药物分析-授课教案:第九章　维生素类药物分析

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

第九章　维生素类药物的分析

维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的一类活性物质，主要用于机体的能量转移和代谢调节。

人体不能合成维生素，须从食物中摄取。

中国药典收载有30余个品种，按溶解度分为

脂溶性维生素：VitA、D₂、D₃、 E、K1 等 

水溶性维生素：VitB族(B₁、B₂、B₆、B₁₂)

  　　　　　　VitC、叶酸（VitM)、烟酸、烟酰胺（Vitpp)

　　　　　　　　　第一节　　维生素A的分析

维生素A(vitamin A)包括维生素A₁(视黄醇，retinol)、去氢维生素A（dehydroretionl，维生素A₂)和去水维生素A（anhydroretinol，维生素A₃)等，其中维生素A₁活性最高，维生素A₂的生物活性是维生素A₁的30%～40%，维生素A₃的生物活性是维生素A₁的0.4%。通常所说的维生素A系指维生素A₁，其为一种不饱和脂肪醇，在自然界中主要来自鲛类无毒海鱼肝脏中提取的脂肪油（通称为鱼肝油)，其含量高达600000国际单位/克（IU/g)，多以各种酯类混合物的形式存在，其中主要为醋酸酯和棕榈酯。目前主要采用人工合成方法提取。

中国药典收载的维生素A是指人工合成的维生素A₁醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，还收载维生素A胶丸、维生素AD胶丸和维生素AD滴丸等。

美国药典收载的维生素A是指维生素A及其醋酸酯、棕榈酸酯混合物的食用油溶液。

英国药典收载的人工合成浓缩维生素A是维生素A醋酸酯、丙酸酯和棕榈酸酯混合物的植物油提取溶液。

R :　-H  维生素A醇

-COCH3  维生素A醋酸酯

   -COC15H31  维生素A棕榈酸酯

讲授结合多媒体教学

复习旧课（3min)

作业解析(5min)

引入新课(2min)

简介

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（一)为一个具有共轭多烯侧链的环己烯

1.具有UV吸收

2.存在多种立体异构化合物

  相对生物效价　　　顺反异构

维生素A   325.5   100% 　　 　　全反

新维生素Aa   328  75%　　　　　2-顺

新维生素Ab   320.5   24%　　　　   4-顺

新执业药师维生素Ac   310.5 15%　　　　　2,4-二顺

异维生素Aa   323  21%　　　  　6-顺

异维生素Ab   324     24%　　　 　2,6-二顺

3. 易发生脱氢、脱水、聚合反应

Vit A₂

Vit A₃

鲸醇

5min，重点讲解其全反式结构及其不稳定性。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

△或有金属离子存在时氧化↑

环氧化物

VitA醛

VitA酸

（三)与三氯化锑发生呈色反应

（四)溶解性

不溶于水

易溶于有机溶剂和植物油等

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（一)三氯化锑反应

   条件：无水乙醇

蓝色

   紫红

（二)UV法（BP（1998))

λmax为326nm　　　　 λmax为350～390nm

一个吸收峰 三个吸收峰

5min，三氯化锑指出其存在不足：专属性差，呈色不稳定。

重点讲解UV法。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

去水VitA（VitA3)

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

BP   杂质对照品法 

   　　　　　　　　显色剂  三氯化锑

USP 显色剂 磷钼酸

    规定斑点颜色和R_f值

三、含量测定

（一)UV法

维生素A中常含有杂质：立体异构体、氧化产物及光照产物、合成中间体、去氢维生素A（ VitA₂)、去水维生素A（ VitA₃)。

三点校正法

1.  条件：

（1)杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；

（2)物质对光的吸收具有加和性。

2.  波长的选择：

（1) l1

VitA的lmax（328nm)

（2) l2   l3

  分别在l1的两侧各选一点

第一法  等波长差法

测定对象  VitA醋酸酯

30min，此为本节、本章重点、难点，配合多媒体课件讲解。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

测定对象  VitA醇

3. 测定法

（1)基本步骤:

v   第一步   A选择

选择依据：

所选A值中杂质的干扰已基本消除

第二步  求

注意：

Ø   

C 为混合样品的浓度 

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

换算因数由纯品计算而得：

第四步：求标示量％

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

　　　　方法：

判断  是否在326～329nm之间

在326～329nm之间

　   　　　　　是　　　　　否　　　　　　　

　　　　　　　　求算　　　　　　　　改用第二法

   并与规定值比较

　　　规定值　　　差值 

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

　　　有一个以上超过±0.02   无超过±0.02 

计算 A328（校正)   用A328计算

第二法　　　  　  　　　　第二法

　　　　－15%　　　　－3%　　　　　　0　　　　3%

VitAD胶丸中VitA的含量测定

精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸)的内容物 0.2399g 至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20 ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为

A300： 0.354   A300 /A328  ：0.555

A316： 0.561  A316/A328   ：0.907

A328： 0.628　　  　A328/A328   ：1.000

A340： 0.523 　　   A340/A328   ：0.811

A360： 0.216     A360/A328   ：0.299

求本品中维生素A的含量？

A300 /A328 ： 0.564－0.555＝+0.01

A316/A328 ：  0.893－0.907＝-0.01

A328/A328 ：  1.000－1.000＝0

A340/A328 ：  0.833－0.811＝+0.02

A360/A328 ：  0.344－0.299＝+0.04

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（3)第二法  （等吸收度法)

　　　　　　　[ 皂化法、6/7A法 ]

适用于维生素A醇

第一法无法消除杂质干扰时用此法

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

　　　　　　　　　　　　　　是　　　　　　　否

计算　　　　取未皂化样品采用

色谱法纯化后再测定

判断是否大于0.73

　   　　　　　是　　　　　否　　　　　　　

　　　　　　　　求算（校正)　　 未皂化样品采用色谱法

纯化后再测定

　　　  －3%　　　　　　0　　　　　　3%

三氯化锑比色法  标准曲线法

　　　　　　　　　　　　　　λmax 618nm～620nm

优点   简便 快速

　　　　　　　　呈色不稳定 （5 ~ 10s内)

　　　　　　　　水分干扰　　　

　缺点  与标准曲线温差≤1℃

　　　　　　　　专属性差

三氯化锑有腐蚀性

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

课间休息十分钟

   HCl

　　　　　　　　　CI^－

氨基嘧啶环－CH₂－噻唑环(季铵碱)

一、结构与性质

（一)溶解性

   1、易溶于水

　 2、水溶液呈酸性

（二)UV　共轭双键

λmax = 246nm

（三)硫色素反应

（四)碱性 嘧啶环 —— 伯氨

　　　　　　　噻唑环 —— 季铵

   1、可与酸成盐

2、与生物碱↓→↓

3、含量测定 —— 非水碱量法

二、鉴别试验

（一)硫色素反应　　Ch.P

5min，其中：

结构讲解3min，重点为结构中的伯胺、季胺盐。

性质讲解2min.

5min

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（二)沉淀反应　　VitB₁

（三)其他反应

　　　　　　　　　（硫元素反应)

　　　　　　　（CI^－反应)

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（一)非水溶液滴定法

   喹那啶红－亚甲蓝

（紫红→天蓝)

(二)UV法

15min，其中非水溶液滴定法和UV法讲解15min，硫色素法讲解5min。

计算板书讲解

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

   A=ELC

（每片)相当于标示量的%=

（每ml)相当于标示量的%=

（三)硫色素荧光法

1、原理

计算板书讲解。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

激发波长365nm

　　 发射波长435nm

   　　  + NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇　　　　　  　S

　　　对照液

  　　+ NaOH + 异丁醇　　　　　　　　　　 　　d

　　 + NaOH + 铁氰化钾 + 异丁醇　　　　　　　A

　　　供试液

   + NaOH + 异丁醇　　　　　　　　　　 　　b

3、特点

（1)灵敏度高，线性范围宽

（2)代谢产物不干扰，适用于体液分析

第三节 维生素C

L－抗坏血酸

一、结构与性质

（一)溶解性

　  　1、易溶于水

2、水溶液呈酸性

   （二)强还原性 二烯醇结构

15min,使用多媒体教学课件讲解

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

有活性 有活性 　　   无活性

(三) 具糖的性质  结构与糖类相似

糖类的显色反应

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

C3－OH的 

pKa = 4.17

C2－OH的

pKa = 11.57

（六)水解反应  与碱反应

（七) UV特征

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（一)与氧化剂的反应

1、与AgNO3反应  (ChP2005)

2、与2，6 - 二氯靛酚反应  (ChP2005)

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

4、与KMnO4反应

（二)糖类的反应  USP

（三)UV  BP

0.01mol/L HCl

使用多媒体教学课件讲解

问题讨论(5min)

作业和习题布置(2min)

归纳总结(3min)

小 结

本次课主要讲授了维生素A的含量测定方法----三点校正法(要求同学掌握)；维生素B₁所特有的专属性鉴别反应----硫色素反应(要求同学熟悉)；维生素A、B、C的结构与性质(要求同学加以了解)。

复习思考题

或

作 业 题

1、维生素A不稳定的原因及其不稳定的因素？

2、三氯化锑用于维生素A鉴别的原理及其所存在的不足。

3、分析维生素A及去水维生素A的紫外吸收光谱。

4、维生素A紫外分光光度法（三点校正法)测定的原理是什么？

5、维生素B1的结构、性质及维生素B₁特有的反应是什么？

6、为什么要对维生素C进行铁和铜离子的检查

教 学 效 果

与 分 析

多媒体教学和板书相结合，并结合一定的实例，加深学生对知识点的认识和了解。特别是通过问题讨论，让大家对所学知识进行回顾、讨论，建立一个互动的教学氛围，使同学们掌握本次课的学习内容。效果较好。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

第三节 维生素C的分析

 三、含量测定

（一)碘量法

1、原理

指示剂 淀粉指示液

2、方法

取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C₆H₈O₆.

复习旧课（3min)

作业解析(5min)引入新课(2min)

30min

板书计算演示

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（1)酸性环境  稀醋酸

   减慢VitC被O2氧化速度

（2)新沸冷H2O 赶走水中O2

（3)立即滴定   减少O2的干扰

（4)附加剂干扰的排除

   片剂 —— 滑石粉 —— 过滤

   注射剂 —— 抗氧剂 ——丙酮、甲醛

（二)2，6 - 二氯靛酚钠滴定法法

USP  JP

1、原理

2、方法

自身指示终点法

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（1)酸性环境 HPO3-HAc

稳定VitC

（2)快速滴定 2min内

  防止其他还原性物质干扰

（3)剩余比色测定  

（4)缺点

不稳定 需经常标定

贮存≤一周

干扰多 氧化力较强

（三)HPLC法

1、HPLC的优点

灵敏度高  微量分析

选择性高  干扰少

分离分析同步  快速

2、HPLC法分离VitC常用方法及测定对象 

方法  离子交换色谱法

离子对色谱法

分配色谱法（正、反相)

    对象  制剂、生物样品、果汁

血、尿、组织、细胞等

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

   色谱柱  ODS

流动相  A、水 -甲醇（4  ：1)

  B、甲醇

 （梯度洗脱)

抗氧剂 二巯基丙烷磺酸钠

  水溶性维生素

    离子对色谱法（樟脑磺酸)

    内标法 + 校正因子

    内标物——苯酚

脂溶性维生素  外标法

第四节   维生素D的分析

一、结构与性质

维生素D₂为9,10-开环麦角甾-5,7，10(19)，22-四烯-3β-醇，又名骨化醇(calcifyerol)或麦角骨化醇(ergocalciferol)。

维生素D₃为9，10开环胆甾-5,7，10(19)-三烯-3β-醇，又名胆骨化醇(colecalciferol)。

二者差别仅是维生素D₂比维生素D₃在侧链是多一个双键，C₂₄上多一个甲基。

5min

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

1、性质  无色针状结晶或白色结晶性粉末；无臭，无味；遇光、空气易变质。

2、溶解性  易溶于有机溶剂，略溶于植物油，不溶于水。

3、不稳定性  含多个烯键，遇光、空气或其它氧化剂易氧化变质；对酸也不稳定。

4、旋光性  维生素D₂具6个手性碳原子，维生素D₃具5个手性碳原子，均具旋光性。

5、显色反应 

6、紫外吸收特性 浓度10μg/ml，256nm

   维生素D2   =460～490；

   　　维生素D3   =465～495。

二、鉴别试验

(一)显色反应

1、与醋酐-浓硫酸反应   Ch.P(2005)

^{【鉴别】  (1) 取本品约0.5mg ，加氯仿5ml 溶解后，加醋酐0.3ml 与硫酸0.1ml,}

^{振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后成绿色。}  

2、与三氯化锑反应 

3、其它显色反应  与三氯化铁-----橙黄色

  与二氯丙醇和乙酰氯试剂-------绿色

(二) 比旋度鉴别  Ch.P(2005)  性状项下：

维生素D₂

^{比旋度  取本品，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1ml 中含40mg的溶液，依法测定（附录Ⅵ E)，比旋度为+102.5°至+107.5℃（应于容器开启后30分钟内取样，并在溶液配制后30分钟内测定)。}

^维生素D3 

^{比旋度  取本品，精密称定，加无水乙醇溶解并定量稀释制成每1ml 中含5mg 的溶液，依法测定（附录Ⅵ E)，比旋度为+105至+112°（应于容器开启后30分钟内取样，并在溶液配制后30分钟内测定)。}

(三) 其他鉴别方法

TLC、HPLC、衍生物熔点、UV、IR

5min

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

(四)维生素D₂、D₃的区别反应

讨论：维生素C碘量法的测量相差关内容。

课间休息十分钟

三、杂质检查

(一)麦角甾醇检查

维生素D₂ [Ch.P(2005)]

^{维生素D3无检查项。}

^{(二)前维生素D的光照产物}

^{D族维生素都是甾醇衍生物，只是侧链不同。}

^{维生素D2、D3分别从5,7-二烯甾醇前体7-氢胆甾醇和麦角甾醇的光照而得。}  

5min

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

USP(24)：化学法、色谱法和微生物法

BP(2000)：化学法、光谱法和色谱法

Ch.P(2005)：RHPLC

(一)维生素D测定法

本法系用高效液相色谱法(附录Ⅴ Ｄ)测定维生素D(包括维生素D₂和D₃,下同)及其制剂、维生素AD制剂或鱼肝油中所含维生素D及前维生素D经折算成维生素D的总量，以单位表示，每单位相当于维生素D0.025μg。

Ch.P(2005)：

维生素D₂含量测定：

^{【含量测定】  精密称取本品25mg，置100ml 棕色量瓶中，加三甲基戊烷80ml，避免加热，用超声处理助溶1 分钟使完全溶解，加三甲基戊烷至刻度，摇匀；精密量取上述溶液与内标溶液各5ml ，置50ml棕色量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀，作为供试品溶液。照维生素Ｄ测定法（附录Ⅶ K 第一法)测定，即得。}  

^{维生素D3含量测定 :}

^{【含量测定】  精密称取本品25mg，置100ml 棕色量瓶中，加三甲基戊烷80ml，避免加热，用超声处理1分钟使完全溶解，加三甲基戊烷至刻度，摇匀，作为供试品溶液。照维生素Ｄ测定法（附录Ⅶ K 第一法)测定，即得。}    

测定应在半暗室中及避免氧化的情况下进行。 

10min

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

^第一法   

^{对照品贮备溶液的制备  根据各制剂中所含维生素D的成分,精密称取相应的维生素D2或D3对照品25mg,置100ml棕色量瓶中，加异辛烷80ml，避免加热，用超声处理助溶1分钟使完全溶解，加异辛烷至刻度，摇匀，充氮密塞，避光，0℃以下保存。}

^{测定维生素D2时，应另取维生素D3对照品25mg，同法制成维生素D3对照品贮备溶液，供系统适用性试验用。}

^{内标溶液的制备  称取邻苯二甲酸二甲酯25mg，置25ml量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀。}  

^{色谱条件与系统适用性试验  用硅胶为填充剂，正己烷－正戊醇（997∶3)为流动相，检测波长为254nm。量取维生素D3对照品贮备溶液5ml，置具塞玻璃容器中，通氮后密塞，置90℃水浴中加热1小时，取出迅速冷却，加正己烷5ml， 摇匀，置1cm具塞石英吸收池中，在2支8W主波长分别为254nm和365nm的紫外光灯下， 将石英吸收池斜放成45°,并距灯管5～6cm,照射5分钟,使溶液中含有前维生素D3、反式维生素D3、维生素D3和速甾醇D3；取此溶液注入液相色谱仪，测定维生素D3的峰值，先后进样5次,相对标准偏差应不大于2.0％；前维生素D3(与维生素D3的比保留时间约为0.5)与反式维生素D3(与维生素D3的比保留时间约为 0.6)以及维生素D3与速甾醇D3(与维生素D3的比保留时间约为1.1)的峰分离度均应大于1.0。}

^{校正因子测定  精密量取对照品贮备溶液和内标溶液各5ml,置50ml量瓶中，加正己烷至刻度，摇匀；取一定量注入液相色谱仪，计算维生素D的校正因子f1。}

^{另精密量取对照品贮备溶液5ml置50ml量瓶中，加入2,6－二叔丁基对甲酚结晶1粒,通氮排除空气后，密塞，置90℃水浴中加热1．5小时，取出迅速冷却至室温，精密加内标溶液5ml，加正己烷至刻度，摇匀；取一定量注入液相色谱仪，计算前维生素D折算成维生素D的校正因子f2。}

^{f2＝(Asmr－f1msAr1)／Ar2ms}

^{式中  As为内标的峰值；}  

^{mr为加入对照品的量；}     

^{f1为维生素D的校正因子；}

^{ms为加入内标物质的量；}  

^{Ar1为维生素D的峰值；}

^{Ar2为前维生素D的峰值。}

^{含量测定  取各该制剂项下制备的供试品溶液进行测定,按下列公式计算维生素D及前维生素D折算成维生素D的总量(mi)。}  

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

^{式中  Ai1为维生素D的峰值；}  

^{Ai2为前维生素D的峰值；}

^{ms为加入内标物质的量；} 

^{As为内标的峰值。} 

^第二法  

^{精密称取供试品适量(相当于维生素D总量600单位以上，重量不超过2.0g)，置皂化瓶中，加乙醇30ml、抗坏血酸0.2g与50％(g／g)氢氧化钾溶液3ml[若供试量为3g，则加50％(g／g)氢氧化钾溶液4ml]，置水浴上加热回流30分钟，冷却后，自冷凝管顶端加水10ml冲洗冷凝管内壁，将皂化液移至分液漏斗中，皂化瓶用水60～100ml分数次洗涤,洗液并入分液漏斗中，用不含过氧化物的乙醚振摇提取3次，第一次60ml,以后每次40ml，合并乙醚液，用水洗涤数次，每次约100ml，洗涤时应缓缓旋动，避免乳化,直至水层遇酚酞指示液不再显红色，静置，分取乙醚提取液，加入干燥滤纸条少许振摇除去乙醚提取液中残留的水分，分液漏斗及滤纸条再用少量乙醚洗涤，洗液与提取液合并，置具塞圆底烧瓶中，在水浴上低温蒸发至约5ml，再用氮气流吹干，迅速精密加入甲醇3ml，密塞，超声处理助溶后，移入离心管中，离心，取上清液作为供试品溶液A。}

^{净化用色谱柱系统分离收集维生素D  精密量取上述供试品溶液A 500μl,注入以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的液相色谱柱，以甲醇－乙腈－水(50∶50∶2) 为流动相进行分离，检测波长为254nm，从计录仪上观察色谱图，要求维生素D与前维生素D为叠峰，并能与维生素A及其他干扰含量测定的杂质分开；准确收集含有维生素D及前维生素D混合物的全部流出液，置具塞圆底烧瓶中，用氮气流迅速吹干,精密加入已知内标浓度的正己烷溶液适量(不少于2ml，并使每1ml中含维生素D为50～140单位,内标物质与维生素D的重量比约为4∶1)，密塞，超声处理助溶，即为供试品溶液B。}

^{取供试品溶液B，按第一法进行含量测定，进样量为100～200μl。} 

^第三法  

^{供试品溶液的制备  取各该制剂项下制备的供试品溶液A,按上述第二法净化用色谱柱系统分离维生素D项下的方法处理,至“用氮气流迅速吹干”后, 加入异辛烷2ml溶解,通氮排除空气后，密塞，置90℃水浴中，加热1.5小时后，立即通氮在2分钟内吹干，迅速精密加入正己烷2ml，溶解后，即为供试品溶液C。}

^{对照品溶液的制备  精密量取对照品贮备溶液适量,加异辛烷定量稀释制成每1ml中约含维生素D 50单位，精密量取2ml置具塞圆底烧瓶中，照供试品溶液制备项下的方法,自“通氮排除空气后”起，依法操作，得对照品溶液。}

^{含量测定  在上述第一法的色谱条件下，取对照品溶液与供试品溶液C,交替精密进样200μl，量取维生素D的峰值，按外标法计算含量。}

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

第五节 维生素E

　　　　　　　　　　　　苯并－二氢吡喃醇

名　　称　　　　　　　R₁　　R₂　　　　相对活性

α-生育酚　　　　　　CH3　　　　　CH3　　　　1.0　

β-生育酚   CH3  H 0.5

γ-生育酚 H   CH3　　　　0.2

δ-生育酚　　　　　　 H H 0.1

生物效价

   右旋体 ： 消旋体   =  1.4 ：10

（天然品)   （合成品)

dl－α－生育酚醋酸酯

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

苯环 + 二氢吡喃环 + 饱和烃链

1、易溶于有机溶剂，不溶于水

2、UV

3、酯键   易水解

二、鉴别

(一)硝酸反应

取本品约30mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2ml，摇匀，在75℃加热15分钟，溶液应显橙红色。

（二)三氯化铁－联吡啶反应

5min

5min

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

（三)UV法

0.01%无水乙醇中

λmax = 284nm

λmin = 254nm

= 41.0～45.5

（四)TLC法

薄层板  硅胶G

展开剂  环己烷 -乙醚（4  ：1)

　　　 显色剂  硫酸（105℃  5′)

　　　 VitE    R_f  = 0.7

三、检查 游离生育酚 

（一)原理

利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈

5min

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

硫酸铈滴定液（0.01mol/L)

二苯胺（亮黄→灰紫)

　　　（M生育酚= 430.8)

例：取本品0.10g，加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L)滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L)不得过 1.0ml。

（三)限量  ≤2.15％

药典规定

消耗硫酸铈液（0.01mol/L)≤1.0ml

若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L，

应重新计算硫酸铈的消耗量

设：应消耗硫酸铈液≤ V ml

0.01×1.0 ＝实际浓度× V

例 Ce(SO4)2 = 0.01020mol/L

（四)含量测定

（一)GC法

1、GC特点

选择性好 灵敏度高 速度快 分离效能好

挥发性低、不稳定、极性强→衍生化易受样品蒸气压限制

10min

哪些物质可采用GC法。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

载气→N2

固定液→硅酮（OV-17)

担体→硅藻土或高分子多孔小球

柱温→265℃

检测器→氢火焰离子化检测　　　器(FID)

内标→正三十二烷

 　　n ≥ 500

 　　R≥2

内标法

供试液（样品+内标)

对照液（对照+内标)

是样品中不存在的物质

与被测组分峰靠近

内标物　　　能与各组分完全分离

与被测组分的量接近

校正因子

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

例：内标液  取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液.

对照液  精密称取VitE对照品0.2011g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul注入GC仪，测定，计算.

供试液  精密称取供试品0.1998g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul注入GC仪，测定，计算。

对照液  

供试液

本品含C31H52O3应为96.0 ~ 102.0%。  

BP GC 

内标 正三十二烷

R≥1.4

USP GC 

  内标 十六酸十六醇酯

  R≥1.0

JP   HPLC 

  外标  dl－α－生育酚

R≥1.4   

什么是内参照峰？其要求是什么?

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

1、原理  利用生育酚的易氧化性

2、指示剂

  二苯胺（亮黄  →  灰紫)

   还原型　　氧化型

3、讨论

A、反应速度

分子量较大，

反应慢易被O2氧化　　　　　25滴/10s

B、溶剂

Ce(SO4)2易溶于水

生育酚易溶于醇  　　　　 乙醇＋水

C、酸性条件

防止Ce(SO4)2的水解

减慢生育酚被O2氧化速度 　 H2SO4

4、含量计算

MVitE  =  472

（三)JP - RP - HPLC法（外标法)

样品→ dl－α－生育酚

固定相→十八烷基硅烷键合硅胶

流动相→甲醇-水（49  ：1)

检测波长→292nm

   R＞2.6

   RSD≤0.8%　　

计算过程板书分步演示。

基本内容

注解（进展、辅助

手段和时间分配)

测定对象→血清中VitA和VitE

固定相→十八烷基硅烷键合硅胶

流动相→甲醇-水（96  ：4)

检测波长→  8′前330nm

8′后292nm

问题讨论(5min)

作业和习题布置(2min)

归纳总结(3min)

小 结

本次课主要讲授了①维生素C的含量测定方法，主要为碘量法(掌握)；②维生素D含量测定的第一法；③维生素E的结构、性质及检查。

复习思考题

或

作 业 题

1、维生素C碘量法含量测定中需注意的事项。

2、维生素D₂、D₃的区别反应。

3、维生素E的鉴别试验。

4、维生素D要进行哪几项特殊杂质的检查？

教 学 效 果

与 分 析

多媒体教学和板书相结合，并结合一定的实例，加深学生对知识点的认识和了解。特别是通过问题讨论，让大家对所学知识进行回顾、讨论，建立一个互动的教学氛围。效果较好。