经呼吸道染毒可分为吸入染毒和气管内注入。 1.静式吸人染毒 将一定数量的啮齿类动物放在密闭的染毒柜中,加人易挥发的液态受试物或气态受试物使成一定浓度。静式吸入染毒简易,但缺点较多,主要是随试验进行氧分压降低(因此,实验动物数量有限制),柜内受试物浓度也逐渐下降(由于动物吸人消耗、为被毛及染毒柜壁吸附所致),而且实验动物有经皮吸收的可能。染毒时间一般为2h。要求受试物在lOmin内蒸发完毕。 柜顶盖部有三个附件。一个是投药孔,在孔下方用多层纱布或滤纸作为接受和蒸发液态受试物的药物蒸发器;一个是用于混匀蒸气或气体的小电扇;一个是插人温度计的孔。在柜的下部的1/4处还留有一个供采样的孔。 静式吸人染毒时应根据染毒柜容积和染毒时间,确定放置的实验动物数,以保证动物的最低需气量(表1—4)。染毒柜所需容积也可按实验动物总体重(kg)×100×染毒时间h)来估算,相当于动物每kg体重每小时所需空气体积为100L。 静式吸入染毒多以计算方法得到染毒柜内受试物浓度,受试物浓度以mg/m.易挥发液体化学物计算公式为 C=(a·d·l000)/L 式中:C=设计的染毒浓度(mg亿);a=加入受试物的量(m1);L:染毒柜容积(L)。 气态化学物加入为m1数,可依据染毒柜容积折算为ppm。单位mg/ml: 记算公式为(式中MW为受试物的分子量):mg/m3=(MW·ppm)/22.4 可在染毒期内测定受试物浓度2~3次,以其均值作为实际染毒浓度。 表1—4 实验动物的最低需气量及不同染毒柜容积应放置的动物数(染毒2h) 实验动物 | 呼吸量 | 最低呼吸量 | 静式染毒2h可放动物数 | 25L | 50L | 100L | 300L | 1000L | 小鼠 | 1.45 | 4.50 | 3-5 | 6-10 | 12-15 | 36-40 | 120-150 | 大鼠 | 10.18 | 30.54 | 0 | 1 | 1-2 | 5-6 | 16-18 | 豚鼠 | 10.18 | 30.54 | 0 | 1 | 1-2 | 3-4 | 16-18 | 猫 | 19.30 | 57.90 | 0 | 0 | 0 | 3-4 | 9-10 | 家兔 | 41.5 | 126.80 | 0 | 0 | 0 | 1 | 4-5 | 猴 | 51.60 | 154.80 | 0 | 0 | 0 | 1 | 3-4 | 狗 | 321.60 | 97.80 | 0 | 0 | 0 | 0 | 1 |
实验步骤: (1)将动物放人染毒柜(亦可连动物笼一起放人染毒柜)。 (2)将染毒柜密闭好。 (3)从投药孔将所需受试物加到药物蒸发器上,随即塞好投药孔井开始计算染毒时 (4)观察实验动物的症状、死亡时间,并仔细记录。 (5)染毒结束后,关闭电源,打开门(盖),驱出柜内残存有毒空气,取出动物,存活者归笼继续观察。 (6)冲洗染毒柜,将动物排泄物冲干净,擦干染毒柜备用。 2.动式吸入染毒 动式吸入染毒设备由染毒柜、机械通风系统和配气系统三部分构成对设备的要求较高,优点是在染毒过程中染毒柜内氧分压及受试物浓度较稳定,缺点是消耗受试物的量大,并易于污染环境。动式吸入染毒又分为整体接触和口鼻接触两种,此设备设计为维持每小时12~15次的换气,保证氧气浓度为19%受试物的均匀分布。染毒柜应维持成轻微的负压以免受试物从染毒柜逸出。要保证染毒柜中气流的稳定性,实验动物的总体积不能超过染毒柜容积的5%。如采用鼻—口或头部暴露吸入染毒法,可避免经口和皮肤同时接触受试物。应使用适当的浓度控制系统。应调整空气流速,以保证整个设备的条件一致。 在染毒柜中受试物浓度达平衡后,每天的染毒时间应为6h。在必要时,也可利用其他的暴露时间。从实际考虑,每周染毒;天是可接受的。 进行试验时温度应维持在(22±2)℃。相对湿度最好保持40%一60%之间(但不适用于气溶胶试验).染毒过程中,停止供食和供水。 在进行下述的测量或监测时,应尽可能地使维持恒定:①气流速度,每次暴露应监测≥3次。②受试物的实际浓度和气溶胶浓度粒度分析,每次暴露测2—4次。③连续监测温度,每30min记录一次。 3.气管内注入;此法用于建立急性中毒模型及尘肺研究。以大鼠为例,用乙醚轻度 麻醉大鼠(侧卧即可),将麻醉的大鼠用线套住其门齿,挂在染尘架上,鼠背向操作者。用无齿镊夹住并拉出舌头,用小块纱布包裹舌头,用左手拉住。右手取耳镜放人大鼠口腔,暴露气管开口。使光线照射于耳镜,可见随呼吸时张时闭的v形白环(声带)。术者左手松开大鼠舌头并固定耳镜,右手接过助手传递的钝头穿刺针,待v形口张开时把针头插入气管约1-1.5cm,此时针头已达气管的上中段。助手将吸好注射液的注射器接在穿刺针上,回抽如有气泡,证明位于气管内,即可将受试液注入气管内。术前所有用具和受试液均应消毒,必要时可在受试液中加青霉素2000IU/ml。 |