药物分析-授课教案:第六章　芳酸及其酯类药物分析

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

第六章 芳酸及其酯类药物的分析

芳酸及其酯类药物分子结构的www.med126.com共性：既具有苯环，又有羧基，或另有取代基。

（1)水杨酸类；（2)苯甲酸类药物；（羧基直接与苯环相连)；（3)其他芳酸及其酯类药物（羧基为磺酸基或通过烃氧基等与苯环相连者)。

第一节 水杨酸类药物的分析

一、结构与理化性质

常用的水杨酸类药物结构如下：

主要理化性质

  1.溶解行为：成盐者易溶于水，其他药物溶于有机溶剂。

2.酸性：属于中等强度的酸或弱酸。

3.取代基（卤素、硝基、羟基)增加氧氢键极性，较易离解出质子，故酸性较苯甲酸强；取代基（甲基、氨基)降低氧氢键极性，使酸性较苯甲酸弱。

4.水杨酸：羟基与羧基有邻位效应，并能形成分子内氢键，酸性增强。

5．芳酸酯类药物易水解而分解，如阿司匹林、双水杨酯。

讲授结合多媒体教学以及课堂讨论和练习

复习旧课（3min)

引入新课（2min)

5min

注意：贝诺酯的命名：4-羟基乙酰苯胺的乙酰水杨酸酯；双水杨酯的命名：2－羟基苯甲酸－2－羧基苯酯。

10min

重点讲解分子内氢键，在含量测定中的水解后剩余滴定法中要涉及此项内容。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（一)三氯化铁反应

本类药物具有酚羟基或水解后能产生酚羟基，可在中性或弱酸性条件下，与三氯化铁试液反应，生成紫堇色铁配位化合物。反应适宜的pH值为4～6，在强酸性溶液中配位化合物分解。 

本反应极为灵敏，只需取稀溶液进行试验；如取样量大，产生颜色过深时，可加水稀释后观察。

（二)重氮化－偶合反应

分子结构中具有芳伯氨基（对氨基水杨酸钠)或潜在芳伯氨基（贝诺酯)的药物，加酸水解后产生芳伯氨基结构，在酸性溶液中，与亚硝酸钠试液进行重氮化反应，生成的重氮盐与碱性β－萘酚偶合产生橙红色沉淀。

贝诺酯

（橙红色)

5min

复习无机化学中的知识：

在配位化合物中，要知道中心离子、配位体和外界离子。

5min

复习有机化学中的相关知识：

重氮化反应：

在反应过程中，由于亚硝酸易分解，可直接用盐酸和亚硝酸钠在低温下进行反应。

偶合反应：

一般在邻、对位发生。

－N=N－为偶氮基。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（三)水解反应

　　阿司匹林

阿司匹林与碳酸钠试液加热水解，得水杨酸钠及醋酸钠，加过量稀硫酸酸化后，则析出白色水杨酸沉淀，并发生醋酸的臭气。沉淀物于100～105℃干燥后，熔点为156～161℃。

双水杨酯亦能产生类似的水解反应。

（四)紫外吸收光谱法

(1)利用紫外特征吸收法

贝诺酯无水乙醇溶液： λ_max为240nm；为730～760；

水杨酸二乙胺乙醇溶液：λ_max为227nm、297nm，λ_min为 257nm。

(2)利用双波长吸收度比法

对氨基水杨酸钠（pH 7磷酸盐缓冲液)：A₂₆₅/A₂₉₅的值应在1.50～1.56之间。

（五)红外吸收光谱

水杨酸的红外吸收图谱如下：

7min

请同学解释：

此处酚羟基为什么没有成钠盐？

3min

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

水杨酸的红外吸收图谱分析

对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱如下：

对氨基水杨酸钠的红外吸收图谱分析

10min,

注意取代基团对羟基、羧基、苯环的影响。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

课间休息十分钟

三、特殊杂质检查

(一)、阿司匹林中特殊杂质的检查

1、合成工艺

2、检查

（1)溶液的澄清度：利用溶解行为的差异，检查碳酸钠试液中不溶物。阿司匹林可溶于碳酸钠试液，而杂质不溶。不溶物杂质：未反应完全的酚类，或水杨酸精制时温度过高，产生脱羧副反应的苯酚，及合成中由副反应生成的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酯等。

5min

Ch.P(2005)

^{【检查】  溶液的澄清度  取本品0.50g ，加温热至约45℃的碳酸钠试液10ml溶解后，溶液应澄清。}  

酚类：

酯类：

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（2)水杨酸：由生产过程中乙酰化不完全或贮藏过程中水解产生。水杨酸对人体有毒性，而且分子中酚羟基在空气中被逐渐氧化成一系列醌型有色物质，如淡黄、红棕甚至深棕色，使阿司匹林成品变色。

检查原理：利用阿司匹林结构中无酚羟基，不能与高铁盐作用，而水杨酸则可与高铁盐反应生成紫堇色，与一定量水杨酸对照液生成的色泽比较，从而控制游离水杨酸的限量。

检查方法：取本品0.1g，加乙醇1ml溶解后，加冷水适量使成50ml，立即加新制的稀硫酸铁铵溶液[取盐酸溶液（9 100)1ml，加硫酸铁铵指示液2ml后，再加水适量使成100ml] 1ml，摇匀；30秒钟内如显色，与对照液（精密称取水杨酸0.1g，加水溶解后加冰醋酸1ml，摇匀，再加水使成1000ml，摇匀，精密量取1ml，加乙醇1ml，水48ml，与上述新制的稀硫酸铁铵溶液1ml，摇匀)比较，不得更深。其限量为0.1％。

由于阿司匹林在制剂过程中又易水解为水杨酸，因此药典规定阿司匹林片剂和肠溶片均按上述类似方法控制杂质水杨酸的限量，限量分别为：0.3％和1.5％；阿司匹林栓（HPLC法)水杨酸限量：1.0％。

（3)易炭化物：

5min

5min

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（二)对氨基水杨酸钠中特殊杂质的检查

1、合成工艺与氨基酚杂质的产生 

间氨基酚杂质的产生

原料残存

脱羧产生

中国药典（2005年版)利用对氨基水杨酸钠不溶于乙醚，而间氨基酚（杂质)易溶于乙醚的特性，使二者分离后，在乙醚中加入适量水，用盐酸滴定液（0.02mol/L)滴定，以消耗一定体积量盐酸滴定液来控制其限量。该法为双相滴定法，所生成的盐酸盐在乙醚中不溶，而转入水相中。

中国药典（2005年版)对氨基水杨酸钠检查项方法如下：

【检查】

　　　　间氨基酚　^{取本品，研细，称取3.0g，置50ml烧杯中，加用熔融氯化钙脱水的乙醚25ml，用玻璃棒搅拌1 分钟，注意将乙醚溶液滤入分液漏斗中，不溶物再用脱水的乙醚提取 2次，每次25ml，乙醚液滤入同一分液漏斗中，加水10ml与甲基橙指示液1 滴，振摇后，用盐酸滴定液(0.02mol/L) 滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，消耗}

^{盐酸滴定液(0.02mol/L) 不得过0.30ml。}

10min

有机相  

水相

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

高效液相色谱法

USP (23)采用ion-pair HPLC法检查间氨基酚的限量。

色谱条件 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶(C₁₈，10μm)，色谱柱为（250mm×4.6mm)；流动相为NaH₂PO₄液（0.05mol/L)－Na₂HPO₄液（0.05mol/L)－甲醇（含氢氧化四丁基铵1.9g)（425：425：150)；检测波长为254nm；流速约1.5ml/min。

贮备液配制  均用流动相为溶剂。内标溶液为磺胺溶液(5μg/ml)；对照品贮备液为间氨基酚溶液(12μg/ml)；供试品贮备液为对氨基水杨酸钠溶液(6.9mg/ml)。

对照品溶液制备  精密量取对照品贮备液和内标溶液各10ml，置于100ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，备用。

系统适用性试验 取对照品溶液重复进样6次，间氨基酚峰与内标磺胺峰的分离度应大于2.5；相对标准偏差不宜大于7%(按间氨基酚与内标峰的响应值之比计)。

测定方法 取对照品溶液和供试品溶液各20μl，分别进样，记录色谱图，磺胺与间氨基酚的相对保留时间为0.66。

按下式计算间氨基酚的百分含量：

  间氨基酚的百分含量=10(C/W)(R_U/R_S)

式中C为对照品溶液中间氨基酚的浓度(μg/ml)，W为供试品溶液中对氨基水杨酸钠的含量(mg)，R_U和R_S分别为供试品溶液和对照品溶液中间氨基酚峰与磺胺峰响应值之比。

规定对氨基水杨酸钠中含间氨基酚不超过0.25%。

讨论 为何选用氢氧化四丁基铵？

课间休息十分钟

复习离子对色谱法：5min

保留机制结合示意图讲解。

请同学解释：为何采用ion-pair HPLC法？

5min

提醒学生：pH值的重要性。此处重点讲解。

3min

离子对试剂浓度变化对样品离子保留的影响？

7min

什么是外插参照峰？选择的原则是什么？

10为mg与μg之间的换算。

5min

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（一)酸碱滴定法

1. 直接滴定法 阿司匹林结构中的游离羧基，可采用碱滴定液直接滴定。各国药典测定双水杨酯的含量也采用直接滴定法。 

方法：取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性)20ml，溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L)滴定。每1ml的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L)相当于18.02mg的C₉H₈O₄。

讨论：（1)为何用中性乙醇为溶剂？---防止阿司匹林酯结构在滴定时水解，致使测定结果偏高，故不用水为溶剂。

（2)为何选用酚酞？--- 强碱滴定弱酸，化学计量点偏碱性，故选用碱性区变色的酚酞。

（3)滴定时应在不断振摇下稍快地进行，以防止局部碱度过大而促使其水解。

（4)供试品中所含水杨酸超过规定限度时，则不宜用直接滴定法测定。

2. 水解后剩余滴定法 利用阿司匹林酯结构在碱性溶液中易水解，加入定量过量的氢氧化钠滴定液，加热使酯水解，剩余的碱用酸溶液回滴。

USP(24)方法：取本品约1.5g，精密称定，加入氢氧化钠滴定液（0.5mol/L)50.0ml，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/L)滴定剩余的氢氧化钠，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml的氢氧化钠滴定液（0.5mol/L)相当于45.04mg的C₉H₈O₄。

讨论：空白试验？--碱液在受热时很易吸收CO₂，用酸回滴定时会影响测定结果，故需在同样条件下进行空白试验校正之。

从反应式可知中：硫酸标准溶液(0.25mol/L)与阿司匹林的摩尔比为1：1

讲授结合多媒体教学以及课堂讨论和练习

请同学思考并回答：

（1)为何用中性乙醇为溶剂？

（2)为何选用酚酞？

15min

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

3. 两步滴定法 用于阿司匹林片和阿司匹林肠溶片的含量测定。片剂中除了加入少量酒石酸或枸橼酸稳定剂外，制剂工艺过程中又可能有水解产物（水杨酸、醋酸)产生，因此不能采用直接滴定法，而采用先中和与供试品共存的酸，再将阿司匹林在碱性条件下水解后测定的两步滴定法。

中和 取本品10片，精密称定，研细，精密称取片粉适量（约相当于阿司匹林0.3g)，加入中性乙醇(对酚酞指示液显中性)20ml，振摇使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L)至溶液显粉红色。此时中和了存在的游离酸，阿司匹林也同时成为钠盐。

水解与测定 在中和后的供试品溶液中，加入定量过量的氢氧化钠滴定液（0.1mol/L)40 ml，置水浴上加热15min并时时振摇(使酯结构水解)，迅速放冷至室温，再用硫酸滴定液(0.05mol/L)滴定剩余的碱，并将滴定的结果用空白试验校正。

含量计算  供试品中阿司匹林(分子量=180.16)的含量，由水解时消耗的碱量计算。

水解与测定反应：

反应式中，硫酸标准溶液(0.05mol/L)与阿司匹林的摩尔比为0.5:1，

故T=0.05×(1/0.5)×180.16=18.02(mg/ml)

  ASA的标示量%＝

20min

1.为何采用两步滴定法？所谓两步指的是哪二个过程？

2.硫酸标准溶液(0.05mol/L)与阿司匹林的摩尔比为多少？

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

式中：V₀为空白试验消耗硫酸滴定液体积（ml)；V为样品测定试验消耗硫酸滴定液体积（ml)；F为硫酸滴定液浓度校正因数；T为滴定度，W为供试品片粉取样量（g)；为平均片重（g)。

阿司匹林肠溶片的含量测定亦采用两步滴定法。

（二)亚硝酸钠滴定法---对氨基水杨酸钠 中国药典（2005年版)

（三)高效液相色谱法

为了分离原料药和制剂中的杂质、辅料以及稳定剂等，中国药典（2005年版)采用高效液相色谱法测定阿司匹林栓剂；USP(23)用于测定对氨基水杨酸钠及其片剂，阿司匹林片剂，长效与缓冲片剂，缓释胶囊等。

（四)柱分配色谱－紫外分光光度法

1. 水杨酸的限量测定

2. 含量测定

(五)血清中阿司匹林（ASA)和水杨酸（SA)浓度的HPLC测定法

中国药典（2005年版)采用亚硝酸钠滴定法测定含量的药物有：

对氨基水杨酸钠及其制剂对氨基水杨酸钠肠溶片、注射用对氨基水杨酸钠。

亚硝酸钠滴定法-此处略讲。

5min

何为内标法？

配合课件演示讲解。

此测定法，请学生自学。

问题讨论(5min)；

作业和习题布置2(min)；

归纳总结(3min)。

小 结

本节课主要讲授了①药物的鉴别反应，要掌握与铁盐反应、重叠化-偶合反应、水解反应、分解产物反应及UV、IR；②药物特殊杂质检查方法，主要掌握阿司匹林中、对氨基水杨酸钠中、氯贝丁酯中特殊杂质检查，特别是双相滴定法及其原理；离子对色谱法及其原理。

复习思考题

或

作 业 题

1.芳酸及其酯类药物有哪些鉴别方法？

2.阿司匹林、对氨基水杨酸钠中特殊杂质各是什么？怎样检查？

3.联系贝诺酯的鉴别试验，解释什么是重氮化-偶合反应？

4.双相滴定法及其原理？

5.离子对色谱法及其原理？

6.在水杨酸与铁盐的反应中，其适宜的pH值为多少

7.间氨基酚的限量为何采用ion-pair HPLC法？

教 学 效 果

与 分 析

多媒体教学和板书相结合，并结合一定的实例，加深学生对知识点的认识和了解。特别是通过问题讨论，让大家对所学知识进行回顾、讨论，建立一个互动的教学氛围。效果较好，为下节课水杨酸类药物的继续学习及其质量综合评价打下基础。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

第二节 苯甲酸类药物的分析

各国药典收载的本类药物有苯甲酸及其钠盐(Benzoic Acid and Sodium Benzoate)、布美他尼(Bumetanide)、羟苯乙酯(Ethylparoben)及丙磺舒(Probenecid)等药物及其制剂。

一、鉴别试验

（一)三氯化铁反应

1. 苯甲酸的碱性水溶液或苯甲酸的中性溶液，与三氯化铁试液生成碱式苯甲酸铁盐的赭色沉淀。

复习旧课（2min)；

作业解析(3min)；

5min

丙磺舒：

对-[(二丙氨基)磺酰基]苯甲酸。

甲芬那酸：

(2,3-二甲苯基)氨基苯甲酸

5min

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

2.丙磺舒加少量氢氧化钠试液使生成钠盐后，在pH约5.0～6.0水溶液中与三氯化铁试液反应，即产生米黄色沉淀，产物结构式为：

（二)分解产物的反应

1. 苯甲酸盐可分解成苯甲酸升华物，分解产物可用于鉴别。如苯甲酸钠置干燥试管中，加硫酸后，加热，不炭化，但析出苯甲酸，在试管内壁凝成白色升华物。

2. 含有卤素或硫的药物,可分解后鉴别。丙磺舒与氢氧化钠熔融，分解生成亚硫酸钠，经硝酸氧化成硫酸盐，而显硫酸盐反应。

3.丙磺舒

高温加热后，能产生二氧化硫气体，具臭味。

（三)紫外吸收与红外吸收光谱

利用其最大、最小波长及吸收系数进行鉴别。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

1.羟苯乙酯中有关物质的检查

反相薄层色谱法，供试品自身对照，BP（1998)。

方法：

吸附剂：GF₂₅₄C₁₈化学键合硅胶

展开剂：甲醇-水-冰醋酸（70：30：1)

检查：取羟苯乙酯丙酮溶液[1.0%①和0.01%②]各2μg点样，展开后中，挥开溶剂，在254nm紫外灯下检视。溶液①所得任何第二个斑点的大不小和强度不应超过溶液②的斑点。

讨论：两类固定相

物理结合的:

化学键合的：

2.甲芬那酸中特殊杂质的检查

合成工艺

以邻-氯苯甲酸（o-chlorobenzoic acid)和2,3-二甲基苯胺（2,3-dimethylaniline)为原料，在铜的催化下缩合而成[JP（13)]。

  检查

1.“铜盐”检查法

（1)分光光度法：取本品1.g，加硫酸湿润后，炽灼俟灰化完全后，加0.5mol/L硫酸溶液10ml。放置10min，用水20ml转移至另一分液漏斗中，加含20%的枸椽酸二铵与5%的乙二胺四醋酸二钠的混合溶液10ml，

请同学解释：

硅胶GF₂₅₄

两类固定相

5min

“铜盐”检查法又称二乙基二硫代氨基甲酸钠比色法。为Ch.P(2005)所收载 。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（2).原子吸收分光光度法：BP（1998)规定原子吸收分光光度法测定铜含量不得超过百万分之十。

2.有关物质

（1)检查方法：薄层色谱法

溶剂：三氯甲烷：甲醇（3：1)

　　　　　　浓度：供试品――25mg/ml

   对照品――50μg/ml

　　　　　　 点样量：20μl

　　　　　　展开剂：异丁醇-浓氨溶液（3：1)

薄层板：硅胶GF₂₅₄

    检测方法：碘蒸气中放置5min，置紫外光灯下（254nm)下检视。

结果：供试品溶液如显杂质斑点与对照溶液的主斑点比较，不得更深。其限量为0.2%。

JP（13)与上述方法不同之处：

  对照品――20μg/ml

点样量：25μl

　限量：0.1%.BP（1998)：

薄层板：硅胶GF₂₅₄

   供试品溶液：0.125g，加甲醇-二氯甲烷（1：3)溶解稀释至5ml。

　对照品溶液（a)：取供试品溶液1ml，加甲醇-二氯甲烷（1：3)

混合液稀释至50ml。取此液1ml，加甲醇-二

氯甲烷（1：3)混合液使溶解并稀释至10ml，

即得。

　对照品溶液（b)：取氟芬那酸（flufenamic acid)5mg和甲芬那

酸5mg，加甲醇-二氯甲烷（1：3)混合液使溶解并稀释至10ml，即得。

　测定法：供试品溶液和对照溶液各点样20μl，于同一薄层板上，

用冰醋酸-二氧六环-甲苯（1：25：90)混合液为展开

剂展开约15cm，将薄层板置暖气流中干燥后，再于碘

蒸气中放置5min，在紫外灯（254nm)下检测。供试液

色谱图中，除主斑点外，任何斑点不得比对照溶液（a)

的斑点深（0.2%)。本试验必须在对照溶液（b)显示两

个清晰的分离斑点时方有效，否则无否。

5min

此处提示同学注意：不同国家药典对有关物质检查的异同。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（2)讨论：

①各国药典采用的薄层色谱法，均是利用供试品自身高低浓度对照法进行检查的。

②有关物质。

三、含量测定

（一)酸碱滴定法

1. 直接滴定法---苯甲酸、丙磺舒、甲芬那酸[Ch.P(2005)]。

2. 水解后剩余滴定法 羟苯乙酯具有羧酸酯，利用此结构在碱性溶液中水解的性质，加入定量过量的氢氧化钠滴定液，回流使酯水解，剩余的碱以酸回滴定，同时进行空白试验校正。 

  （二)双相滴定法

利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，在水相中加入与水不相混溶的有机溶剂，并置于分液漏斗中进行滴定反应，将滴定过程中产生的苯甲酸不断萃取入有机溶剂层中，减少苯甲酸在水中的浓度，使滴定反应完全，终点清晰，同时可降低苯甲酸的离解。

方法：取本品1.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水25ml、乙醚50ml及甲基橙指示液2滴，用盐酸滴定液（0.5mol/L)滴定，随滴随振摇，至水层显橙红色，分取水层，置具塞锥形瓶中，乙醚层用水5ml洗涤，洗液并入锥形瓶中，加乙醚20ml，继续用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定，随滴定随振摇，至水层显持续的橙红色。每1ml的盐酸滴定液（0.5mol/L)相当于72.06mg的C₇H₅NaO₂。

5min

^酚磺酞的变色范围  pH6.8～8.4（黄→红)

酚酞的变色范围  pH8.3～10.0（无色→红)。

10min

10min

有机相

界面

水相

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（四)高效液相色谱法---丙磺舒原料药USP(23)

（五)尿中丙磺舒的固相萃取净化－高效液相色谱分析法

生物体液中丙磺舒及其制剂的含量测定，常采用HPLC法。但生物样本净化若应用液－液萃取，需要多次提取操作，分析时间长。高效液相色谱分析中，大多在流动相中利用离子对试剂或磷酸盐缓冲剂。而要获得重现性好的结果，一定要严格控制实验条件，特别是pH值、离子强度和温度。另一方面，因为丙磺舒色谱峰不对称且灵敏度低，样品测定检测限为0.25g/ml～10g/ml。这样，不能检测服药24h后的药物浓度。

为了评价尿样中丙磺舒对运动员违禁药物尿排泄的作用，可采用固相萃取净化－高效液相色谱法进行快速、灵敏的测定。

色谱条件

对照品溶液的制备

尿样的处理 C₈固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml，然后用0.5ml蒸馏水使活化。内标物甲醇溶液（10μg/ml)300μl加入2.0ml尿中，样品通过柱子后，用蒸馏水1.0ml洗去生物基质。再用甲醇0.5ml洗脱柱子，所得药物和内标物的洗脱液经0.45μ m滤膜滤过，取5μl进样分析，得色谱图（图6-4)。

此处略讲，以学生自学为主。

结合尿中丙磺舒的固相萃取净化－高效液相色谱分析法讲解什么是内标物？其基本要求是什么？

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

人尿样品测定

第三节 其他芳酸类药物的分析

一、典型药物的结构

氯贝丁酯(Clofibrate)： 2-甲基-2-(4-氯苯氧基)丙酸乙酯，又称安妥明或氯苯丁酯。

二、鉴别试验

1. 三氯化铁反应  

布洛芬

其无水乙醇溶液，加入高氯酸羟胺-无水乙醇试液及N，N’-双环己基酸二亚胺（DCC)-无水乙醇试液，混合后，在温水中加热20min。冷却后中，加高氯酸铁-无水乙醇液，即呈紫色［JP(14)的方法］。《中国药典》采用紫外的最大、最小吸收及红外光谱进行鉴别。

2. 重氮化－偶合反应

甲芬那酸

甲芬那酸的甲醇溶液，与对-硝基苯重氮盐试液在氢氧化钠碱性条件下偶合产生橙红色[JP（13)的方法]。

3．氧化反应

4．UV、IR

3min

氯贝丁酯：

2-甲基-2-(4-氯苯氧基)丙酸乙酯，又称安妥明或氯苯丁酯。

布洛芬：

2-(4-异丁基苯基)丙酸

2min,重点讲解三氯化铁反应和重氮化反应。

此法为

JP(14)的方法

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

三、特殊杂质检查

氯贝丁酯中特殊杂质的检查

（一)合成工艺

氯贝丁酯的合成是以对氯酚为起始原料，生产过程中的主要中间体为对氯苯异丁酸。合成工艺如下：

  对氯酚为氯贝丁酯合成的起始原料，同时，氯贝丁酯由于分解也能产生对氯酚，故在成品中常有微量存在。因其毒性大，各国药典均检查对氯酚。

（二)对氯酚的检查方法

1.气相色谱法

色谱条件：

对照品溶液：

供试品溶液：

测定法：

讨论：

2.高效液相色谱法[JP（13)的方法]

色谱条件：

内标溶液：

供试品溶液：

对照品溶液：

测定法：

5min

来源：原料及产品分解

5min

因供试品是经处理后才上柱的，此时已不含氯贝丁酯，因此书上的解释有不妥之处。对

以上作解释。

JP(13)采用的是氰基柱，适合分离极性化合物，尤其是在硅胶柱上峰形不对称化合物的分析。一般为正相色谱。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

采用气相色谱法检查合成过程中试剂等挥发性杂质的检查。

色谱条件：

预试溶液：

供试品溶液：

四、含量测定

1.氯贝丁酯（P130)：两步滴定法ChP（2005)

两步滴定法 为了消除供试品中共存的酸性杂质，在加热水解前，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L)中和溶液至中性（对酚酞指示液显中性)。然后加入定量过量的氢氧化钠滴定液（0.5mol/L)，加热回流水解，生成对氯苯氧异丁酸钠和乙醇，剩余的氢氧化钠用盐酸滴定液（0.5mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正，测得药物的含量。

方法 取氯丁贝酯2g，精密称定，置锥形瓶中，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性)10ml与酚酞指示液数滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L)至显粉红色，再精密加氢氧化钠滴定液（0.5mol/L)20ml，加热回流1小时至油珠完全消失，放冷，用新沸过的冷水洗涤冷凝管，洗液并入锥形瓶中，加酚酞指示液数滴，用盐酸滴定液（0.5mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1 ml的氢氧化钠滴定液（0.5mol/L)相当于121.4mg的C₁₂H₁₅ClO₃。 

2. 氯贝丁酯（P131)：离子交换后紫外分光光度法USP(23)

氯贝丁酯和对氯酚等杂质均具有紫外吸收，因此需采用强碱性阴离子交换树脂吸附酸性杂质后，方可定量测定氯贝丁酯的含量。

离子交换树脂的预处理：

离子交换柱的制备：　

测定法：　　  

此处略解，由学生自学为主。

15min，重点讲解两步滴定法

问题讨论(15min)；

作业和习题布置(2min)；

归纳总结(3min)。

小 结

本次课讲授的主要内容为鉴别试验，要掌握与铁盐反应、重叠化-偶合反应、水解反应、分解产物反应及UV、IR；特殊杂质检查，应掌握对氨基水杨酸钠中、氯贝丁酯中特殊杂质检查；含量测定，应掌握水解后剩余滴定法、两步滴定法、双相滴定法在含量测定中的应用。

复习思考题

或

作 业 题

1. 为何采用两步滴定法测定阿司匹林的含量？所谓两步指的是哪二个过程？

2.在阿司匹林含量测定的两步滴定法中，为什么酚羟基没有成钠盐？

3. 在阿司匹林含量测定的两步滴定法中，为什么选用中性乙醇？

4.在水杨酸与铁盐的反应中，其适宜的pH值为多少？联系此点解释USP(24)采用柱分配色谱-紫外法测定阿司匹林制剂的含量及其水杨酸限量检查的原理。

教 学 效 果

与 分 析

多媒体教学和板书相结合，并结合一定的实例，加深学生对知识点的认识和了解。特别是通过问题讨论，让大家对所学知识进行回顾、讨论，建立一个互动的教学氛围。效果较好。