课程名称

临床检验基础学

授课题目（章节或主题)

Wright染色原理、红细胞计数

授课教师

吴晓蔓

所属二级学院

检验系

所属教研室

临床检验基础

职称

教授

授课时间

2008年2月28 日第1 周 星期四 第 1～2节第1 次课

授课时数

2学时

授课班级

  检验 专业（本科√  专科□)2005   级   1，2，3   班

教学课型

理论课√ 实验课□ 习题课□ 讨论课□ 实习（践)课□  其它□

教材名称、作者、出版社及出版时间

临床检验基础 熊立凡主编 人民卫生出版社 2007第四版

教学目标与要求：

掌握

1、血细胞Wright、Giemsa染色原理

2、红细胞计数有哪些方法？红细胞显微镜计数法原理如何？红细胞计数的参考方法是什么？

了解

1、什么是血细胞计数的误差？如何避免或减少？

2、血涂片制备方法临床实验室经常开展的红细胞检验项目有哪些？

主要知识点、重点与难点：

主要知识点：血细胞Wright染色原理，红细胞显微镜计数法原理

重点与难点：血细胞Wright染色原理

教学方法（请打√选择)：

讲授法√　 讨论法√ 　演示法□　 自学辅导法□　 　练习法(习题或操作) □　读书指导法□

ＰＢＬ医学三基（以问题为中心的教学法)□　　案例法□　 其他□

教学媒体（请打√选择)：

教材√  板书√  实物□  标本□  挂图□ 模型□ 投影□ 幻灯□   录像√   CAI（计算机辅助教学)□

教学过程设计（包括讲授内容、讲授方法、时间分配、媒体选用、设计等)：

第一章  血液标本采集与血涂片制备 

第三节  血涂片制备与染色

一张合格的血涂片应该是厚薄适宜，血膜头、体、尾明显，发布均匀，边缘整齐，两边留有一定的空隙，因此要熟练掌握推片技术和染色条件。

一、血涂片制备

1.载玻片要求　

2.手工推片法

3.厚血膜涂片法 

4.仪器自动涂片法 

二、血涂片染色

１．用于血片染色的染料

（1)碱性染料：为阳离子染料，主要是染细胞核的染料如美蓝、天青、苏木素等。

（2)酸性染料：为阴离子染料，主要有伊红Y和伊红B，这两种染料特别适于与噻嗪类燃料（亚甲蓝、天青B等)作对比染色，形成红蓝分明、色泽艳丽的结果。

（3)复合染料：同时具有阴、阳离子型的染料如Wright（瑞氏)染料、Giemsa（姬姆萨)染料。

2.血涂片常用染色方法

（1)Wright染色法

【染色原理】

1)染料的组成：

2)pH值的影响：

【注意事项】

1)Wright染液质量：

2)染色时间与染液浓度：

3)染色时：

4)冲洗时：

5)染色过深：

（2)Giemsa染色法

【原理】  染色原理和结果与Wright染色法基本相同。但提高了噻嗪染料的质量，加强了天青的作用，本法对细胞核和寄生虫着色较好，结构显示更清晰，而胞质和中性颗粒则着色较差。

一、红细胞计数

临床实验室经常开展的红细胞检验项目有：红细胞计数、血红蛋白测定、红细胞形态观察、红细胞平均参数计算、网织红细胞计数、嗜碱性点彩红细胞计数和红细胞沉降率测定等。红细胞检验的临床应用价值见表2-1。

红细胞计数测定单位体积血液中的红细胞数量，是血液一般检验的基本项目。

【检测原理】

显微镜计数法  采用等渗稀释液将血标本稀释一定倍数（200倍)，滴入血细胞计数室中，显微镜下计数一定区域内的红细胞数，经换算得到每升血液中红细胞的数量，以N×10¹²/L进行报告。

【方法学评价】显微镜计数法和血液分析仪法各有特点，见表2-2。红细胞计数的参考方法为：用精密吸管手工稀释标本，半自动血液分析仪（电阻抗原理)进行红细胞计数。

【质量保证】血细胞计数的误差分别来源于技术误差、仪器误差和分布误差（表2-3)，可通过消除或减少误差进行红细胞计数的质量控制。

【参考值】①成年：男性 （4.09～5.74)×10¹²/L，女性 （3.68～5.13)×10¹²/L；②新生儿（5.2～6.4)×10¹²/L；③婴儿（4.0～4.3)×10¹²/L；④儿童（4.0～4.5)×10¹²/L。

【临床应用】

1、生理性变化  红细胞数受到许多生理因素影响，但与同年龄、性别人群的参考值相比，一般在±20%以内。

表2-4  红细胞数的生理性变化及可能机制

2、病理性变化

1)病理性增多见表2-5

表2-5  红细胞病理性增多及可能机制

2)病理性减少：各种原因导致红细胞、血红蛋白低于参考值下限，为红细胞和血红蛋白减少，通常称为贫血。贫血的诊断并不难，通过红细胞计数、血红蛋白测定或血细胞比容可确定有无贫血和贫血的程度；贫血的原因诊断较为困难，一般应结合临床和进一步检查。按病因，可将贫血分为红细胞生成障碍、过度破坏和丢失3大类，某些药物也可引起贫血（表2-6，2-7)。

红细胞计数医学决定水平：①高于6.8×10¹²/L，应采取相应的治疗措施；②＜3.5×10¹²/L为诊断贫血的界限，应继续寻找原因；③＜ 1.5×10¹²/L应考虑输血。

表2-6  贫血的病因学分类

表2-7 药物性贫血的作用机制及常见药物举例

提问、课堂讨论等师生互动的设计：

1.简述抗凝剂的选择。

2. 红细胞显微镜计数法原理如何？

3.简述血液标本的保存。

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教学小结、复习思考及作业题布置：

1.何为一张良好的血涂片？

2.如何对血涂片染色进行质量控制？

教学中的创新点（加强基础与临床联系、外语运用、启发学生思维、指导学生自学、介绍学科新进展等方面)：

增加视频教学，让学生有直观认识。提出全程质量控制和质量管理的概念。要求技术熟练，操作规范，理论联系实际，检验结果必须结合临床表现等资料

参考资料（包括辅助教材、参考书、文献等)：

1. 丛玉隆 ,王淑娟主编:《今日临床检验学》, 中国科学技术出版社,1997年。  

2．丛玉隆 ,乐家新，秦小玲，杨宏伟，王丹玲主编:《血细胞分析技术与临床》,天津科学技术出版社, 2002年。

教研室

意 见

符合教学要求，同意。

教研室主任签章： 年　　月　　日

教学后记（即教学实施情况总结分析，在课程结束后填写)

血细胞Wright染色原理，红细胞显微镜计数法原理是临检基础中最基本的内容，结合视频与动画，学生得到较好的理解，反映好。