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第1次课 授课时间：2006年 月 日
课程名称 | 年级 | 05级 | 专业、层次 | 临床医学等各专业本科 | ||||
授课教师 | 邬于川 | 职称 | 副教授 | 课型（大、小) | 小 | 学时 | 3 | |
授课题目 | 实验室规则、自作小吞噬实验（一) | |||||||
基本教材及 主要参考书 | 医学免疫学实验指导 邬于川主编 泸州医学院印刷厂2002 P2~3 现代免疫学实验技术 沈关心、周汝麟主编 湖北科学技术出版社 1998 | |||||||
目的与要求： 1、掌握小吞噬实验的原理、方法； 2、熟悉实验室规则 | ||||||||
教学内容与时间安排： 实验室规则 15min 自作小吞噬实验（一) 小吞噬实验的原理、方法 ---65min 教学方法：讲授、板书、示教 | ||||||||
教学重点及如何突出重点、难点及如何突破难点： 教学重点 小吞噬实验的原理、方法 教学难点 小吞噬实验的方法（取血、制片、染色) 提示：取血要精准，防止凝血；制片要自然干燥并固定，防止细菌变形或被冲掉；染色要规范操作，尽量使视野干净，染色性好。 | ||||||||
教研室审阅意见： 教研室主任签名： 年 月 日 | ||||||||
基本内容 | 教学手段 | 课堂设计和时间安排 |
板书提纲 一、实验室规则 二、自作小吞噬实验（一) （一)原理 小吞噬细胞（中性粒细胞)＋金黄色葡萄球菌 （二)材料与方法 豚鼠抗凝血＋金黄色葡萄球菌悬液 混匀 37℃恒温箱静置分层
吸取白细胞层
制片
Right染色： 瑞氏染液数滴 1分钟 加等量PB液 5～8分钟 水冲洗，干燥后油镜下观察 教学进程 分组 一 实验室规则 （一)树立有菌观念，进入实验室前必须穿好工作服； （二)不能带与实验无关的物品进入实验室，更不允许在实验室内就餐； （三)介绍实验室环境； （四)在实验过程中要认真细致； （五)实验仪器设备若有损坏，须照价赔偿； （六)值日同学必须切实做好实验室的清洁； （七)如实验过程中进行了有菌操作，实验结束后须用清洁液泡手3～5分钟。 二 小吞噬实验（一)——（中性粒细胞的吞噬作用) （Phagocytosis of neutrophilic granulocyte) 【原理】 本实验将中性粒细胞与可被吞噬而又易于计数的颗粒物质（如金黄色葡萄球菌)混合孵育一定时间后，颗粒物质被中性粒细胞吞噬。计算吞噬率和吞噬指数，因此，反映该细胞的吞噬功能。 【材料】 ⒈ 豚鼠。 ⒉ 葡萄球菌悬液。 ⒊ 3.8%枸橼酸钠溶液、无菌注射器和针头、试管、毛细吸管、瑞氏染料、载玻片等。 【方法】 ⒈ 采集豚鼠心脏血1~2ml或取人外周抗凝血2ml，加入到装有3.8%枸橼酸钠0.2ml的试管中，迅速混匀。 ⒉ 加入葡萄球菌悬液一滴，混匀。37℃恒温箱内静置30~60分钟。 ⒊ 用毛细吸管从白细胞层（即沉淀的红细胞表面)吸取白细胞悬液，加一滴于载玻片一端，作推片，自然干燥。 ⒋ Wright 染色： ⑴ 标本自然干燥后，加瑞氏染液2~3滴于标本的涂膜上，染色1分钟。 ⑵ 加等量PBS与染液混合均匀，染色5~8分钟。 ⑶ 冲去染液。水冲时为防止染液粘附于涂膜，不能先倾倒掉染液，而要边冲边慢慢倾斜载玻片，直至染液冲尽。 ⑷ 干燥后放玻片盒，以备下次实验课观察 清洁卫生安排 | 讲授 ――――― ---板书 ――――― 讲授 板书 示教 ――――― 讲授 板书 示教 | 约20min ---约5min 约50min 以上内容可先组织操作，再讲解，共耗时约50min ――――――――－ 约40min 约5min |
小 结 | 1、小吞噬原理 2、推片方法 3、瑞氏染色方法 4、免疫学实验基本特点 |
复 习 思 考 题 、 作 业 题 | 1 在本实验中，影响中性粒细胞吞噬指数的实验因素有哪些？ 2 为什么吞噬细胞是机体抗感染的重要防线？如果吞噬功能丧失， 对机体有什么影响？ 3 检测吞噬细胞的吞噬作用是否全面反映机体的吞噬功能？为什么？ |
下 次 课 预 习 要 点 | 一、 小吞噬实验（二) 二、 溶菌酶实验 三、 血液细胞的形态与染色 |
实 施 情 况 及 分 析 |
