非典型菌株的存在，本次质控样品中菌①即为不产气和乳糖迟缓发酵的埃希氏菌属非典型菌株。
室间质控的目的在于锻炼卫生检验工作者。保证常规工作的快速、准确，尤其是对于食物中毒事件，能尽快为卫生监督执法者提供可靠的实验室依据，最终确保食品卫生的安全性。
