(1)许多实验误差都来源于技术的错误。在实验技术、试剂、温度及PH值上很微小的变化都会导致试验结果明显的变化。孵育时间与检验医学网温度是在一期法凝血酶原时间测定时应严格控制的参数。血浆绝不能在37℃下放置超过10分钟,凝血活酶放置时间也不能超过说明书所规定的时限。
(2)血液凝固主要是酶催化的反应,因此实验过程中要严格控制理想的PH环境和溶液的离子强度。多数常规试验都在处于血液生理PH值缓冲范围的缓冲系统中进行。反应混合物的PH值必须处于7.2-7.4之间。
(3)试验结果准确还取决于所用的反应物的量、加入顺序和不同反应物的孵育时间。如每次APTT实验时,活化部分凝血活酶试剂和血浆混合物的孵育时间必须一致。混匀过程决定了APTT试验中接触活化的量,在孵育时如果将活化部分凝血活酶与血浆混合的技术不佳,将会改变测定结果。
(4)实验前应检查血浆是否有溶血、黄疸、脂血和出现凝块。红细胞膜含有磷脂,溶血标本具有与血小板第Ⅲ因子(磷脂)相似的凝血活性,这种磷脂能缩短溶血血浆的APTT值。标本中如果出现凝块,无论该凝块多么小,均会影响实验结果。
(5)血液与抗凝剂的比例必须相当精确。抗凝剂在血标本的绝对含量可改变血浆中钙离子浓度,进而影响实验结果,一定要注意采血时血浆与抗凝剂的比例。
HCT对枸橼酸钠抗凝血浆APTT,PT的影响
HCT(%) PT(s) APTT(s)
10 10.0±0.58 23.3±3.2
20 10.4±0.17 28.2±1.4
40 11.1±0.66 33.3±4.3
60 13.5±1.46 37.2±4.0
70 14.9±0.98 38.5±3.1
80 52.5±7.74 60.5±10.3