张平 包丽芬 8 中华现代临床医学杂志 2005年9月 第3卷 第18期
【摘要】 目的 掌握HIV特异性抗体检测、质量控制及献血员HIV筛选的基本知识。方法 初筛试验ELISA（双抗原夹心法)和确认实验（免疫印迹法)。结果 HIV抗体确认检测是献血员HIV筛选的重要依据。结论 掌握献血员HIV筛选的基本知识，可为保证输血质量、输血安全提供理论依据。
【关键词】 HIV检测；质量控制；献血员HIV筛选
通过HIV特异性抗体、抗原、核酸及病毒分离检测来确定HIV感染，WHO和我国卫生部推荐使用HIV感染诊断方法，是血清学抗体检测。本实验室选用ELISA夹心法（阿克苏)来进行抗体测定初筛，同时做好实验前、中、后质量控制，来保证整个实验过程工作的可靠性。因此掌握献血员HIV筛选的基本知识，可为保证输血质量、输血安全提供理论依据。
1 HIV检测特殊性和文件管理要求
HIV检测必须严格按国家制定的《艾滋病检测工作管理办法》和《艾滋病检测技术规范》进行，整个实验过程中应有严格的质量保证体系。建立标准操作程序文件（SOP)；建立实验原始记录表；建立HIV抗体检测程序；填写检测结果表；建立标本的登记记录；做好实验前、中、后的质量控制工作。
2 HIV检验目的及主要临床意义
检验目的：通过HIV特异性抗体、抗原、核酸及病毒分离检测来确定HIV感染，WHO和我国卫生部推荐使用HIV感染诊断方法，是血清学抗体检测。（1)HIV核酸检测只能作为HIV感染的辅助性指标，但最终要追踪抗体检测。尤其在感染HIV的窗口期，能及早给予发现HIV感染。主要用于献血员HIV感染窗口期的筛查。（2)P24抗原检测的临床价值还有待于临床实践来评估。HIV抗体确认检测才是HIV/AIDS诊断的唯一依据。
3 HIV抗体初筛检测［1，2］
HIV抗体初筛检测常用试验有金标法、ELISA等方法。ELISA法有间接法、竞争法、夹心法。本实验室选用阿克苏ELISA夹心法为例。
3.1 阿克苏夹心法原理 将HIV抗原包被固相载体上，标本中HIV抗体与医学全.在线www.lindalemus.com包被的HIV抗原结合形成复合物，利用抗体的多价性。又与酶（HRP)标记的同类HIV抗原即酶标板内的球状复合物，形成一个HIV抗原抗体酶标记的HIV抗原复合物，最后加入底物，避光30min，在酶作用下，产生显色反应，加2N硫酸终止后呈黄色，在450/620nm双波长下测定光密度值。
3.2 试剂质量要求 必须是HIV1+2混合型；经国家食品药品监督管理局注册批准，批检合格，临床评估质量优良，在有效期内试剂。
3.3 操作程序 详见试剂操作说明书。
3.4 质量控制 内部对照质控血清，每次试验试剂盒中提供阴、阳性对照。外部对照质控血清，理想的外部对照应该包括阴、阳性对照、弱阳性、临界值对照，在每次试验时应设置一个单一浓度水平的质控品即弱阳性对照。这个弱阳性对照值设定在试剂盒Cut-off值的2~3倍为宜。
3.5 注意事项 （1)测定前，试剂盒从冰箱取出要接近室温；（2)去除酶标板孔内的气泡；（3)洗板要充分；（4)加入样品稀释液，待板孔内球状复合物完全溶解后，再加入样本、放置温箱；（5)底物防止金属离子污染；（6)如血清不能及时做抗体测定，1周内进行检样可放于2℃~8℃，时间较长必须放-20℃保存。
3.6 结果报告 结果阴性：直接报告阴性。结果阳性：“出待复查报告”不能出阳性报告，送CDC确认实验室确认。
4 HIV抗体确诊试验
常采用免疫印迹法。我国结果判断标准，HIV抗体阳性，至少有两条膜带（gp41/gp120/gp160)或至少有一条膜带与P24带同时出现。
5 HIV抗体检测临床意义
（1)HIV抗体阴性说明：①未感染HIV；②可能感染HIV，但处于窗口期；③疾病晚期，免疫功能缺损的患者。（2)HIV抗体阳性说明：感染HIV。①HIV感染者，感染（WB+) 无症状，CD4≥200cells/μl②AIDS患者，感染（WB+) 有症状， CD4<200cells/μl。（有症状的界定，是按照国家AIDS病例诊断标准中规定的临床症状者)。
【参考文献】
1 黎志东，徐志凯，杨乔欣.我国HIV分子流行病学研究现状.细胞与分子免疫学杂志，2001，17（Suppl)：86-87.
2 Lukashov VV,Goudsmit J.Recent evolutionary history of human immunodeficiency virus type 1 B:reconstruction of epidemic onset based on sequence distances to the common ancestor.J MolEvol,2002,54(5):680-691.
作者单位： 655000 云南曲靖，曲靖市第一人民医院
