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病原生物学实践教学-实验教材:医学微生物学实验指导(自编)综合性实验三空气、水与人体体表细菌学检查

病原生物学实践教学实验教材:医学微生物学实验指导(自编)综合性实验三空气、水与人体体表细菌学检查:综合性实验三空气、水与人体体表细菌学检查空气、污水、人体皮肤及与外界相通的腔道均有大量细菌存在,且种类繁多,这些微生物往往是实验室中各种实验材料、实验菌种污染的祸根,是引起各种感染性疾病的祸根。根据细菌生长繁殖的营养条件和细菌对染料的着色情况取样培养检查,即可观察到人类生活环境的各种细菌。通过对实验室或医院内空气、水和人体体表的细菌检查,我们可了解人体的带菌环境,增强对传染病的认识,树立“处处药品

综合性实验三空气、水与人体体表细菌学检查

空气、污水、人体皮肤及与外界相通的腔道均有大量细菌存在,且种类繁多,这些微生物往

往是实验室中各种实验材料、实验菌种污染的祸根,是引起各种感染性疾病的祸根。根据细

菌生

长繁殖的营养条件和细菌对染料的着色情况取样培养检查,即可观察到人类生活环境的各种

细菌。通过对实验室或医院内空气、水和人体体表的细菌检查,我们可了解人体的带菌环

境,

增强对传染病的认识,树立“处处药品数据有菌”和严格的消毒与灭菌观念,在实验过程中严格执行

无菌操作。

医院作为一个特殊的环境,病原体种类繁多、来源广泛;很多细菌呈高度的耐药性,病人又

往往存在一些易感因素。因此,病原体容易通过空气传播和接触传播等,侵入机体引起医院

内感染(Nosocomial infections,Hospital infections),又称医院获得性感染(Hospital a

cquired infections)。医院内环境监测主要是通过细菌培养的方法,观察空气

各种医学全.在线www.lindalemus.com物体

表面,以及人体体表的细菌总数、细菌种类及其动态变化,以便有的放矢采取措施,控制和

降低医院内感染的发病率;另外,当发生医院内感染暴发流行时,通过环境微生物检查,可

及时发现传染源和传播途径。因此,环境监测是医院感染监测的一个组成部分。

一空气的细菌学检查

【实验目的】

1了解实验室和医院空气的有菌环境,加强消毒、灭菌的观念。

2熟悉医院病房空气的细菌监测方法。

3掌握空气的卫生细菌学检测指标及意义。

【实验原理】

空气是一种重要的疾病传播媒介。在医院,病人的排泄物和分泌物,如飞沫、痰液、脓汁和

粪便等携带大量的微生物,可严重污染空气。某些医疗操作也会造成空气污染,如高速牙钻

修补或超声波清洁牙齿,铺床、清扫及人员走动等也是医院空气微生物的来源。因此,应

对空气进行经常性的卫生监督,检查空气中病原菌较困难,故以经常存在于口腔

和鼻腔的链球菌作为空气卫生的指标,根据空气中链球菌多少以及空气中细菌总数的测定

来判断空气卫生状况、污染程度。

通常采用沉降法检测细菌总数。沉降法是以微生物在空气中能随尘粒下沉的原理,将平板平

放在空气中暴露一定时间,使空气中的细菌直接沉降至培养基表面,然后置37℃孵育24小时

,计算菌落数。按下列公式可得出空气中细菌总数。

每立方米细菌数=50,000N〖〗AT

A:所用平板面积(平方厘米);T:平板暴露于空气中的时间(分钟为单位);

N:平板上的细菌菌落数。

【实验内容和方法】

一空气中细菌总数的测定

1取普通营养琼脂平板10个(直径9cm),在皿底做上记号。

2选择同一房间的5个不同的采样地点,将平板盖打开,平板盖朝下放置在平板旁,分别暴

露于空气中10分钟、30分钟,然后盖好。注明地点、暴露时间。

3平板置37℃温箱培养24小时后取出观察,计算出所生长的菌落数,并比较菌落数量与暴

露时间长短、不同地点的关系。

【注意事项】

●因室内空气中细菌的分布不匀,须在室中央及周角各置一平皿,分别计数后求其平均值。

二空气中链球菌检查法

一般可用血平板作沉降法检查。经培养后,计算培养基上溶血性链球菌和草绿色链球菌的菌

落数,并经涂片染色镜检证实。

附表:

医院各类房间空气中细菌总数要求

细菌数分级〖〗细菌总数/M3〖〗病房类型

最低细菌数〖〗<10〖〗器官移植、心血管手术室、制剂室

低细菌数〖〗<200〖〗无菌室或其他手术室、婴儿室、产房、术后恢复室、供应室、中

心灭菌室

一般细菌数〖〗200~500〖〗普通病房、治疗室、放射科、按摩室

注:以上为世界卫生组织建议标准,我国卫生部要求,手术室、产房及婴儿室空气中细

菌总数不得超过500个/M3。

【问题】

①在微生物学实验中,怎样才能避免杂菌的污染?

②为何取链球菌作为空气的卫生指标之一?

③空气的卫生标准规定如何?你的实验结果说明了什么问题?

二水的卫生细菌学检查

【实验目的】

1掌握水的卫生细菌学检测指标及意义。

2熟悉水的细菌总数及大肠菌群数的检测方法。

【实验原理】

水的卫生细菌学检验有两方面的意义,一是从卫生学角度对水质、水源提供有关资料,二是

结合流行病调查检查由水源传播的某些传染病病原菌,为其防治提供证据和对策。在实际工

作中,由于病原菌往往不是水中生长的优势菌,难以检测,所以一般选择具有普遍性和代表

性的微生物作为水的卫生细菌学检验指标,如细菌总数和大肠菌群数,而致病菌的检验往往

只在流行病学调查时以相应的特检方法进行。

细菌总数系指单位重量或体积被检物经处理后,在一定营养、温度和时间条件培养下,所得

细菌菌落总数。国家规定和通常采用的细菌总数测定方法是琼脂倾注平皿法(倾注培养)。大

肠菌群数系指一群在37℃24小时能发酵乳糖产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞

杆菌数。大肠菌群数的检测通常采用发酵法。

【实验内容和方法】

一细菌总数检测

【材料】

普通营养琼脂平板无菌生理盐水水浴箱吸管试管

【方法】

1水样采集:自来水样采集先用清洁布将水龙头拭干,再用酒精灯烧灼水龙头周围灭菌,

然后把水龙头完全打开,放水5~10分钟,再将水龙头关小,以无菌三角烧瓶取样。水源水

样或食品(矿泉水、饮料、啤酒、游泳池水等)采集后应立即检验,不得超过4小时。

2自来水可不稀释或作1∶1、1∶10稀释,稀释水立即检验,稀释液用无菌生理盐水。水源

水需根据水的污浊情况决定稀释倍数(1∶10~1∶10000)。

3以无菌吸管各吸取待测水样1ml和0.1ml,分别注入无菌平皿内,每样品不同水量均重复2

个平板。

4溶化普通营养琼脂,冷至45~50℃时(可放在45℃水浴保温)立即倾注于各平板,每板注

量15ml,速与水样混匀,加盖待凝。同时设对照平板1个。

5将平板倒置于37℃恒温箱中培养24小时后计数菌落。

【注意事项】

●应选择菌落数在30~300之间的平板计算菌落数。

●同一稀释度2个重复平板的平均数乘以稀释倍数,即得1ml水中的细菌总数。

●菌落数在100以内时,按实有数报告,大于100时,采用二位有效数字或10的指数来表示。

二大肠菌群数检测

【材料】

乳糖蛋白胨培养液普通营养琼脂平板伊红—美蓝琼脂平板生理盐水革兰氏染色液

于氏管

【方法】

1初次发酵试验:取10支装有5ml无菌3倍浓缩乳糖蛋白胨培养基的试管(试管内置倒立管以

指示细菌培养时有无产气),分别以无菌操作加入自来水样10ml(水源水

取10ml未稀释、1∶10、1∶100水样),然后将培养瓶和培养管置37℃培养24小时。

2平板分离培养:将上述培养后产酸产气或只产酸的培养物,分别接种于伊红—美蓝琼脂

平板。37℃培养24小时,挑选深紫黑色,具有金属光泽;紫黑色,不带或略有光泽;淡紫色

中心色较深的菌落进行涂片、革兰氏染色、镜检。

3再次发酵试验:上述菌落经革兰氏染色观察,若为阴性无芽胞杆菌,取其相应的典型菌

落1~3个再接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养管(内放倒立管),37℃培养24小时后,有产酸

、产气者即证实有大肠菌群存在。依据有大肠菌群的阳性管,报告每升水样中的大肠菌群数

附:【卫生细菌学指标】

1饮用水:细菌总数<100个/ml,大肠菌群数≤3/L。

2瓶装汽水果汁类:细菌总数≤100个/ml,大肠菌群数≤6/L。

3游泳池水:细菌总数≤1000个/ml,大肠菌群数≤100/L。

【注意事项】

●采集水样应注意无菌操作,以防杂菌混入,取样容器应常规灭菌。

●水样应在采集后2小时内低温保存送检,若盛于密闭无菌容器内送检,可延至6小时。

●检验水样时应摇匀后取样,对严重污染水应稀释1∶1000甚至1∶10000。

●选择菌落数在30~300个/平板较易准确计数,对小至针尖大小的菌落应予以注意,切勿漏

计。

【问题】

①报告自来水、食品饮料细菌总数和大肠菌群数的实验结果,并说明是否符合卫生饮用标准

②为什么取大肠菌群数作为水的卫生细菌学检测指标之一?

三人体体表和呼吸道的细菌学检验

【实验目的】

1了解人体体表和呼吸道的有菌环境,加强消毒、灭菌观念。

【实验原理】

医院内感染最重要的传播途径是经工作人员手的间接接触。医院工作人员不可避免地既要接

触脏的地方(如伤口的敷料),又要接触灭菌的部位(如手术伤口,导管等)。同时在大多数情

况下,手是人体中能直接接触的唯一部位。用手接触、污染和传播细菌量相当大。纵观医院

获得性感染的历史,手的消毒措施业已证明是控制医院内感染最重要的方法之一。

【实验内容与方法】

一手指皮肤的细菌学检查

1取一块普通营养琼脂平板或血平板,用未经消毒的手指在培养基表面轻轻地来回移动

,盖上皿盖。

2另取一块普通营养琼脂平板,用2%碘酒棉球消毒该手指,或用肥皂洗手干燥后,同样在

培养基表面轻轻来回划线,盖上皿盖。

3作好标记,将平板置于37℃培养24小时,观察结果。

二呼吸道的细菌检查

1取血琼脂平板(为什么要用血琼脂平板?)一块,打开皿盖,将培养基放于口腔前约10cm处

2受试者用力咳嗽数次,约30秒,然后盖上皿盖。

3将平板置于37℃温箱培养24小时,观察结果。

【问题】

①为什么金黄色葡萄球菌是医院内感染常见的重要病原菌?

②怎样从医务人员手指上分离和鉴定金黄色葡萄球菌?

(龙北国赵卫张文炳)

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