药理学实验指导-第二篇 机能实验:第十三章 神经系统

第十三章  神经系统

第一节  神经干动作电位及其传导速度的测定

【实验目的】

 (1) 掌握动作电位（actionnpotential ,AP)测定原理以及传导速度的测定与计算方法.

(2)观察、识别蟾蜍坐骨神经干双相和单相AP。

（3)分析低温、局麻药和机械损伤等因素对神经干AP及其传导速度的影响机理。

【实验原理】

神经干受有效剌激兴奋后 , 产生的AP以脉冲的形式按一定的速度向远处扩布传导。不同类型的神经纤维其传导兴奋的速度是不相同的，直径粗的神经纤维传导速度快 , 直径相同的纤维，有髓纤维比无髓纤维传导快。蛙类的坐骨神经干属于混合性神经 , 其中包含有粗细不等的各种纤维 , 其中直径最粗的有髓纤维 , 传导速度在正常室温下大约为 35~40m/s。测定神经纤维兴奋的传导速度时, 在远离刺激点的不同距离处分别引导其AP , 两引导点之间的距离为 d , 在两引导点分别引导出的动作电位的时相差为 T。可按照公式（V =d/T)计算其传导速度。此外，神经纤维在一次兴奋过程中 , 其兴奋性可发生周期性变化 , 包括绝对不应期、相对不应期、超常期和低常期。

本实验要求学生通过离体神经干AP的细胞外记录法及其基本波形的判断和测量，掌握神经干AP及其传导速度的测定方法 ,通过调整刺激条件改变离体神经干的兴奋性及其AP波形，并分析其机理。

【实验对象】

 蟾蜍或青蛙。 

【实验药品与器材】

1.药品

任氏液

2.器材

BL-420E型生物信号采集处理系统一套、神经标本盒、蛙类手术器械、滤纸、缝合线、、烧杯、滴管等。

【实验观察指标】

 蟾蜍或青蛙坐骨神经干双相、单相AP及其传导速度

【实验方法与步骤】

(1)坐骨神经干标本制备

按第五章第六节两栖类动物实验常用手术方法分离制备坐骨神经干，将制备好的坐骨神经干浸泡于任氏液的烧杯中备用。

（2)连接实验装置

将引导电极、刺激输出电极分别插入生物信号采集处理仪输入通道2和刺激输出通道并与神经标本盒相应电极相连（实验装置图13-1中S₁  S₂:刺激电极；R₁ R₂：引导电极)。镊子夹住神经干标本两端的线头，将标本近心端放在刺激电极上，远心端放在引导电极上。

 图13-1 实验装置示意图

（3)观察坐骨神经干双相动作电位

双击BL-420E图标进入生物信号采集处理系统软件界面，在实验项目栏中调出动作电位检测模块，点击“刺激”按钮，系统开始采样，适当调整各通道放大倍数及X、Y轴压缩比，即可产生双向动作电位。如改刺激参数为刺激个数为2，并适当增加时间间隔至1秒，即可观察到神经干的2个双向AP。

（4)测定神经兴奋传导速度

先用直尺测量两对引导电极之间的距离（距离d=R₁ 与R₂之间的距离)，启动“刺激”键，观察神经干AP波形变化，点击测量图标，即可手动测量两个AP之间的时间（时间T=两个AP起点的间隔时间)。按公式V= d/T计算AP传导速度。

①测量正常AP传导速度。

②将标本置于4℃任氏液中浸泡5分钟后，观察AP变化,测定其传导速度。

③调换标本方向，观察AP有无变化。

④保持刺激电极与引导电极间距离不变，改变两引导电极（R₁与 R₂)间距离观察双相AP变化。

⑤对调两引导电极的位置，观察双相AP变化。

⑥在两引导电极之间滴一滴普鲁卡因，观察AP波形变化。

⑦用镊子将两引导电极之间的神经夹伤，观察AP波形的改变。

⑧实验结束后，选取“文件”下的打印，打印实验结果。

（5)测定神经兴奋不应期

另取一根制备好的坐骨神经干标本置于神经标本盒电极上，在“实验项目”下拉菜单中点击“神经干不应期”项，系统自动弹出刺激方式对话框，选择“程控”，设两次刺激初始间隔为30ms,依次递减间隔步长为2ms。当两次刺激间隔时间越来越短时，第二个AP波形开始减小，表明第二个刺激落入第一次兴奋后的相对不应期。当两次刺激间隔时间缩短为1～2ms时，第二个AP完全消失，说明第二个刺激落入到第一次兴奋后的绝对不应期。

【注意事项】

（1)实验前和实验后，必须用任氏液棉球擦拭干净神经标本盒全部电极，使电极保持良好的导电性能。

（2)神经干应尽可能分离得长一些，全长须在8cm以上。

（3)神经干分离过程中勿损伤神经组织，以免影响实验效果。

（4)神经标本盒保持接地，实验时应盖上神经标本盒的盒盖，以防干扰与神经干燥。

【思考题】

（1)本实验采用的方法是细胞外记录AP，此外还有何种方法记录AP？

（2)神经干AP与单一神经纤维的AP有何区别?

（3)为什么一般情况下记录到的双相动作电位的波形是不对称的?

（4)神经干双相和单相AP产生、传导和引导原理如何?

（5)绝对不应期内，为什么神经对任何强度的刺激都不再发生反应？

（6)低温、标本倒向、改变两引导电极间距离、对调两引导电极的位置、改变刺激电极和引导电极间的距离、用药物阻断或机械损伤等分别对神经干AP的波形、传导速度有何影响？为什么？

   （金海燕、韩伟)

第二节 主动脉神经放电与动脉血压的调节

【实验目的】

（1)学习哺乳类动物在体神经干动作电位的引导和血压直接测量方法，观察机械刺激、电刺激、药物及神经体液因素对家兔血压的影响。

（2)分析动脉血压与主动脉神经放电的电压、频率、声音变化的相互关系。

【基本原理】

    正常生理情况下，人和哺乳类动物的动脉血压相对稳定性是通过神经和体液因素调节实现的，其中主动脉弓一颈动脉窦压力感受性反射（减压反射)尤为重要。此反射既可使升高的血压下降，又可使降低的血压升高，起着血压波动缓冲的作用。主动脉神经是主动脉弓压力感受器的传入纤维，当动脉血压升高或降低时 , 主动脉弓压力感受器经主动脉神经传入冲动也随之增强或减弱, 使压力感受性反射相应增强或减弱 ,使血压相应降低或升高， 以保持动脉血压相对稳定。多数哺乳动物的主动脉神经在颈部混入迷走神经，而家兔的主动脉神经在解剖上独成一支，又称为减压神经，易于分离，可用于观察动脉血压变化对主动脉神经冲动强弱的影响。

    本实验通过测定动脉血压波动和检测主动脉神经放电强度并分析其变化的相互关系，以加深对减压反射生理意义的理解。

【实验动物】 

家兔，体重2-3kg，性别不拘。

【实验药品与器材】

1.药品

25％氨基甲酸乙酯（或3%戊巴比妥钠)，1：10000去甲肾上腺素溶液、1：10000乙酰胆碱溶液、利血平注射液、生理盐水、肝素生理盐水，液体石蜡(加温38—40℃)。

2.器材

生物信号采集与处理系统一套、血压换能器1个、手术器械一套、动脉插管1个、双极银丝引导电极1根、铁支柱2个、试管夹、双凹夹2个、1支（或等药)、50ml注射器1个、1ml注射器2个、10ml注射器1个、等。

【实验观察指标】

（1)兔动脉血压。

（2)兔减压神经放电频率、幅度。

（3)监听放电声音。

【实验方法与步骤】

（1)麻醉与固定  

用20％氨基甲酸乙酯（5ml／kg)耳缘静脉缓慢注射，待动物麻醉后，将其仰卧位固定于兔手术台上。

（2)分离减压神经、血管、气管

 颈前部备皮后，颈部正中切开4-6 cm，用止血钳分离皮下组织，分开胸舌骨肌，暴露气管，在气管外侧找到与气管平行的血管神经鞘，鞘内有颈总动脉、迷走神经(最粗)、交感神经(次之)和减压神经(最细)。用玻璃分针将减压神经从血管神经束中分离出来1.5 -2cm，动作要轻柔细致，其下方穿一根浸湿的细丝线备用。用同样方法依次分离交感神经、迷走神经、气管、颈总动脉，分别穿线备用。

（3)行气管插管、左颈总动脉插管术

气管插管：在甲状软骨下2—3cm，做倒“T”形切口，向下插入气管插管，结扎固定好插管，便于保证呼吸通畅。

动脉插管：结扎左颈总动脉远心端，动脉夹夹闭近心端阻断血流，动脉夹与结扎线之间应相距3cm左右。在靠近远心端结扎部位用眼科剪作1/2斜切口，向心脏方向插入灌满肝素生理盐水并与血压传感器相连接的动脉插管，扎紧插管尖端并固定于其侧管，以防插管滑出，松开动脉夹观察插管内是否有血液博出。

（4)安置引导电极

将引导电极固定于支架上，调节好引导电极于合适的位置，用玻璃分针轻轻挑起减压神经放置于引导电极上，使电极与神经良好接触，电极不能与周围组织接触，但又不过度牵拉神经。

（5)实验装置与仪器准备

将血压传感器、生物电引导电极与生物信息采集处理系统相连接。双击生物信号采集处理系统图标。在“实验项目”栏中调出“减压神经放电”项，点击开始图标，适当调整各通道放大倍数，直至观察到理想的波形曲线。①动脉血压：辨认血压波形曲线的一级波和二级波，有时可见三级波。②减压神经放电波形与声音：放电频率和电压呈递减的三角波为减压神经放电波形的主要特点，其声音类似于火车行驶的轰隆声，如声音太小不清楚，可调节音箱音量旋钮，放大音量，或加大信号通道的放大倍数。

（6)实验步骤

（1)动脉夹夹闭右颈总动脉远心端5—10秒，观察减压神经放电频率、幅度、声音与血压变化相互关系。

（2)从耳缘静脉注射1：10000去甲肾上腺素0．2 -0．3m1，观察减压神经放电的频率、幅度、声音与血压变化相互关系。

（3)从兔耳缘静脉注射1：10000乙先胆碱0.3 m1，观察减压神经放电频率、幅度声音与血压变化相互关系。

（4)电刺激减压神经

剪断对侧减压神经，分别刺激中枢端与外周端（刺激电压：1—2v，刺激时间：5-10s)，观察减压神经放电频率、幅度声音与血压变化相互关系。

（5)电刺激迷走神经

剪断迷走神经，分别刺激中枢端与外周端（刺激电压：1—2v，刺激时间：5-10s)，观察血压的变化。

【注意事项】 

（1)减压神经纤细，分离时，动作要轻柔细致，切勿盲目牵拉，以免损伤。

（2)引导电极与减压神经干须紧密接触并悬空，避免触碰周围组织，影响电信号的引导。

（3)实验过程中，可滴少量生理盐水防止减压神经干燥。

（4)引导电极两极间距为2mm左右，以防短路。

（5)实验步骤1～5，均必须待减压神经放电及血压恢复正常后，方可进行下一步骤。

【思考题】

（1)观察心缩期与心舒期血压和减压神经放电的变化，分析减压神经放电与血压的相互关系。

（2)试述夹闭颈总动脉后，减压神经放电、血压发生变化的机理。

（3)试述注射去甲肾上腺素和乙酰胆碱后，减压神经放电、血压发生变化的机理。

（4)根据实验结果分析减压神经是传入神经还是传出神经，阐述减压反射调节的生理意义。

（5)本实验采用的动脉血压测量法是属直接测量法，还是属间接测量法？

 （金海燕、韩伟)

第三节  香烟的毒性作用

【实验目的】

观察烟对小鼠的毒性作用，以明确吸烟对人体的危害。

【实验原理】

烟碱（nicotine，尼古丁)是烟叶（tobacco)的重要成分，具有N胆碱能受体激动作用，可兴奋自主神经节和神经肌接头的N胆碱受体，其对神经节N受体和神经肌接头N受体的作用呈双相性，即小剂量激动N受体，大剂量阻断N受体。

本实验用烟碱提取器制备烟碱溶液，给实验动物腹腔注射烟碱溶液，观察烟碱吸收过程中N受体由激动至阻断时的动物兴奋性的变化。

【实验对象】

小鼠。

【实验药品与器材】

水烟斗、火柴、1.0ml注射器、10.0m1量筒，香烟、生理盐水。

【实验观察指标】

小鼠的肌肉活动、呼吸、末梢循环情况，最后是否死亡。

【实验方法与步骤】

（1)量筒量取生理盐水4.0m1置于烟斗内，摇匀后，先用注射器抽取1.0ml液体(对照组用)，然后，将香烟插于水烟斗上并点燃，于烟斗嘴处用洗耳球抽吸促使继续燃烧，使烟雾经烟斗内溶液过滤，此时，烟雾内部分水溶性毒物如尼古丁(烟碱)等，即溶于水中。

（2)取小鼠2只，观察正常情况后，甲鼠腹腔注射烟过滤液0.5m1，乙鼠则腹腔注射吸烟前烟斗内溶液0.5m1做对照，逐步观察并比较两小鼠的表现(肌肉活动、呼吸、末梢循环)。

实验结果填入表13-1中：

表13-1  香烟滤液对小鼠的毒性作用

【实验注意事项】

（1)在烟斗嘴处用洗耳球抽吸促使香烟继续燃烧的过程要缓慢，使尼古丁充分溶解于生理盐水中。

（2)腹腔注射烟过滤液0.5m1后如果毒性反应不明显，可酌情增加剂量。

【思考题】

含有尼古丁的烟过滤液为什么可使小鼠出现一系列中毒表现?

（陈临溪  廖端芳)

第四节  有机磷酸酯类的中毒与解救

【实验目的】

（1)观察实验动物在有机磷酸酯类农药­——敌百虫中毒时的中毒症状，以及中毒时血液胆碱酯酶活力的抑制情况。

（2)根据阿托品、解磷定对有机磷酸酯类中毒的解救效果及对血液胆碱酯酶活力的影响，分析两药的解毒原理。

（3)熟悉血液胆碱酯酶活性的检查方法。

【实验原理】

有机磷酸酯类通过多种途径吸收后，与胆碱酯酶呈难逆性结合，抑制胆碱酯酶活性，使其丧失水解乙酰胆碱的能力，造成胆碱能神经末梢释放的乙酰胆碱大量堆积，产生一系列急性拟胆碱中毒症状。

阿托品为选择性的M胆碱受体阻断剂，很大剂量时还可阻断N_l受体，可与乙酰胆碱竞争结合M、N_l受体，阻断乙酰胆碱对这些受体的激动作用， 因而可以有效地解除有机磷酸酯类中毒的M样症状和N_l样症状，是解救有机磷酸酯类中毒的对症治疗药物。

碘解磷定 (pyraloxime iodide，PAM) 是有机磷酸酯类中毒的特效解救药，因其可使胆碱酯酶复活，恢复胆碱酯酶水解乙酷胆碱的能力，因而能彻底解除有机磷酸酯类农药急性中毒的症状和体征，但其对循环和呼吸的解救作用起效较慢，临床上常需配合阿托品类药物一起使用。是解救有机磷酸酯类中毒的对因治疗药物。

本实验给实验动物家兔腹腔注射有机磷酸酯类敌百虫溶液后，观察家兔出现敌百虫中毒时的中毒症状和血液胆碱酯酶活力的抑制情况；观察比较阿托品、碘解磷定对有机磷酸酯类中毒的解救效果及对血液胆碱酯酶活力的影响，并分析两药的解毒原理。

【实验对象】

家兔2只，雌雄不拘。

【实验药品与器材】

3％精制敌百虫溶液、0.2％硫酸阿托品溶液、2.5％碘解磷定溶液、二甲苯。家兔固定箱、注射器、预先加草酸钾的试管、试管架、刀片、干棉球、瞳孔尺与木夹。

【实验观察指标】

瞳孔大小、唾液分泌情况、呼吸、大小便、肌张力、肌震颤及最后结果。

【实验方法与步骤】

  （1)编号，称重，观察一般情况

取家兔2只，编号、称重后，观察动物的活动情况和呼吸状况(频率、幅度、是否困难等)，以及瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌张力、有无肌震颤等，分别加以记录并填入下表。

   （2) 测定血液胆碱酯酶活力

将2只家兔分别固定于箱内，以蘸有二甲苯的棉球涂擦耳壳，使血管扩张。当充血明显后，用刀片切割耳静脉(切口不宜过大、过深)，让血液自然流出，滴入预先装有少量草酸钾结晶的试管中，立即摇匀，用于测定血液胆碱酯酶活力，如取血后切口流血不止，可用干棉球按压止血。

   （3)腹腔注射敌百虫，观察中毒症状，并取血再次测定血液胆碱酯酶活力

将2只家兔，分别腹腔注射3％敌百虫3 ml/ kg，密切观察给药后家兔各项生理指标的变化，记录并填入下表，待中毒症状明显后，再按上述方法取血，供测定血液胆碱酯酶活力之用。

   （4) 给予特殊解救药，观察、比较解救效果

当家兔中毒症状明显后，立即给甲兔由耳缘静脉注射0.2％硫酸阿托品溶液1.0 ml／kg，给乙兔由耳缘静脉注射2.5％碘解磷定2.0 ml／kg，然后每隔5 min，再检查各项生理指标1次，观察2只家兔的情况有无好转，特别注意甲兔和乙兔的区别。待有关中毒症状明显消减以后，再由2只家兔的静脉取血，测定血液胆碱酯酶活力。

实验结果按表13-2的内容逐项填写。

表13-2 有机磷酸酯类中毒与解救的实验结果

【实验注意事项】

(1) 敌百虫属于剧毒类杀虫剂，且可从皮肤吸收，如与手等接触后，应立即用水清洗。

(2) 给家兔实施腹腔注射敌百虫后，15min时仍未出现中毒症状，可再追加1／3剂量的敌百虫溶液。

(3) 预先暴露好耳缘静脉，抽好阿托品与碘解磷定，以便急救。

（4)阿托品给药宜快，碘解磷定给药宜慢。

（5)本实验为分析阿托品和碘解磷定的作用机制而设。应切记，在临床实际中，须将阿托品与解磷定配合使用，才能获得最好的解毒效果。

【思考题】

1. 试验中阿托品和碘解磷定给药时间过早则动物中毒症状观察不完全，而给药过晚则易导致动物因抢救不及时而死亡，步骤（4)中该如何把握上述解药的给药时间？

2. 试根据本次实验结果，分析有机磷酸酯类的中毒机制及阿托品和解磷定的解毒原理。

【附】比色法测定血液胆碱酯酶活力

【实验原理】

血液的胆碱酯酶能催化乙酰胆碱水解而产生乙酸与胆碱。在一定的温度、pH和时间等条件下，水解的乙酰胆碱量与胆碱酯酶的活性成正比。因此在一定量的血液中加入一定量的乙酰胆碱，使之反应一段时间后，测定血液中剩余的乙酰胆碱量，便可计算出已水解的乙酰胆碱量，进而测出胆碱酯酶的活力。

医学全.在线www.lindalemus.com剩余乙酰胆碱的测定是利用乙酰胆碱与羟胺作用生成羟肟酸，后者在酸性条件下进一步与三价铁离子作用，生成红棕色的羟肟酸铁络合物，因此颜色的深浅即可反映乙酰胆碱含量的多少。

【实验药品与器材】

吸管、试管、试管架、恒温水浴、光电比色计。

0.133mol／L磷酸氢二钠溶液：称取Na₂HPO₄·12H₂O 23.87 g，用蒸馏水溶解并稀释至500m1。

0.133mol／L 磷酸二氢钾溶液：称取KH₂P0₄  9.08 g，用蒸馏水溶解并稀释至500 ml。

pH7.2磷酸盐缓冲液：取0.133mol／L磷酸氢二钠溶液72 ml，与0.133mol／L磷酸二氢钾溶液28 ml混和即成100 ml pH7.2磷酸盐缓冲液。

0.001mol／L pH4.5醋酸盐缓冲液：先用每升含冰醋酸5.78 m1的水溶液28 ml和每升含醋酸钠(不含结晶水)8.20 g的水溶液22ml混和，配成0.1 mol／L pH4.5的醋酸盐缓冲液，再用蒸馏水稀释100倍。

0.07mol/L乙酰胆碱底物贮存液：快速称取氯化乙酰胆碱0.127 g(或溴化乙酰胆碱0.158 g)，溶于0.001 mol／L PH4.5醋酸盐缓冲液10 m1中。4℃下保存（可保存4周)。

0.007 mol／L乙酰胆碱底物应用液：试验前取0.07 mol／L乙酰胆碱底物贮存液，用pH7.2磷酸盐缓冲液稀释10倍。

碱性羟胺溶液：临用前20分钟内取等量的14％氢氧化钠溶液和14％盐酸羟胺溶液，混和即成。

33.3％(V／V)盐酸溶液：取比重为1.18的盐酸50 ml，加蒸馏水100ml。

10％三氯化铁溶液：称取FeCl₃·6H₂O 10 g，用0.1 mol／L 盐酸溶解，使成100 ml。

【实验方法与步骤】

按表13-3进行操作，每加一种试剂后均须充分摇匀后再加入下一种试剂，水浴的温度和时间须按要求严格控制。

表13-3  比色测定法的实验操作步骤

滤纸过滤，15 min内用721型分光光度计比色，测定在525 nm处的吸光度，以空白管校正光密度到0点，读取各管吸光度进行计算：

标准管吸光度

注：以1 m1血液在规定条件下能分解l μmo1乙酰胆碱为1个胆碱酯酶活力单位。

(雷小勇 廖端芳)

第五节 药物的镇痛作用

【实验目的】

1.了解评价药物镇痛作用的常见药理学实验方法

2.比较临床常用的两类不同的镇痛药镇痛作用有何不同。

【实验原理】

在动物的皮肤、内脏等多处部位分布有初级传入神经元，可以感受温度、酸碱，机械及化学物质等在内的多种有害或伤害性刺激，产生的生物信号通过传入神经纤维经脊髓最后上传入大脑皮层感觉中枢，经过信号的调制，最终形成痛觉。

中枢神经系统存在一些内源性阿片肽，作为一种神经递质或神经调质或神经激素，通过选择性作用于其特异性受体——阿片受体，对痛觉的产生或传导起着重要的调节作用。目前已知的阿片受体主要分三型——μ、δ、κ。喷他佐辛（又名镇痛新)为阿片受体的部分激动剂，通过激动κ受体产生镇痛作用，但作用仅为吗啡的1/3，同时由于有轻度的μ受体拮抗作用，成瘾性小，药政管理上属非麻醉品，临床上主要用于各种慢性剧痛。

阿司匹林为非甾体类抗炎药的典型代表药，主要通过抑制外周前列腺素类物质的合成进而使局部痛觉感受器敏感性降低，产生镇痛作用。该类药物仅有中等强度镇痛作用，但无成瘾性，临床上主要各类慢性钝痛，而对急性锐痛、平滑肌绞痛效果较差。

【实验对象】

健康雌性小鼠10～12只。

【实验药品与器材】

0.1％盐酸喷他佐辛溶液，4％阿司匹林溶液，0.6%醋酸溶液，生理盐水

鼠笼，热板仪，天平，1ml注射器

【实验观察指标】  

小鼠出现痛反应——热板法：扭体反应或抬后足、舔后足并回头；扭体法：表现为腹部收缩，躯体扭曲，臀部抬高，后肢伸展，蠕行——所需时间。

【实验方法与步骤】

实验一（热板法)

1.  动物的选择：将热板仪温度调到55℃0.5℃，把小鼠放在热板仪上，测定各小鼠的正常痛反应（包括抬后足或舔后足并回头)出现所需时间，重复一次，每次间隔5分钟，取均数，平均时间超过30秒的小鼠弃去不用，如是选出3只，编号、称重后待用。

2.  将3只小鼠分为3组，其中甲鼠给予腹腔注射0.1％盐酸喷他佐辛0.1ml/10g (0.15mg/10g),同时给乙鼠腹腔注射4％阿司匹林溶液 0.15ml/10g(6mg/10g),给丙鼠腹腔注射等量生理盐水0.15ml/10g。

3.  给药后15、30、45、60分钟按步骤1观测并记录小鼠出现痛反应所需时间，如小鼠在热板仪上超过60秒还不出现痛反应，则痛反应时间按60秒计算。

4.  按下列公式计算小鼠痛阈提高的百分率：

   用药后痛反应出现时间－用药前痛反应出现的时间

   痛阈提高百分率＝  ╳ 100%

用药前痛反应出现的时间

实验二（扭体法)

1.  取小鼠9只，称重、编号后待用。

2. 将9只小鼠分为3组，其中甲组小鼠给予腹腔注射0.1％盐酸喷他佐辛0.1ml/10g (0.15mg/10g),同时给乙组小鼠腹腔注射4％阿司匹林溶液 0.15ml/10g(6mg/10g)，给丙组小鼠腹腔注射等量生理盐水0.15ml/10g，注射30分钟后，每只小鼠分别腹腔注射0.6%醋酸溶液：0.2ml/只，观察15分钟内各组中发生疼痛阳性反应——扭体反应（腹部收缩，躯体扭曲，臀部抬高，后肢伸展，蠕行)的小鼠数目，集中全实验室的实验结果，按下列格式计算药物镇痛作用的百分率。

用药组无扭体反应鼠数－生理盐水组无扭体反应鼠数

 药物镇痛作用的百分率＝╳ 100%

生理盐水组无扭体反应鼠数

【实验注意事项】

1.   实验中应选用雌性小鼠，因雄性小鼠受热后阴囊会下坠而接触电热板，而阴囊皮肤对热刺激敏感，导致实验测定的痛反应时间不准。

2.   测定小鼠疼痛反应时一旦小鼠出现典型疼痛反应即立即移开电热板，即使60秒钟无疼痛反应也应立即移开，以免导致小鼠严重烫伤。

3.   实验室室温以15～20℃为宜，过高小鼠过于敏感，且易于导致小鼠蹦跳，而温度过低则小鼠反应迟钝，影响实验结果。

4.   实验过程中小鼠在热板上15秒内出现不安：举前足、舔前足、踢后肢、跳跃等均不作为痛反应指标，只有出现抬后足或舔后足才是疼痛指标。

5.   0.6%醋酸溶液应新鲜配制。

【思考题】

喷他佐辛和阿司匹林镇痛作用有何不同？

覃丽  谢志忠

第六节  药物对抗中枢兴奋药惊厥的作用

【实验目的】

① 学习抗惊厥实验方法，了解实验性癫痫动物模型的制备方法；

② 观察抗癫痫药对戊四氮惊厥的作用。

【实验原理】

 基础医学常用电刺激、声刺激或化学法等方法建立实验性动物惊厥模型，用来筛选抗癫痫药物。化学法指使用大剂量的某些化学药品引起实验动物惊厥发作，以观察事先给予受试药物对癫痫的防止效果，是一种操作简便、不需要特殊仪器装置的抗惊厥实验方法。常用的化学药品有戊四氮、氨基脲、尼可刹米等。戊四氮为主要兴奋延髓的中枢神经兴奋药，过量可兴奋大脑和脊髓，表现为强烈的阵挛性惊厥，继续发展可引起强直性惊厥，其致惊的主要作用部位在脑干和大脑，发生机理可能是增加中枢神经细胞对K⁺的通透性，提高细胞外K⁺浓度，使细胞膜部分去极化而提高其兴奋性，增强了兴奋性突触的易化过程，也可能与戊四氮阻止脑内主要的抑制性神经递质γ-氨基丁酸（GABA)的自发释放有关。戊四氮在阈剂量时，引起头部及前肢抽搐，但不影响翻正反射，此为戊四氮发作阈值实验（Metrazol seizure threshold test, MST)，属癫痫小发作模型；大剂量戊四氮则可引起全身性阵挛性惊厥，继而发展成强直性惊厥，甚至可引起死亡，此称为戊四氮最大发作实验（Metrazol maximalseizure test, MMS),属癫痫大发作模型。

巴比妥（barbital)类抑制中枢神经系统，随着剂量的由小到大，中枢抑制作用的程度由浅入深。当剂量大于催眠剂量时有抗惊厥www.lindalemus.com/sanji/作用。临床上常利用barbital类这一机制将其用于小儿高热、破伤风、子痫、脑炎等及中枢兴奋药中毒引起的惊厥。 

【实验对象】  

小白鼠，体重18～22g。

【实验药品与器材】 

生理盐水（NS)、0.5% 苯巴比妥钠（sodium phenobarbital)，0.02%地西泮，0.5%戊四氮，小鼠笼、粗天平、1.0ml注射器。生理盐水。

【实验观察指标】

观察每组发生惊厥的动物数，计算惊厥百分率，比较给药组与对照组百分率的差异，以判断受试药物有无抗惊厥活性。

小鼠强直性惊厥指标：大多数小鼠给予戊四氮后5～15分钟内出现阵挛性抽搐，或出现兴奋性跳跃，随后出现前肢屈曲，后肢强直，呈角弓反张状，以其后肢僵直作为惊厥指标。

【实验方法与步骤】

①随机分组：取6只小鼠，称重、编号，随机分成3组，每组2只。

②给药：实验组ip（腹腔注射)给予0.5%苯巴比妥纳0.1ml/10g，地西泮2mg/kg，对照组ip NS 0.1ml/10g。10分钟后，各组小鼠均ip戊四氮100mg/kg。

③观察：观察30min内各组小鼠惊厥发生情况（以后肢伸直为指标)。

【实验结果】 将尽可能多的实验结果（全班或更多班级的实验结果)汇总起来列表。

将实验结果填入表13-4，计算出惊厥发生率。

【注意事项】

①给药剂量必须准确并确认注射在腹腔内。

②戊四氮ip剂量一般为100mg/kg，最大也可用至150mg/kg。

③观察指标以强直性惊厥出现与否为准，细微震颤不作为惊厥指标。

【思考题】

①中枢兴奋药有哪些？医学研究中常用哪类中枢神经兴奋药制造惊厥模型？为什么？

②苯巴比妥钠属于哪类药物？有哪些药理作用？

唐圣松  黄红林