医学微生物学:授课讲稿 第八章 病原学诊断与防治:第八章病原学诊断与防治第一节 细菌学诊断一、病原菌检测1.标本(specimens):2.细菌形态与结构检查：注意涂片镜检可初步诊断的病原菌。3．分离与鉴定（isolation and identification): 确诊最可靠的方法。4．病原菌抗原的检测（detection of bacterialantigens):简便快速的诊断方法： 免疫荧光法 ( IF )，酶免疫测定（EIA)，放射免第八章病原学诊断与防治
第一节 细菌学诊断
一、病原菌检测
1.标本(specimens):
2.细菌形态与结构检查：注意涂片镜检可初步诊断的病原菌。
3．分离与鉴定（isolation and identification): 确诊最可靠的方法。
4．病原菌抗原的检测（detection of bacterialantigens):
简便快速的诊断方法： 免疫荧光法 ( IF )，酶免疫测定（EIA)，放射免疫测定等。
5．其他检测方法： 如分子生物学方法检测细菌核酸： PCR ，核酸杂交。
二、 血清学诊断：用已知抗原检测血清中未知抗体。
血清学诊断方法有多种：如：凝集试验、中和试验、ELISA等。
第二节 病毒学诊断
一、标本：
1.采集时间：发病初期或急性期；
2.采集部位：根据V感染部位，采取适宜标本；
3.标本送检：冷藏速送
组织块：置50%中性甘油盐水中送检。
4.
污染标本：加抗生素处理。
二、病毒的分离、培养与鉴定（金标准，但方法复杂)
（一)病毒的分离
1．动物接种
2．鸡胚培养
3．细胞培养：最常用
病毒在细胞中生长繁殖的指标：
（1) 细胞病变效应（cytopathic effect,CPE ): 有些病毒在细胞内增殖时可引起细胞发生特有的形态学变化（细胞病变)，称为细胞病变效应（CPE )。
（2)包涵体 (inclusion body):
（3)红细胞吸附：
（4)干扰现象：
（二)病毒数量与感染性的测定： 蚀斑测定法、TCID50测定法。
三、病毒感染的血清学诊断：
1．中和试验(neutralizing test)
2．血凝抑制试验(hemagglutinatia inhibitiontest, HI test)
四、病毒感染的快速诊断
（一)形态学检查：
1．电镜、免疫电镜
2．光学显微镜：查包涵体
（二)病毒蛋白抗原检测：免疫荧光法 (IF)、酶免疫测定（EIA)等
（三)特异性IgM抗体的检测
（四)病毒核酸检测：实时定量荧光PCR (real -timePCR)，RT- PCR， Gene chip
等。
第三节 真菌学诊断
一、标本的采集：
二、病原真菌的检查与鉴定： 形态学、分离培养。
1.直接镜检：
2.分离培养： 沙保氏培养基
三、 真菌的快速诊断：
1. 血清学实验（ELISA、荧光抗体法)： 可用于深部真菌感染的辅助诊断。
2. 核酸的检测：PCR
3． 真菌毒素的检测
第四节 特异性预防与治疗
一、人工主动免疫
将疫苗及类毒素（抗原)接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力。主要用于预防。
（一)疫苗
1. 死疫苗(killed vaccine):
2. 活疫苗(living vaccine)亦称减毒疫苗(attenuatedvaccine):如： BCG、脊髓灰质、麻疹等减毒活疫苗
3. 新型活疫苗:
4.基因工程疫苗: 利用基因工程方法获得带有病原体保护性抗原表位的目的基因，将其导入原核或真核表达系统，表达该种保护性抗原，提纯后研制成疫苗 。
5. 重组载体疫苗
6. 合成疫苗
7. 亚单位疫苗(subunit vaccine)：利用微生物的某种表面结构成分（抗原)制
8. DNA疫苗：又称基因疫苗或核酸疫苗
9.转基因植物疫苗
（二)类毒素(toxoid)：
是外毒素经0.3 %—0.4%甲醛处理后，失去毒性仍保持抗原性的生物制品。
二、人工被动免疫
输入含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体或细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫力的过程叫人工被动免疫。用于紧急预防或治疗。
1.抗毒素 (antitoxin) ：将类毒素或外毒素给马进行多次免疫后，待马匹产生高效价抗毒素后采血，提取其免疫球蛋白精制成抗毒素。
抗毒素主要用于外毒素所致疾病的治疗和紧急预防。
临床常用的有破伤风抗毒素、白喉精制抗毒素等。
2. 抗菌血清
4．他免疫制剂：如 IFN, IL
三、细菌感染的治疗：主要采用抗菌药物。
（一)抗菌药物的种类
（二)抗菌药物的主要作用机制
1．影响细菌细胞壁的合成，
2．影响细胞膜的功能，
3．影响细菌细胞蛋白质的合成
4．影响核酸合成
四、病毒感染的治疗
（一)抗病毒化学制剂
1. 核苷类药物
(1) 无环鸟苷(acyclovir,ACV,) ：是目前最有效的抗疱疹病毒药物之一。
机制：竞争病毒DNA复制酶。
(2) 拉米呋定(lamivudine) ：抑制慢性乙型肝炎患者体内HBV的复制。
机制：抑制病毒逆转录酶。
2. 非核苷类反转录酶抑制剂
nevirapine：是第一个新合成的非核苷类反转录酶抑制剂，1996年获准用于治疗HIV。
3. 蛋白酶抑制剂：英迪纳瓦(indinavir)是1996年批准的新一代蛋白酶抑制剂，用于HIV。
4. 其他抗病毒药物：
金刚烷胺能阻止脱壳，主要用于治疗甲型流感。
(二)干扰素和干扰素诱生剂的应用
1． 干扰素(IFN)
2． IFN诱生剂
3. 中草药防治病毒感染
4. 基因治疗(gene therapy)：
目前还处于研究阶段
(1)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide, asON)：人工合成的，与靶基
因或mRNA某一区段互补的核酸片断，可以通过碱基互补原则结合于靶基因/mRNA上,从而封闭基因的表达。包括：反义DNA，反义RNA， 其来源可有人工合成和体内表达两类。
(2) 核酶 (ribozyme)：是既能与靶基因序列结合又具酶活性的一类RNA分子。
(2)干扰RNA (shortinterfering RNA,siRNA)：一些小的双链RNA可以高效、特
异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型。
RNA干扰也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制。由于可以作为一种简单、有效的代替基因敲除的遗传工具，RNAi正在功能基因组学领域掀起一场真正的革命。为此被Science评为2001年最重要的的成果之一。
五、真菌的治疗
1.局部治疗: 咪康唑霜、克霉唑软膏等局部涂搽
2.全身用药治疗: 口服/静脉用抗真菌药，两性霉素B、制霉菌素、咪康唑、酮康唑、氟康唑和伊曲康唑等
