目 录
药用植物学部分
实验室规则…………………………………………………………………………(1)
实验注意事项………………………………………………………………………(1)
实验报告的写作要求………………………………………………………………(1)
实验一 显微镜的构造、使用及植物细胞后含物………………………………(3)
实验二 植物的组织………………………………………………………………(7)
实验三 根的内部构造……………………………………………………………(10)
实验四 茎的内部构造……………………………………………………………(12)
实验五 叶的内部构造及花的组成………………………………………………(14)
实验六 果实和种子………………………………………………………………(17)
实验七 植物分类(一)……………………………………………………………(19)
实验八 植物分类(二)……………………………………………………………(21)
植物标本的采集与制做……………………………………………………………(23)
实验室规则
一、按实验室公布的名单、座号就坐,不得随意调换。
二、遵守实验时间,不无故迟到、早退和缺席。如中途有事离开实验室,必须征得教师同意。
三、爱护实验仪器用品,严格遵守操作规程,个人所用仪器用具使用后要擦试干净,若有丢失、损坏按规定赔偿。
四、要爱护一切实验用标本、材料。实验进行前,不得随意乱动或挑选,观察后放回原处,不得私自带出室外。试剂及消耗性的材料,应按规定用量使用,不得浪费。五、除特殊情况经教师同意外,实验报告应在实验课结束前交给指导教师。
六、实验结束后,将实验桌上物品整理好,公共用具应放回原处。
实验注意事项
一、实验前的准备工作
(一)根据教学日历进度,复习与本次实验有关的课堂讲授内容。
(二)仔细阅读本次实验指导内容,要求明确实验目的,弄懂实验方法,预先想好自己实验进行的步骤,做到实验时心中有数,保证完成实验要求。
(三)准备好各种自备的实验用品(报告纸,2H或3H铅笔、橡皮、短尺、小刀等)。
二、实验过程中的几点要求
(一)保持实验室安静,不得高声说笑或随便离开座位。
(二)注意听取教师的指导,做到实验认真,观察仔细,独立思考,做好记录和实验报告。
(三)安排好实验课时间,在规定的实验时间内完成本次实验,交实验报告。
三、实验结束时的几点要求
(一)每个人自己所用实验仪器用品必须洗擦干净,放到指定位置,个人保管的用品要收好,上锁。
(二)填写显微镜使用记录。
(三)值日生负责整理桌面,清扫地面,擦黑板及其它卫生工作,并检查水、电,关窗,锁门。
实验报告的写作要求
一、按照每次实验报告的要求,一律用绘图铅笔(3H)在实验报告纸上绘图或做文字记录,不得用钢笔或圆珠笔。
二、绘图时,应注意所绘图在实验报告纸上的位置要适中,大小要恰当,铅笔要削尖,先在报告纸上铅笔起图稿,切勿另纸作稿。观察核对修改后,再用平滑的线条描绘清晰,不要涂抹,在图下面注明各图名称,井用平行直线向右侧引出注明各部分的名称。
三、绘图的要求
(一)简图:是以不同的符号表示不同细胞或组织的轮廓,以及彼此间的比例。但不反映每个细胞的情况,可用不同的符号表示各种组织,绘简图常用的符号如下:
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表皮 木栓组织 韧皮部
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木质部 射线厚角组织
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纤维 石细胞薄壁组织
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分泌组织 簇晶针晶
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方晶 砂晶 淀粉粒
(二)组织详图:常与简图配合,共同表示某种药材结构的显微特征,描绘在显微镜下可见的生药组织,细胞的形状和细胞彼此间关系。能比较真实地反映生药组织、细胞的实际情况。一般组织详图只需绘出有代表性的横切面的1/4或从外表到中心较窄的一部分,如下图所示:
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或 或
实验一 显微镜的构造、使用及植物细胞后含物
一、目的要求
(一)了解显微镜的一般构造和保养。初步学会正确的使用显微镜。
(二)学会临时装片的制作方法。
(三)了解淀粉粒,草酸钙结晶的种类、形态特征。
二、仪器用品、材料
蒸馏水 每桌一瓶
吸水纸 适量
马铃薯块茎 适量
字母装片 每人一片
黄柏皮横切片 每室各一份
地骨皮横切片 每室各一份
半夏块茎横切片 每室各一份
大黄粉末 每室各一份
三、实验内容与方法
(一)显微镜的构造
主要分机械部分及光学部分
1、机械部分
镜座:为显微镜最下部分。常为马蹄形或长方形、圆形等作稳定镜身之用。有的在镜座中附有照明装置。
镜柱:连于镜座向上的直立短柱。用以支持和连接镜臂、载物台等部件。直筒显微镜在镜柱和镜臂处连接有倾斜关节。它可以使镜身倾斜到一定角度,便于观察。
镜臂:为连接于镜柱上呈弯臂形的结构适于握取。
载物台:供放置标本用的方形或圆形平台。中央有通光孔以透过光线。台面上装有螺旋推进器,不但可固定标本片,还可借助右方两个旋钮调整标本片的位置,也有的显微镜在载物台的左或右下侧有共轴的纵横向移动螺旋。转动大螺旋标本片夹可前后移动,转动小螺旋可使标本片夹左右移动,以便观察标本片的不同部位。
镜筒:为显微镜上部的中空直筒。筒的上端用以按插接目镜。镜筒有垂直的和倾斜两种。直筒的下端装有转换器;斜筒的下方连接棱镜室,棱镜室下端连接转换器。
转换器:或称物镜转换器,位于镜筒或棱镜室下端呈圆盘形。其上有3~4个圆孔,用以旋装接物镜。借转换器转动可以调换不同倍数的接物镜。在转换器圆盘内装有弹簧片,用以卡住圆盘使接物镜固定在正对载物台通光孔的位置。
调节轮:在镜柱或镜臂的两侧,有两对大小不同的调节轮,转动此调节轮可使载物台(或镜筒)上下移动,借此调节焦距以便观察物像(注意须记住调节轮旋转方向与载物台或镜筒升降的关系)。
有的显微镜大、小调节轮为安装在一个中轴上的共轴装置,并在右边粗调节轮内侧有一个较窄的调节轮,可用以调节粗调节轮的松紧。此轮按顺时针方向旋转,粗调节轮即偏紧,反之即偏松。(注意使用时不可调得过松,否则载物台会自动下滑,影响观察。此轮调到合适时即不要经常转动)。在左边粗调节轮内侧有一个限位调节环,其上连一凸柄,此环旋紧即使粗调节轮限位。达到保护镜头安全的作用。
2、光学部分:由接目镜、接物镜、棱镜室、聚光器、虹彩光圈、反光镜等部分组成。
接目镜:由两片透镜镶于金属筒上构成,插于镜筒上端。目镜筒内可装有指针,(用一根毛发粘于横隔上构成)以做指示物象之用。在目镜上刻有4X、10X、……(X表明放大倍数)。
接物镜:由2~4片透镜镶于金属筒中构成,旋装在转换器上。物镜上也刻有4、10、40、90等字样表明该物镜的放大倍数。低倍镜头放大4、8、10倍,镜头较短。放大40倍、45倍的为高倍镜头、镜头也较长。而90、95或100倍的是油浸镜头、镜头最长。我们一般不用此种镜头。显微镜的放大倍数是接目镜的放大倍数与接物镜的放大倍数的乘积。
棱镜室:仅斜筒显微镜装有此部分,位于镜筒与转换器之间,呈凸起的球形或类球形,内装三棱镜,可将接物镜直入的光线折射入接目镜内以便观察。
聚光器:位于载物台下,由几个透镜镶合而成。其作用是集合由反光镜折射来的光线,搬动聚光器调节柄,可调节其升降。有的显微镜在聚光镜一侧有一个调节轮,可调节聚光器上下移动以调节光线的强弱,聚光器上升则光线强,反之则弱。
虹彩光圈:附于聚光器下面,由多数薄金属片嵌合而成,借其搬柄的左右滑动可使金属片聚合或分开,以此调节透光孔的大小。
调光玻璃架:为附于聚光器下端的园环,放置滤光玻璃用。
反光镜:位于聚光器下面,借其连轴插在镜柱上或固定在镜座上。反光镜能向任何方向转动,以便将光线反射到镜内。反光镜的一面为平面镜;另一面为凹面镜。平面镜反射的光线较散可在强光下使用;凹面镜反射的光线较集中,光线较强,可在光线弱时使用。
(二)显微镜的使用方法
1、放好使用位置:由镜箱内取出显微镜时,应右手紧握镜臂,左手平托镜座,直立取出。然后平稳、轻放在实验台上自已左前方位置,约离台缘5~10厘米处,右方放置实验指导、实验报告纸等物。
2、对光:转动大调节轮使载物台下降(或提高镜筒),转动转换器将低倍接物镜移到镜筒正下方,对准通光孔,直到有“卡达”声,说明镜头已定好位置。打开虹彩光圈。转动反光镜对着光源方向使光线反射入镜内,同时左眼对准接目镜观察,调整反光镜或聚光器,直到使视野均匀明亮。
3、低倍镜的使用:对好光后,将准备观察的标本片放置在载物台上,使材料对准载物台上的通光孔,用弹夹固定(注意要盖玻片向上,不要放反)。转动大调节轮使载物台缓缓上升,同时自侧面密切注意标本片与接物镜之间的距离,到标本片距物镜约0.5~1厘米时,即可停止转动。然后用左眼向目镜内观察(右眼要同时睁开)。同时逆时针转动大调节轮使载物台徐徐下降,当降到焦距时,在镜内可看到标本的物像,若物像不够清楚,可用小调节轮稍加调节即可。
若旋转大调节轮太快,载物台下降过低致使超过焦距物像不能显现时,千万不要在眼睛观察接目镜的同时,旋转大调节轮使载物台上升,以防标本片碰到物镜,遇此情况应照上法重新操作;可用字母标本片练习低倍镜的使用,并注意镜内所呈物像是正像还是倒像?
4、高倍镜的使用:使用高倍镜时必须先用低倍镜找到所要观察的结构,调节清晰,并将要放大观察的部分移至视野的中央,再直接转动转换器,调换高倍接物镜。此时需注意两点,第一是要认准高倍接物镜镜头,不要将油镜头错当做高倍镜镜头。第二是调换高倍接物镜时不要转动调节轮升降载物台,否则焦距不对将影响高倍镜的使用。
当调换好高倍接物镜以后,镜头距标本片很近,因此观察操作时要特别小心,这时只需要用小调节轮稍微调整焦距即可看到放大了的清楚的物像。注意在使用高倍镜时切勿转动大调节轮,以免压碎标本片及损伤镜头。若高倍镜下找不到物像时,必须重新用低倍镜找到后再按上述方法操作字母装片反复练习低倍镜及高倍镜的使用。
5、用后整理:观察完毕后,将物镜转离通光孔。取下标本片、升高载物台,还原聚光器等,然后将显微镜按原位轻轻放入箱内、上锁。
(三)显微镜的保护法
1、使用显微镜前,必须认真检查,若发现有损坏或丢失零件应立即报告指导教师。
2、取、放显微镜时应谨慎小心,做到按要求轻拿轻放,不要碰撞。
3、未经指导教师许可,不得随意拆卸镜头或取下显微镜的任何附件。
4、必须保持显微镜的清洁,光学镜片要用擦镜纸擦拭、机械部分可用纱布擦净。如镜头沾有污物或油垢、可用擦镜纸沾少许二甲苯擦净,不可用手指、废纸、手绢、抹布等擦拭。
(四)细胞后含物的观察:
1、淀粉粒临时装片的制备与观察
制做临时装片,需预先备好洁净的载玻片及盖玻片,用前要擦拭干净,具体擦法如下:
用左手拇指与食指拿住载玻片的两短边,用右手拇指、食指将干净纱布夹于载玻片的两面,沿玻片长边往返擦拭,擦时两指用力要均匀直至擦干净为止。用同样方法擦盖玻片,由于盖玻片极薄,擦时用力要轻而均匀,以免玻片破碎。
取擦拭干净的载玻片,在中央加一滴水,然后用镊子从切成小块的马铃薯块茎上刮取白浆,放在水滴中搅一搅,按正规操作盖上盖玻片,先于低倍镜下观察,可见淀粉粒大多呈卵椭圆形,将形状清楚的淀粉粒移到视野中央,换过高倍镜仔细观察淀粉粒的结构。在卵圆形淀粉粒较小的一端有脐点。围绕脐点可见明暗相间的纹理即为层纹。马铃薯的淀粉粒除了单粒外,还可以看到少数复粒和半复粒。选择典型清楚的淀粉粒绘图。
2、草酸钙结晶——于示教镜下观察几种草酸钙结晶
簇晶:在大黄粉末临时装片中,为大型簇状结晶,由许多三菱形结晶的基部接合而成。
针晶:于半夏块茎横切片中可见在许多大型的粘液细胞内含有针晶束。
方晶:观察黄柏皮横切片,在染成粉红色的纤维束周围有许多菱形或方形的透明结晶。
砂晶:观察地骨皮横切片,在一些薄壁细胞中有许多灰色的细小三角形或不规则砂粒形的结晶即为砂晶。
四、实验报告
绘马铃薯淀粉粒图,并注明各部。
实验二 植物的组织
一、目的要求
(一)掌握保护组织、机械组织、输导组织的特征及在植物体内的存在部位。
(二)认识几种常见的分泌组织。
(三)学会徒手切片的制作方法。
二、仪器用品、 实验材料
①新鲜藿香茎
②南瓜茎纵切片(每人一片)
桔皮横切片(一片示教)
川芎根茎横切片(一片示教)
南瓜茎横切片(一片示教)
黄柏粉末(每室一份)
5%氢氧化钾溶液
三、实验内容与方法
(一)保护组织:藿香茎横切临时装片的制作与观察
取藿香嫩茎切成2~3厘米一段,将横切面削平,沾上一点水,以防止新鲜材料变干,并增加润滑,使组织不易切碎。用左手拇指和食指夹住材料,下端用中指托住,右手拿刀片,使刀刃向内并与材料的断面平行。自材料的左前方向右后方反复拉移刀片,即可将材料切成很薄的片。反复切时,要随时在断面上沾水。将切下的薄片放入盛有清水的培养皿中,选取最薄的一片,按正规操作制成的临时装片。先在低倍镜下观察,可见茎呈现四方形,四角具有突出的棱脊。茎最外为一层表皮,表皮外具有许多毛茸状附属物,尤其在四角处更多。选取清楚的一角,换高倍观察非腺毛,腺毛及腺鳞的特征。
(二)机械组织
1、厚角组织
取上述藿香茎徒手切片进行观察,在四个棱脊处表皮下均可见厚角组织。细胞呈多角形,每一细胞角隅处壁显著增厚。
2、厚壁组织(示教)
石细胞及纤维——黄柏皮粉末示教
在示教镜下观察石细胞及纤维,比较其结构有何异同?
(三)输导组织:导管与筛管
取南瓜茎纵切片于低倍镜下,首先自一侧逐渐向内观察切片的整体情况。其中染成粉红色的带有环状或网状花纹的部分即木质部中的导管。在木质部两侧即为韧皮部,分清各部后,可观察下列结构:
导管:细胞壁加厚部分呈环状、螺旋状或网纹状。注意你所观察的切片中有几种类型的导管。
筛管:位于导管的两侧,由长筒形细胞上下相连而成,细胞间的横隔壁上有许多小孔即筛孔。此横隔壁即筛板。
在示教镜下观察南瓜茎横切片中的筛板,与纵切片中的筛板比较。
(四)分泌组织
1、桔皮横切片——示溶生分泌腔(示教)
于示教显微镜下观察,可见在外果皮部分有许多大型类圆形、椭园形的腔,即为溶生分泌腔。有何特征?
2、川芎根茎横切片——示裂生分泌腔(示教)
在示教显微镜下,在切片的外侧(韧皮部)部位,可见类圆形的腔,即“裂生分泌腔”,注意这种分泌腔与桔皮所见分泌腔有何不同?
(五)显微制片法:
1、粉末制片法:一般需用过5~6号筛的粉末,用水或稀甘油、50%水合氯醛液装片。
取何首乌粉末少许,置载玻片上,摊平,加水1~2滴,用解剖针托着盖玻片使其轻轻盖下,以滤纸片吸去溢出的液体与材料,揩干后即可置显微镜下观察。注意何首乌粉末中草酸钙簇晶较多而大(视野稍暗一些易观察);淀粉粒很多,单粒类球形、脐点星状、点状或三叉状,复粒由2~9分粒组成。
透化法:取何首乌粉末少许,放在载玻片的中央偏右一些,滴加水合氯醛液2滴,用解剖针调和均匀,在酒精灯上用小火微微加热透化(要使载玻片保持平稳,慢慢移动,且勿使液体沸),在加热过程中,要随时添加水合氯醛液,千万勿蒸干,加热到粉末微透明为止,带载玻片微冷却后再加水合氯醛溶液少许,用解剖针将粉末搅匀,加上盖玻片即可镜检,透化后的粉末片与用水装的片比较有何不同。
2、组织解离法:为了更好的观察单个细胞,特别是石细胞、纤维、导管、管胞等的形状,可将它们从组织中解离出来,成为单个的状态,办法是用化学试剂处理,使组织各细胞间的胞间层溶解,从而使细胞分离,组织解离方法可按药材的性质选用不同的试剂。常用以下方法:
(1)氢氧化钾法:药材内薄壁组织占大部分,木化组织少或分散存在时可选用此法。取少量材料(党参)切成像火柴杆粗细的小条置试管中,加5%氢氧化钾溶液2~5ml,在沸腾水浴中加热,至用玻璃棒压挤材料能离散为止(一般约30分钟左右即可),倾去碱液,材料用水洗涤后,去少许,在载玻片上用解剖针挑开,用稀甘油制成临时装片即可观察。
(2)硝铬酸法:薄壁组织少、木化组织较多或集成较大的群束,要将成群的纤维和石细胞分开可用此法。将材料(关木通)放在小烧杯中,加20%硝酸与20%铬酸的等量混合液适量浸没材料,于室温放置,随时检查至用玻璃棒压材料能离散为止,解离时间视材料的坚硬程度和木化程度而定,一般约需30~60分钟,必要时也可水浴加热,以加速解离,至合乎要求为止,可洗去酸液,取材散开,制成临时装片观察。
四、实验报告
绘藿香茎横切1/4表皮及其附属物,并注明各部。
实验三 根的内部构造
一、目的要求
(一)掌握单子叶植物根和双子叶植物次生根的内部构造特征
(二)掌握单子叶植物根与双子叶植物次生根内部构造的区别
(三)了解根的异形构造特征
二、实验材料
直立百部块根横切片 每人一片
苦参根横切片 每人一片
怀牛膝根横切片(示教) 每室一片
显微测量尺 每人一套
三、实验内容与方法
(一)单子叶植物根的内部构造——观察直立百部块根横切片
取直立百部块根横切片,先用低倍镜观察整个轮廓区分各部,再换高倍镜详细观察各部结构特征。自外向内构造如下:
1、根被:为3~4列略呈多角形的细胞,少数细胞的细胞壁上可见致密的半径向细条纹状增厚,根被外面表皮细胞已被压缩。
2、外皮层:与根被相接的一层细胞,多呈五或六边形,排列整齐,细胞角隅处略有增厚。
3、中皮层:占根的大部分,为薄壁细胞,向内渐增大。
4、内皮层:为皮层最内方的一层细胞,排列紧密,细胞扁长圆或长方形,可见被染成粉红色的凯氏带及凯氏点。
5、中柱鞘:1~2列比内皮层细胞稍大的薄壁细胞。
6、韧皮部和木质部间隔排列,构成特有的辐射型维管束。韧皮部内侧有单个的或2~3个成束的非木化纤维。木质部有导管3~5个及木纤维、木薄壁细胞,偶尔在髓部外缘有少数单个或两个并列的导管。
7、髓:位于中心部分,由类圆形大型薄壁细胞组成。排列疏松,其间散有单个或2~3个成束的细小纤维,在横切片中呈类方形或多边形,其周围常有较小的薄壁细胞。
(二)双子叶植物根的内部构造(次生构造)——观察苦参根的横切片:
取苦参根横切片,先用低倍镜观察内部组织概况,然后用高倍镜自外向内观察下列结构:
1、周皮:主要可见木栓组织及栓内层。木栓组织为数列切向排列的扁长方形木栓细胞,栓内层细胞形状略不规则,注意其排列情况如何?在木栓组织与栓内层之间有的部分可看到木栓形成层,细胞极扁平,且常可见细胞核。(考虑木栓形成层属于何种组织?应具备何种特征?)
2、次生皮层:紧接栓内层的数列不规则椭圆形薄壁细胞,有细胞间隙细胞内含多数淀粉粒,且可见草酸钙方晶。
3、维管束:韧皮部细胞较小,有多数韧皮纤维束(或晶纤维束)。束中形成层较明显,由多列小而扁的分生组织细胞组成。束间形成层不明显。木质部导管自中心向外呈放射状排列成束,每束中均有木纤维束(或晶纤维束)。中心有少数细小导管。
4、射线:由木质部直通皮层的多列薄壁细胞,内含淀粉粒及草酸钙方晶。
(三)双子叶植物根的异形构造——观察怀牛膝根的横切片。
于示教镜下观察,中心为初生木质部,其外为次生维管束形成两束,再向外为异型维管束排列成三圈。
四、实验报告
根据观察绘直立百部块根横切部分简图,并注明各部。
实验四 茎的内部构造
一、目的要求:
(一) 熟悉单子叶植物地上茎的内部构造特征
(二) 掌握双子叶植物草质茎和木质茎的内部构造特征
(三) 掌握茎与根内部构造的区别
二、实验材料:
紫苏茎横切片 每人一片
木槿茎横切片 每人一片 ’
石斛茎攒切片 每人一片
白茅根茎横切片 每人一片
三、实验内容与方法:
(一)双子叶植物草质茎的内部构造——观察紫苏茎横切片
于低倍镜下观察紫苏茎横切面呈方形,四角凸出呈半圆状,四边处略向内凹,自外至内组织构造如下:
1、表皮:为一列长方形的细胞切向排列,表面有腺毛、非腺毛及腺鳞。
2、皮层:靠近表皮为1~2层厚角组织,四个角处厚角组织发达,其内为l~3层皮层薄壁细胞,内含叶绿体。
3、维管束:四角内侧各有一大型维管束,四边凹人部内侧各有3~5个小型维管束。韧皮部狭窄,其外侧均有纤维束,连续排列成环(如取材较嫩则见不到)。形成层较明显成环。在大型维管束中木质部导管呈半径向整齐排列。
4、髓:薄壁细胞疏松,中央常形成空腔,薄壁细胞中可见短针状,柱状结晶。
(二)双子叶植物木质茎的内部构造——观察木槿茎横切片:
首先在低倍镜下观察,区分出周皮、皮层、维管束及髓各部,然后自外向内详细观察各部组织特征:
1、周皮:注意组成周皮的木栓层、木栓形成层及栓内层各自细胞的特征。木栓层外侧有少数石细胞。
2、皮层:极薄,细胞类圆形或不规则,有些细胞内含草酸钙簇晶。
3、初生韧皮部纤维成束分布于韧皮部外侧,纤维壁厚,木化,由高倍镜下可见孔沟,其外有压缩的初生韧皮部。
4、韧皮部:为初生韧皮部纤维内侧近似三角形部分,与呈漏斗状外宽内窄的韧皮射线相间排列。韧皮纤维呈切线向带状,与韧皮薄壁细胞半径向间隔分布,在接近形成层部分可看到明显的筛管与伴胞。
5、形成层成环。
6、木质部发达,注意其导管的大小排列及年轮的情况。
7、射线:韧皮射线发达,多呈外宽内窄的漏斗形,细胞内含草酸钙簇晶,木射线窄,多由l~2列细胞组成,且细胞多呈网孔状增厚。
8、髓:薄壁细胞向中心渐大。
(三)单子叶植物地上茎的内部构造——观察石斛茎横切片
1、表皮:为一列小而扁,排列紧密的细胞,外被较厚的角质层。
2、基本组织:为表皮以内大型类圆形薄壁细胞。内含淀粉粒。
3、维管束:分散于基本组织中。有限外韧型维管束。韧皮部及木质部外侧有纤维束包围。维管束周围的一些薄壁细胞的壁呈网状增厚且木化。
(四)单子叶植物地下茎的内部构造一观察白茅根茎横切片,于低倍镜下观察可见。
1、表皮及下皮纤维:表皮为一列类方形细胞,有的细胞外壁稍凹入,内含淡黄色二氧化硅小块。下皮纤维1—4列,壁厚,木化。
2、皮层较厚由10余列薄壁细胞组成。于皮层中散有10余个小圆形叶迹维管束,其外有纤维包围。皮层内常形成多数裂隙。
3、内皮层由一层内壁极厚,外壁较薄的细胞组成。胞腔内有与内壁粘连的乳突状二氧化硅无柄钟乳体。
4、中柱:中柱鞘由1~2层厚壁细胞组成。中柱内散列分布多数有限外韧型维管束,各维管束均由纤维组成的鞘包围。中柱中央常呈空洞。
四、实验报告
绘紫苏茎横切片1/4详图,并注明各部。
实验五 叶的内部构造及花的组成
一、目的要求
(一)掌握一般双子叶植物叶片组织构造特征。
(二)熟悉花的组成部分,了解花各部的主要类型。
二、仪器用品、实验材料
解剖镜、解剖器、放大镜、培养皿、刀片
曼陀罗叶片横切片 每人一片
新鲜或浸制材料:何首乌叶、桃花、木槿花、泡桐花、白扁豆花、向日葵花、桔梗花
三、实验内容与方法
(一)双子叶植物叶片的组织构造——观察曼陀罗叶横切片
取曼陀罗叶横切片于低倍镜下观察,两侧长条形部分为叶片部分;中央凸出近似圆形部分为叶主脉部分。主脉凸出明显的一面为叶的下表面(背面);另一面则为上表面(腹面)。分清以上各部后,换用高倍镜详细观察各部组织特征。
1、表皮:上、下表皮均为一列扁平细胞,且均有气孔及毛茸,注意上下表皮气孔分布情况,在气孔处可见相对的两个小型细胞即保卫细胞,其间的空隙即气孔,气孔内侧与气孔下室相通。
2、叶肉组织:栅栏组织为一列柱状细胞,排列紧密,其长径与上表皮垂直,细胞内含较多叶绿体。海绵组织5~7列细胞,注意细胞的形状及排列情况与栅栏组织有何不同?与栅栏组织相接的一列海绵组织细胞中大多数含一个草酸钙簇晶,形成结晶层。
3、叶脉:除叶片中央的主脉外,在两侧叶片的叶肉中尚可见一些横切或纵切的小型叶脉,试考虑为何在横切面上可看到多数不同切面的小叶脉。
详细观察叶主脉的结构,主脉在叶片背面形成显著的突起。上下表皮内方均有厚角组织细胞,维管束双韧型呈浅槽状,其外有薄壁细胞包围。偶尔可见含草酸钙砂晶的薄壁细胞。
(二)何首乌叶下表皮气孔的观察
取新鲜何首乌叶,撕取下表皮作成临时装片。
1、表皮细胞:在低倍镜下观察,形状不规则,侧壁呈弯曲状,表皮细胞之间可见气孔。
2、气孔结构:在高倍镜下观察气孔,可见两个半月形含有叶绿体的保卫细胞,其间围绕的狭长缝隙即气孔。注意保卫细胞与周围的表皮细胞(即副卫细胞)间排列的方式属于哪种类型?
(三)花的组成
取桃花一朵,放在培养皿中,自外向内依次观察下列各部。
1、花梗与花托
(1)花梗:花基部残留极短的细枝,是花与茎或花轴相连的部分。
(2)花托:花梗顶部略膨大的部分,花的其他部分均着生其上。
2、花被:分两部分
(1)花萼:位于花的最外轮,由萼片组成,注意萼片的形状 数目以及是否联合。
(2)花冠:为花萼以内,由花瓣组成,注意花瓣的连合与分离情况。
3、雄蕊群:由多个雄蕊组成,观察雄蕊的数目及在花冠内着生的部位,然后仔细观察一个雄蕊,其结构可分为两部分。
(1)花药:雄蕊顶端黄色、膨大的部分,每一花药分离为两个药瓣。
(2)花丝:与花药相连的丝状部分。
4、雌蕊群:位于花的中心部分,小心地用镊子除去部分花被及雄蕊,可看到完整的雌蕊,自下而上可分为:
(1)子房:雌蕊基部膨大的部分,内有子房室,室内着生胚珠,你如何能以子房判断它是由几个心皮形成的?
(2)花柱:自子房向上延伸的细长柱状部分。
(3)柱头:花柱顶端略膨大的部分。试考虑若柱头分成二或三叉说明什么问题?观察完花的各部结构后,用刀片将子房横切成两半,注意其子房室及胚珠着生的情况。
(四)花的类型
首先考虑前面观察的桃花属于哪种类型的花,记录下来,然后再取蜀葵花、泡桐花、桔梗花(或沙参花)、向日葵的边花与心花,各一朵,放于培养皿内,加水浸泡。仔细观察每一朵花的各部组成,记录哪些花是完全花?哪些花是不完全花?哪种花是两性花?哪种花是单性花?仔细观察花被的特征,记录哪种花是合瓣花?哪种花是离瓣花?哪些花是辐射对称花?哪些花是两侧对称花?观察过程中注意不要将花损坏以便观察各种花的雄蕊类型,子房与花被的相关位置及胎座的类型,并做好记录。
(五) 雄蕊的类型
仍以上述各种花分别观察雄蕊的类型
1、分生雄蕊:观察桃花,雄蕊多数,长短相近,彼此分离。
2、二强雄蕊:观察泡桐花,注意有几个雄蕊?长短如何?
3、单体雄蕊:取木槿花(或蜀葵花),小心去掉部分花瓣,观察其雄蕊各部联合、分离情况。花丝下部联合,上部及花药分离。
4、聚药雄蕊:取向日葵头状花序心部管状小花朵,仔细观察其雄蕊,仅花药处靠合而花丝分离。
(六) 雌蕊的类型
取桃花、白扁豆花、桔梗花、苹果(或梨)花分别放入培养皿中,小心地用镊子分开花被,观察子房与花托及花被、雄蕊之间的位置关系,可见子房的位置不同。
1、子房上位:桃花、白扁豆花子房着生于扁平或略凸出的花托上,注意其与花托是否愈合。花的其他部分着生在子房下的花托上,这种花称下位花。与周位花有何区别?
2、子房半下位(中位):以桔梗花与上面观察的桃花比较。
3、子房下位:以苹果(或梨)花与上面观察的桔梗花、桃花比较。
四、实验报告
根据花的解剖观察,绘出桃花的外形解剖图,并注明各部。
实验六 果实和种子
一、 目的要求
(一) 熟悉果实的主要类型,并掌握其主要特征
(二) 熟悉双子叶植物有胚乳种子及无胚乳种子的组成部分及各部分的形态特征
二、 仪器用品、实验材料
解剖器、放大镜、培养皿
枸杞、白扁豆果实、白菜(或萝卜)果实、荠菜果实、蓖麻果实、牵牛果实、小茴香果实、八角茴香果实、桑椹、蓖麻种子、蚕豆种子(浸泡)
三、实验内容与方法
(一)果实的主要类型:
1、单果:一朵花只有一个雌蕊(单雌蕊或复雌蕊)发育成果实。
肉果:主要观察浆果。取枸杞果实一个,注意其外果皮薄,中、内果皮无明显界限,肉质,种子多数。
干果:主要观察双悬果、荚果、蒴果、长角果和短角果。
(1)荚果:观察白扁豆果实背缝线与腹缝线的情况,注意由几个心皮形成,内部种子着生在什么位置。
(2)蒴果:观察蓖麻果实及牵牛果实,从外表数一数它们是由几心皮雌蕊形成的果实?内部有几室?并注意每种的开裂方式。
(3)长角果与短角果:取萝卜的长角果与荠菜的短角果对比观察,注意它们各由几个心皮形成?轻轻用镊子从一侧剥去部分果皮,可见中央具一假隔膜。注意种子在其上着生的情况。
(4)双悬果:取一完整呈椭圆形的小茴香果实,是由两个可由中央纵向分离开的分果组成。有解剖刀轻轻从中央将其分开(注意用力要轻,不要将中央相连处弄断),则可看到二分果的顶端与二分叉状的分果柄上端相连,分果柄基部与果柄顶端相连。
2、聚合果:观察八角茴香果实,数一数它是由几个单果聚合而成的?每个单果均为一蓇葖果,注意其开裂方式并思考这种果实是由何种类型的雌蕊形成的?
3、聚花果:观察桑椹,由多个小果着生在一个果轴上。这种果实从来源上与聚合果有何不同?
(二)种子的类型及构造特征:
1、有胚乳种子——观察蓖麻种子
取蓖麻种子一粒,首先看其外形及种皮表面结构特征。外形扁椭圆形,一面略平,另一面略凸出,种皮硬脆而光亮有花纹,种子一端有一白色海绵状物为种阜。种阜靠近种子较平的一面与种皮相接处有一近似菱形疤痕为种脐。自种脐向上沿较平的一面中央上伸的一条略隆起的线为种脊。种脊末端略凸起的部分为合点。
种皮及外部特征看完后,剥去种皮,内部白色肥厚的部分是胚乳,沿种子宽面自中央将胚乳纵切开,上切面可看到胚,其中两片白色而薄的子叶紧贴在胚乳内侧,其上可见明显的分枝状叶脉,在子叶下端连有一短圆锥状物,其末端即胚根,向上为胚茎及胚芽。
2、无胚乳种子——观察蚕豆种子
取浸泡过的蚕豆种子一粒,首先观察外部结构特征,种子一端有黑色横长疤痕为种脐。种脐旁有一小孔,用手轻轻挤蚕豆,有水从孔中流出,此孔即种孔。在种孔相对一侧有一稍隆起的合点,自合点向下至种脐的隆起线为种脊。
观察完外部特征后,剥去种皮,可见两片肥厚的子叶,一侧连有胚茎,胚茎的一端连胚根,另一端连胚芽。注意比较蚕豆种子与蓖麻种子有何不同。
四、实验报告
绘蚕豆种子外形及纵剖图,注明各部。
实验七 植物分类(一)
蓼科(Polygonaceae) 毛茛科(Ranunculaceae)
豆科 (Leguminosae) 伞形科 (Umbelliferae)
一、目的要求
(一)掌握蓼科、毛茛科、豆科、伞形科的主要特征,并认识这几科中的部分药用植物。
(二)初步学会从形态方面鉴别药用植物的方法。
二、仪器用品、实验材料
解剖镜、解剖器、放大镜、培养皿
新鲜或浸制材料:红蓼花序、黄芪花(或洋槐花)、紫荆花、合欢花序、白芷花序、柴胡花序
腊叶标本:红蓼、何首乌、大黄、乌头、芍药、白头翁、白芷、黄芪、甘草、柴胡、合欢、苦参
三、实验内容与方法
(一)蓼科
1、红蓼腊叶标本的观察及花的解剖
红蓼茎直立,茎节明显;单叶互生,于叶腋处可见托叶鞘成筒状,包围茎,下部膜质,褐色;上部草质,绿色,花序生于叶腋或枝顶。若有果实,观察其特征。看完腊叶标本后取浸制的红蓼花,解剖观察花的形态、特征,注意其花被是联合的还是分离的?雄蕊的数目?雌蕊的特征?
2、蓼科其他药用植物的观察
取何首乌、大黄的腊叶标本,观察茎、叶、花、果实等方面的特征,总结出蓼科植物的主要特征。
(二)毛茛科
取乌头、芍药、白头翁的腊叶标本,观察茎、叶、花、果实等方面的特征,总结出毛茛科植物的主要特征。
(三)豆科
1、黄芪腊叶标本的观察及花(或洋槐花)的解剖
黄芪叶互生,单数羽状复叶,注意其小叶的形状,各部特征如何?观察花序、花冠各属哪种类型?荚果膜质。看完腊叶标本后,取一朵浸制的黄芪花,观察花萼、花冠的形态、特征,雄蕊的数目联合情况,雌蕊的特征。
同法解剖观察紫荆花、合欢花与黄芪花(或洋槐花)有何不同。
2、豆科其他药用植物的观察
取甘草、苦参及合欢的腊叶标本,观察叶、花、果实等方面的特征,总结出豆科的主要特征。
(四)伞形科
1、白芷腊叶标本的观察及花的解剖
白芷根粗大,圆锥形,茎上有纵棱,叶互生,茎上部叶柄常扩大呈鞘状,注意其叶片分裂情况,属于哪种类型?若标本上有果实,注意其形状、特征,这种果实应属于哪种类型?看完腊叶标本后,取浸制的白芷伞形花序一个放于培养皿中,观察其小伞梗的多少,排列方式,苞片的特征,然后用镊子取下一朵小花,用放大镜观察花各部分的特征。
同法观察柴胡的花序及小花,注意其与白芷有何不同?
2、伞形科其他药用植物的观察
取柴胡的腊叶标本与白芷对照观察伞形科的特征。
四、实验报告
根据解剖观察绘黄芪花(或洋槐花)的外形解剖图,并注明各部。
实验八 植物分类(二)
唇形科(Labiatae) 菊科(Compositae)
天南星科 (Araceae)百合科 (Liliaceae)
一、目的要求
掌握唇形科、菊科、天南星科、百合科的主要特征,并认识这几科中的部分药用植物。
二、仪器用品、实验材料
解剖镜、解剖器、放大镜、培养皿
新鲜或浸制材料:蒲公英头状花序、向日葵花序、益母草花、萱草花、
腊叶标本:蒲公英、益母草、天南星、半夏、苍术、菊花、丹参、黄芩、
三、实验内容与方法
(一)唇形科
1、益母草腊叶标本的观察及花的解剖
以益母草为代表观察唇形科的主要特征:茎四菱形,用放大镜观察茎表面,可见倒生毛茸。叶对生,注意在茎上不同部位的叶形状有何不同?轮伞花序,观察花序的位置、排列、小花开放的先后次序等。
自浸制的花序上取下一朵已开放的花,观察花萼、花冠的特征。剖开花冠后注意雄蕊几枚,长短如何?雌蕊有何特征?
2、唇形科其他药用植物的观察
取丹参、黄芩腊叶标本,从茎、叶、花等各部观察它们所具有的唇形科的特征,以及每种药用植物的突出特征。
(二)菊科
1、蒲公英腊叶标本的观察及花的解剖
蒲公英叶基生,叶片倒披针形,为规则羽状深裂。花茎常单一不分支,顶端生一头状花序总苞片二列,全部为舌状花,瘦果长圆形,顶端生有白色冠毛。
取蒲公英头状花序一个,观察其花托形态特征、总苞片的层数以及舌状小花的形态特征。用镊子取下一朵舌状花,放入培养皿中观察,花萼成为多数冠毛,花冠呈舌状,子房下位,柱头呈分叉状。数一数共有几个雄蕊?雄蕊花药、花丝联合情况如何?
2、向日葵花的解剖观察
取向日葵头状花序,总花托呈盘状,密生多数小花,边缘均为舌状花,中央均为管状花。分别摘取舌状花及管状花各一朵,观察各部分特征,并与蒲公英的舌状花进行比较有何异同?
3、菊科其他药用植物的观察
取苍术、菊花的腊叶标本,观察各部特征,结合以上解剖观察的各种头状花序,总结菊科的主要特征。
(三)天南星科
观察天南星及半夏的腊叶标本,均有生于地下的块茎,注意两种植物的叶有何不同?花单性,肉穗花序,天南星为雌雄异株,半夏为雌雄同株,雄花生于上部,雌花在下。果实均为浆果。
(四)百合科
1、萱草花的解剖
取萱草花一朵,于培养皿中观察花被共有几片?排成几轮?然后从花的一侧分开花被,观察雄蕊的数目及生长位置与花被的关系,雌蕊的特征。最后纵剖子房,观察胎座的类型。
2、百合科其他药用植物的观察
取知母、麦冬、玉竹的腊叶标本,分别观察块根或根茎、叶、花、花序及果实的特征,总结出百合科植物的主要特征。
四、实验报告
绘菊科植物蒲公英的舌状花及向日葵的管状花外形解剖图,并注明各部。
野外实习参考资料植物标本的采集与制做
采集一株植物的全部或一部分,经过压制,干燥而制做的标本叫做腊叶标本。腊叶标本制做简便,保存长久,可帮助我们识别和研究各种植物,对于中草药的鉴定以及野生资源普查都起着很大的作用.
一、采集用具
1、植物标本夹:是由木条、木板、竹条或粗铅丝制成的两块长方形的夹板,大约长60cm,宽40cm。附一长绳及一宽带。
2、吸水纸:用于夹放标本,吸收其中水分。最好用薄草纸等吸水性强的纸。
3、采集筒:一般为白铁皮制成,野外采集的植物来不及压制时可暂放入筒内保存。
4、枝剪:用于采集木本植物的枝条。
5、铲或小镐:用以挖掘植物。
6、放大镜、解剖针、镊子,解剖观察花或其他微细部分以及压制标本时用。
7、广口瓶:内盛5%福尔马林或FAA固定液(用福尔马林5ml,冰醋酸5ml,70%乙醇90m1配成),用以保存花、果实等小型标本,以做进一步观察或留做切片用。
8、标本号牌:为较厚的白色硬纸片。一端系一根细线以系在标本上。
9、野外采集记录本及铅笔。
二、采集时注章事项
首先要注意标本的完整。采集草本植物标本应尽量完整。包括根,茎、叶、花、果实等各部分。花和果实是鉴定植物种类的重要依据,但多数植物的花、果实难以同时采到,必须依生长季节分次采集才能完整。若为乔木或灌木则可采带花、果和叶的枝条,同时做记录并编上号码挂上标本号牌。雌雄同株或异株的植物,应从枝条上分别采取雌雄性标本,采集药用植物标本必须特别注意将药用部分采下附在标本上。如药用树皮,则应采一块树皮,编成同号然后钉在标本台纸上。尤其是根类药材,一定要采掘根部一同保存。
作为标本的第一手资料,野外记录是很重要的,植物标本经压制后,一些生活时的状况会有改变。如花、果变色,叶片白粉消失,气、味变化等,而这些特征对于鉴定是很重要的,所以必须在采集时逐项记录。另外,在采集标本时,还要注意调查植物的土名以便使土名和中文通用名称统一起来。
三、压制标本的方法及注意事项
1、展开压平:野外采集的新鲜标本,如在野外来不及压制时,可在带回的当天加以整理、压制。整理时,可对木本植物进行修剪,使之大小略小于订标本的台纸,并尽可能表现其自然状态。如枝叶太密或花、果太多时,可适当去掉一部分。草本植物较小的可整株压入,翻转部分叶片,使其背面朝上,以便鉴定。若遇较高大的草本植物时,可将茎反折成V形或N形,如草本植物太高大,不好折压,可在一株上选择形态有代表性的上、中、下三段。肉质多汁或干后叶片易落的植物,可在压制前在沸水中浸数分钟,以迅速杀死细胞,使之加快干燥,防止脱叶。大型果实或块根、鳞茎可切取纵横切面各一薄片压制,也可任其露于标本夹外风干。整理时要对照野外记录,补充遗漏的记录或补挂标本号牌,经整理的标本即可进行压制,在标本夹内隔几层纸压一个标本,然后捆紧放于干燥处。
2、干燥:新鲜标本含多量水分,必须除去。但干燥太快,标本易皱缩不平;干得太慢,标本腐烂生霉,变黑及叶片脱落。所以,新压的标本每日必须换干纸1—2次,开始的1或2次换纸时要注意将折叠的枝、叶、花、果等小心用镊子展开摊平。3天后可视标本干燥的程度而隔天换一次纸,直到全干为止。换下的湿纸晒干后可继续使用。
3、装订与保存:标本完全干燥后,可进行消毒处理与装订。常用的消毒法是用氯化汞液浸。方法是将1%氯化汞的95%乙醇溶液,放在长方形搪磁盘内,再将压好的标本浸入此液。待全体浸没后立即取出来夹于吸水纸中,干后即可装订。
装订时标本在台纸上位置要安排恰当,台纸右下角要留出贴标鉴的位置,野外记录可贴于纸的左上角;一份腊叶标本从采集到装订,要花费很多人力和时间,因此要注意保存好,防止虫蛀或霉,在使用中也要加以爱护,保存标本的完整性。
生药学部分
实验一 生药的理化鉴定(1)…………………………………………………… (25)
实验二 生药的理化鉴定(2)…………………………………………………… (29)
实验三 冬虫夏草、茯苓、贯众、麻黄等生药鉴别 …………………………… (33)
实验四 大黄、何首乌、黄连,川乌、白芍等生药的鉴定…………………………(36)
实验五 yin羊藿、防己、厚朴、五味子、肉桂等生药的鉴别 …………………(39)
实验六 延胡索、板蓝根、大青叶、山楂苦杏仁等生药的鉴别 …………………(42)
实验七 黄芪、甘草、槐米、黄柏等生药鉴别……………………………………(45)
实验八 人参、三七、沉香、丁香等生药鉴别 ……………………………………(48)
实验九 当归、川芎、柴胡、白芷、小茴香、马钱子等鉴别…………………(51)
实验十 龙胆、薄荷、丹参、黄芩等生药鉴别…………………………………(54)
实验十一洋金花、地黄、金银花、天花粉等生药鉴别…………………………(57)
实验十二桔梗、茵陈、红花、苍术、木香等生药鉴别…………………………(60)
实验十三麦冬、知母、砂仁、半夏、天麻等生药鉴别…………………………(63)
实验十四动物、矿物类生药 ………………………………………………………(67)
实验十五中成药的显微鉴定 ………………………………………………………(69)
实验十六生药的综合鉴定 …………………………………………………………(71)
附录一 显微绘图法 ………………………………………………………………(72)
附录二 显微测量法 ………………………………………………………………(75)
附录三 组织透化法…………………………………………………………………(78)
附录四 常用试剂及配置方法………………………………………………………(79)
附录五 石蜡切片法…………………………………………………………………(82)
实验一 生药的理化鉴定(1)
一、 实验目的
(一)掌握生药中糖类、苷类成分与氰苷、酚苷、蒽苷的理化性质和定性反应并能应用于生药鉴定中,以确证生药中这些成分是否存在。
(二)学会生药理化鉴定的常用方法。(微量升华法、灰分测定法)
二、实验材料、仪器及试剂
试管架、试管、量筒、具塞试管、烧杯、三角烧瓶、水浴锅、吸管、滤纸、小漏斗。马福炉、天平、坩锅、干燥皿、Fehling试剂、α-萘酚试剂、10%的盐酸试液、10%氢氧化钠试液、苦味酸钠试纸、氢氧化钾试液、硫酸亚铁试液、稀盐酸试液、1%三氯化铁、5%三氯化铁试液、醋酸镁甲醇溶液、浓硫酸。
三、实验内容与方法
1、单糖、多糖与苷类成分的鉴别 取玉竹0.5g,剪碎,置50ml三角瓶中,加蒸馏水10ml,瓶口放一小漏斗(空气冷凝,防止水分蒸发太多),水浴温热10分钟,滤过药渣加适量水,再滤过,合并滤液至10ml,备用。
(1)费林(Fehling试验)试验:取滤液lml于50ml烧杯中,加碱性酒石酸铜试剂(Fehling)试剂8ml(临用时由甲液与乙液等量混和而成,置沸水浴加热5分钟,观察有无砖红色沉淀产生(尤其要观察瓶壁处))。
反应原理:
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(2)α-萘酚试验(Molish试验):取玉竹粉末0.5~1g,加蒸馏水10ml。水浴温热5~10min,滤过,取滤液1ml于大试管中,加α-萘酚试剂2~3滴,摇匀,沿管壁,缓慢加入浓硫酸1m1,保留二层液面,观察二液面交界处有无形成紫红色环。
反应原理:
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2、氰苷的鉴别
(1)苦味酸钠试验:取苦杏仁1粒,研碎后置具塞试管中,加水数滴湿润,管口悬挂苦味酸钠试纸,密塞,将试管置60"℃水浴中温热,观察试纸逐步由黄变红。
(2)普鲁士蓝试验:取苦杏仁1粒,研碎后置试管中,加水数滴湿润,立即用滤纸包扎管口,并加氢氧化钾试液1滴使湿润,将试管置60"C水浴温热约10分钟后,于试纸上加硫酸亚铁溶液1滴,并加稀盐酸和5%三氯化铁试液各1滴,滤纸即显蓝色。
3、酚苷的鉴别 取牡丹皮0.5g,加乙醇5ml,水浴温热5分钟,取上清液2ml于试管中,滴加1%三氯化铁试剂1滴,即呈紫红色。
反应原理:
ROH+(Fe(H2O)6)3+→[Fe(H2O)5(ROH)]3+→[Fe(H2O)5RO]2++H3O+(ROH示丹皮酚)
4、蒽苷的鉴别
(1)碱液反应:取大黄粉少许于小试管中,加10%氢氧化钠试液,即呈红色,继续加10%盐酸使中和,药液变黄色,再加氢氧化钠试液又显红色。
(2)Borntrager(保恩特来格)反应:取大黄粉约0.5g于试管中,加10%氢氧化钠试液2ml,振摇后过滤,得红色滤液,加10%盐酸酸化后,溶液转为黄色,加乙醚2ml,振摇后静置分层,分取黄色的乙醚液于另一试管中,再加l0%氢氧化钠试液1ml,振摇匀后静置分层,则碱液层又显红色。
(3)醋酸镁反应:取大黄粉末约0.2g于试管中,加乙醇3ml,水浴温热5分钟,滤过,得滤液,加l%醋酸镁甲醇溶液2滴,振摇后观察,溶液渐呈橙红色。
(4)微量升华:如图5所示,取大黄粉末少许于金属圈内、小火徐徐加热数分钟,可见黄色升华物附着载玻片上,将玻片取下翻转后,在显微镜下检视,低温升华时可见针状结晶、高温时可见羽毛状结晶,滴加碱液后,结晶消失,并呈红色。
5、生药中灰分的测定
总灰分测定 取粉碎后过二号筛的三七粗粉约3g,置炽灼至恒重的坩埚中,精密称定(精确至0.01g),放马福炉中缓缓炽热,至完全灰化时,逐渐升温到500~600℃,完全灰化至恒重。根据残渣重量,计算三七中含灰分的百分数。
酸不溶性灰分的测定 取上面所得灰分,加入稀盐酸约10ml,用表面皿覆盖,水浴上加热10分钟,表面皿用5ml热水冲洗,洗液入坩埚,用无灰滤纸过滤,坩埚内残渣用水洗于滤纸上,并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。将滤渣连同滤纸移至同一坩埚内,干燥并炽灼至恒重。根据残渣重量,计算三七中含酸不溶性灰分的百分数。
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四、实验报告
1.记录各鉴别反应的步骤与结果,并说明反应原理(可用化学反应式表示)。
2.计算出三七的总灰分、酸不溶性灰分的百分含量。
五、思考题
1.怎样鉴别某生药含单糖、多糖或苷类成分?
2.灰分测定的原理是什么?
3.总灰分和酸不溶性灰分与生药品质的关系是什么,举例说明。
实验二 生药的理化鉴定(2)
一、实验目的
(一)掌握生药中黄酮苷类、皂苷类、强心苷类、香豆精苷类的理化性质和定性反应,并能应用于生药鉴定中。
(二)掌握生药中生物碱类、鞣质类、氨基酸与蛋白质类的理化性质和定性鉴别反应。
(三)学会应用荧光分析法、薄层层析法,水份测定法鉴别生药。
二、实验材料、仪器及试剂
槐米、桔梗、穿山龙、地高辛片(tabellae digoxin)、白芷、粉防己、硫酸阿托品注射液、五倍子、槟榔、天花粉。
试管、试管架、量筒、烧杯、水浴锅、50ml三角烧瓶、滤纸、蒸发皿、紫外分析灯、硅胶板、层析瓶。
乙醇、1%盐酸、碘化铋钾试剂、碘化钾碘试剂、碘化汞钾试剂、硅钨酸、明胶氯化钠溶液、三氯化铁试剂、饱和溴水、醋酸铅试剂、饱和石灰水、茚三酮试剂、10%氢氧化钠溶液、0.5%硫酸铜试剂、镁粉、1%三氯化铝甲醇液、10%盐酸试液、0.9%氯化钠溶渡,2%红细胞悬浮液、醋酐、浓硫酸、冰醋酸、三氯化铁-冰醋酸试剂、K-K试剂、3,5-二硝基苯甲酸乙醇试液、乙醚、7%盐酸羟胺甲醇溶液、20%氢氧化钾甲醇溶液、稀盐酸、1%三氯化铁乙醇溶液、甲苯、醋酸乙酯、甲酸。
槐花乙醇提取液、远志生理盐水提取液、夹竹桃醇提取液、粉防己酸性乙醇液;核桃楸皮、秦皮和秦皮甲素乙醇提取液。
三、实验内容与方法
1、黄酮苷的鉴别 取槐米粗粉约0.5g,加乙醇10ml,水浴温热5分钟,滤过,得滤液。
(1)盐酸-镁粉还原反应:取上述滤液2ml于大试管中,加镁粉少许振摇,滴加浓盐酸数滴,观察到产生许多泡沫,同时溶液渐变樱红色。
(2)三氯化铝反应:取上述滤液2ml于试管中,加1%三氯化铝甲醇溶液1ml,振摇,可见溶液渐变鲜黄色。
2、皂苷的鉴别 取桔梗与穿山龙粗粉各1g,分别置50ml三角烧瓶中,加水l0ml,煮沸2分钟,滤过,滤液加水至10ml,备用。
(1)泡沫试验:分别取上述滤液各2ml,置2个试管中,密塞或以手指压住管口,强烈振摇数分钟,观察是否产生大量泡沫,放置10分钟后,再记录泡沫的高度。
另取桔梗与穿山龙滤液各4ml,分置4支试管中,每支2ml滤液,其中一支桔梗与一支穿山龙滤液中分别加10%盐酸试液调节pH为l,另一支桔梗与另一支穿山龙滤液中分别加10%氢氧化钠试液调节pH为13,将酸碱两管滤液同时强烈振摇数分钟,观察泡沫高度。可见桔梗溶液的酸碱两管泡沫高度相同。而穿山龙碱液管的泡沫比酸液管高。
(2)溶血试验:取远志生理盐水提取液2ml置一试管中,另取一试管加0.9%NaCl溶液2ml,于二支试管中分别加2%红细胞球悬浮液1ml,摇匀后放置,注意观察哪支试管溶液变清。
3、强心苷的鉴别 分别取新鲜夹竹桃叶1片剪碎与地高辛3片,各置50ml三角烧瓶中,加70%乙醇10ml,用空气冷凝装置水浴加热5分钟,滤过,得滤液,并加水至10ml,备用。
(1)α-去氧糖反应(Keller-Kiliani反应):取夹竹桃滤液2ml于蒸发皿中.水浴蒸干,加三氯化铁-冰醋酸试液lml使残渣溶解,并转入小试管中,沿管壁缓缓滴加浓硫酸1ml,观察两液层交界处有无棕色环产生,上层醋酸液呈何颜色?另取地高辛滤液2ml,同样操作,观察结果。
(2)3,5-二硝基苯甲酸反应(Kadde反应),取滤液1ml于试管中,滤液中加新配制的3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液1ml,观察溶液是否变成紫色。
反应原理(C17上不饱和内酯环反应)
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4、生物碱的鉴别 取粉防己粗粉0.5g,置50ml三角烧瓶中,加乙醇15ml、用空气冷凝装置、水浴回流10分钟,滤过。滤液置蒸发皿中,于水浴蒸干,残渣加l%盐酸5ml使溶,滤过,滤液分置4支小试管中,每试管1ml,分别滴加下表中生物碱沉淀剂各2滴,观察沉淀的颜色与数量(以+++、++、+表示)。
同时取4支去硫酸阿托品注射液,启封后按下表滴加生物碱沉淀剂,并记录反应结果。
| 碘化铋钾 | 碘化钾碘 | 碘化汞钾 | 硅钨酸 |
粉防己提取液 | ||||
硫酸阿托品注射液 |
5、荧光分析法:取秦皮,核桃核桃楸皮粉末各1g,放入三角烧瓶中,分别加入乙醇l0ml,水浴回流提取l0分钟,放冷过滤。滤液作供试品。另取秦皮甲素(七叶树苷),加乙醇制成每1ml含5mg的标准液做对照品。将三者分别点于滤纸上,置365nm紫外分析灯下观察荧光反应。
6、薄层层析法:(两人做一份)
样品、标准品的制备:同荧光分析法。
制板:取硅胶G2克加入0.5%羧甲基纤维素钠的水溶液6ml,搅拌均匀,倒在6cm×22cm干净的玻璃板上铺匀,放置水平位置,自然干燥,干后于105℃活化一小时,活化后置干燥器中备用。
展开剂:甲苯:醋酸乙酯:甲酸:乙醇=3:4:l:2
点样:距玻璃板下端一厘米处,分别点上秦皮、核桃楸皮的提取液及秦皮甲素的标准液。
展开方式:倾斜上行法。展距约15cm。
晾干后,置365nm紫外分析灯下观察荧光斑点并描绘出层析图谱,计算秦皮甲素的Rf值。
7、水分测定法(甲苯法)
当归约50g。水分测定装置一套,如图6.
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【实验内容、方法及步骤】
1、甲苯的制备 取甲苯约250m1,加少量蒸馏水振摇,放置后弃水层.再蒸馏甲苯后备
用。
2、测定 取经粉碎的当归粗颗粒约20g,精密称定(准确至0.01g),置A瓶中,加甲苯约20ml,如图连接,再从冷凝管顶部加甲苯充满B的狭窄部分,将A置可调温电热套中加热至苯沸腾,调节温度使2滴/秒,至B管的水量不再增加,将冷凝管内部用甲苯冲洗,再用饱蘸甲苯的长刷把管壁上的甲苯推下,继续蒸馏5分钟,放冷至室温,待水分与甲苯完全分离,检读水量,并换算成当归中含有水分的百分数。
生药中的水分含量%=【水分量(ml)÷样品量(g)】×100%
四、实验报告
1、记录有关鉴别反应、化学定性、荧光分析与微量升华的实验结果。
2、绘出秦皮、核桃楸皮的薄层分析图谱并计算出秦皮甲素的Rf值。
3、计算出当归的水分含量。
五、思考题
1、某生药的乙醇提取液与盐酸-镁粉反应不显红色,则能否否定其存在黄酮类成分?
2、试述K-K反应的原理。
3、生药中含水量与生药品质有何关系?
实验三 冬虫夏草、茯苓、贯众、麻黄等生药鉴别
一、目的要求
掌握冬虫夏草、茯苓、猪苓、贯众、麻黄的性状鉴别、显微鉴定特征及理化鉴别方法。
二、仪器、用品、药品
白瓷板、小勺、解剖针、酒精灯、试管、吸水纸、镊子、载玻片。水合氯醛、蒸馏水、5%氢氧化钾、20%氢氧化钠、碘—碘化钾试液、碘试液、碘化铋钾,碘化汞钾、2%麻黄碱酸性水溶液,2%硫酸铜试剂、l0%氢氧化钠、乙醚。
冬虫夏草、茯苓个、猪苓个、茯苓皮、茯苓块、茯神、猪苓片、贯众个、贯众饮片、麻黄。
草麻黄(雌、雄株)腊叶标本。
冬虫夏草子座横切片、绵马贯众、荚果蕨贯众、草麻黄茎横切片。
茯苓、猪苓粉末、草麻黄粉末。
三、实验内容与方法
(一) 性状鉴定
1、茯苓poria和猪苓polyporus
观察并比较茯苓、猪苓二者在外形,颜色、表面特征、断面颜色及质地等方面有何不同?再观察茯苓皮、赤茯苓、茯神和猪苓饮片各有何特征,如何区分?
2、冬虫夏草Cordyceps注意冬虫夏草的虫体似蚕,具20~30条环节,腹面有足8对,子座棕色,长圆柱形,顶端稍膨大,其内密生子囊壳(子实体)。
3、观察多种贯众,注意形状、大小和叶柄断面特征。
4、麻黄Herba Ephedrace:观察草麻黄的药材,并取草麻黄腊叶标本观察,注意其茎节、叶片等有何特征。再分别观察雌株与雄株,注意花序的着生位置与特征等。
注意与中麻黄及木贼麻黄的区别。
草麻黄Ephedra Sinica:少分枝,节上鳞片2片。裂片呈锐三角形,顶端反卷,基部约1/2合生成筒状。
木贼麻黄E.equlsetina:小枝多分枝,节上鳞片2,裂片呈钝三角形,多不反卷,基部约2/3合成鞘状。
中麻黄E.intermedia: 小枝多分枝,节上鳞片3,裂片三角状圆形,微反曲,基部约1/3合成或不合生。
(二)显微鉴定
1、取茯苓粉末,用水或5%氢氧化钾装片,镜检可见:
茯苓:多为无色不规则的颗粒状团块或末端圆钝的分枝状团块,菌丝细长,多无色,可见少数棕色菌丝,无草酸钙结晶。
2、冬虫夏草子座横切面:子囊壳近表生,基部陷于子座内,几列?内有多数细长的子囊,注意壁的厚度、孔口;子囊孢子2~4个,线形,具有多数横隔。
3、取绵马贯众的叶柄横切片观察:注意表皮、下皮层、内皮层及束鞘细胞的特征。维管束的类型、数目及排列方式。细胞间隙大,有的间隙有单细胞间隙腺毛,呈球形或棒状,含棕色分泌物。注意:荚果蕨贯众叶柄横切有何不同。
4、麻黄:
①取草麻黄茎横切片,置显微镜下观察可见,切面呈圆形或椭圆形,具多数棱脊,呈波状凹凸。
表皮:外被厚的角质层,细胞外壁增厚,壁上有细小草酸钙砂晶.两棱线间有内陷气孔,保卫细胞切面呈三角形,内外壁均增厚木化。
皮层:外侧2~3列细胞径向延长,似栅状,每一棱脊的表皮内侧有非木化的下皮纤维束。薄壁细胞中含草酸钙砂晶与方晶,纤维束散在。
维管束:韧皮部外侧具新月形纤维束,形成层几成环,木质部三角形,木化,多少连成环,偶见麻黄式穿孔板。
髓:薄壁细胞中含红棕色物质,偶见环髓纤维。
②取麻黄粉末少许,放在载玻片的中央偏右一些,滴加水合氯醛溶液2滴,用解剖针调和均匀,在酒精灯上以小火微微加热透化(要使载玻片保持平稳,慢慢移动,且勿使液体沸),在加热过程中,要随时添加水合氯醛溶液,千万勿蒸干,加热到粉末微透明为止,待载玻片冷却后再滴加水合氯醛溶液少许,用解剖针将粉末搅匀,加上盖玻片,即可镜检,可见:
表皮碎片:黄棕色,表皮细胞表面观长方形,壁上布满草酸钙砂晶,有的可见气孔。
气孔:多位于表面碎片上,表面观内陷,长圆形,保卫细胞多单个,似电话筒状。
皮层纤维:黄色,成束或单个散在,壁极厚,壁上布满砂晶(嵌晶纤维)。
导管:多成束,多为螺纹与孔纹导管,偶见麻黄式穿孔板(导管分子横壁倾斜,有数个圆形的穿孔排成1~3列)。
色素块:红棕色,散在,形状不规则。
(三)理化鉴定
1、分别取茯苓、猪苓粉末少量,置白瓷板的凹窝内,各加入碘化钾碘l~2滴,放置片刻后,茯苓呈深红色,猪苓呈棕褐色(检查多糖);取茯苓粉末约0.1g于试管中,加水5ml,煮沸,加碘试液3滴,溶液显黄色,应不显蓝色或紫红色(检查淀粉及糊精);分别取茯苓,猪苓粉末少量,置白瓷板凹窝内,各加入适量20%氢氧化钠溶液茯苓呈粘胶状,猪苓不呈粘胶状(与茯苓区别)。
2、麻黄的沉淀反应:取2%麻黄碱水溶液,在白瓷液的两个凹窝内各滴l~2滴,再分别加入碘化铋钾和碘化汞钾试剂l~2滴,前者产生桔黄色沉淀,后者不产生沉淀。
3、麻黄的双缩脲反应:取2%麻黄碱酸性水溶液2ml于试管中,加入2%硫酸铜试剂数滴,再加入l0%氢氧化钠至微过量(约5滴),呈紫红色,然后加入等量乙醚,轻轻振摇,放置数分钟后,醚层显紫色,水层呈蓝色。
四、实验报告:
(一)绘草麻黄粉末特征图,茯苓粉末特征图。
(二)记录草麻黄的理医学全在线化鉴别结果。
(三)记录茯苓理化鉴别的实验结果。
五、思考题:
(一)麻黄活性成分是什么?横切片和粉末有哪些重要鉴别特征?
(二)绵马贯众的药材性状和显微特征有哪些?
(三)茯苓主要含有何种成分,有何药理作用?
(四)茯苓与猪苓主要区别点是什么?
(五)冬虫夏草的入药部位,鉴别点是什么?何谓真菌类植物?常用真菌类生药有哪些?
实验四 大黄、何首乌、黄连、川乌、白芍等生药的鉴定
一、实验目的
1、掌握大黄、何首乌、黄连、川乌、白芍实验观察的各项内容。
2、了解牛膝、牡丹皮等生药的性状鉴别特征。
二、实验材料,仪器及试剂
1、药材及饮片:大黄、何首乌、黄连(味连、雅连、云连)、川乌、附子(黑附片、白附片)、白芍(赤芍)、虎杖、牛膝、川牛膝、牡丹皮、升麻、威灵仙、白头翁。
2、药材横切片:大黄根茎、何首乌、味连、附子。
3、药材粉末:大黄、何首乌、黄连。
4、仪器试剂:试管、试管夹、酒精灯,微量升华器、镊子、解剖针、载玻片、盖玻片、纱布、紫外分析灯。10%NaoH、10%HCI、氨水、乙醚、30%硝酸。
三、实验内容与方法
(一)性状鉴定:
1、大黄Raidx Rhlzoma Rheiz:观察大黄生药性状,判断其为根还是根茎。注意形状、颜色、纹理、质地。髓部有无星点?其形状,大小和分布如何?嗅之有特殊香气,味苦,嚼之粘牙,有砂粒感。
2、何首乌:Radix Polygoni Multdlori:注意其外部颜色,断面黄棕色或淡红棕色,粉性。中央有较大的木心。皮部可见“云锦花纹”(异型维管束)。
3、黄连Rhizoma Coptidls:味连呈簇状分枝,形如倒鸡爪,表面有棕褐色侧根,节密生,结节状隆起。上具褐色鳞片。部分节间平滑(习称过桥),断面皮部和髓部暗棕色,木部鲜黄色,味极苦。比较雅连、云连与味连的不同点。
4、乌头与附子Radix Aconiti et Radix AconitiLateralis Preparata:乌头多为母根,呈瘦长的倒圆锥形,上具残茎,表面皱缩不平,散生小瘤状侧根或摘除子根的痕迹。断面灰白色、粉性,味麻。
盐附子:为子根,圆锥形,饱满,表面附盐霜。顶端具芽痕,周围有瘤状突起的支根(钉角),侧面具与母根摘离痕迹。断面灰棕色,中间略浅,可见多角形的形成层环纹、味咸而麻舌。
白附片:纵切片,黄白色,半透明。
黑附片:为纵切片,呈黑棕色,角质,近边缘可见稍突起的木质部。
5、白芍与赤芍:Radix Paeonlae Alba and RadixPaeoniae Rubra。白芍:根呈圆柱形,表面何色?质坚实,角质样,切断面何色?木部具放射状纹理。味微苦酸。赤芍:根表面暗棕色至紫棕色,有横向突起的皮孔,外皮易剥落,质地如何?断面和白芍有何不同?味微苦酸涩。
6、结合讲义,观察虎杖、怀牛膝、川牛膝、牡丹皮、升麻、威灵仙、白头翁的性状鉴别特征。
(二)显微鉴别
1、大黄:取大黄根茎横切片,自外向内依次观察:木栓层和皮层大多已除去,偶有部分残余,正常维管束为外韧型,形成层细胞扁平,排列成环,外侧为韧皮部、韧皮射线较平直,内含棕色物质;内侧为木质部,木射线内也含棕色物质,导管稀疏排列。
髓:大,由大型薄壁细胞组成,异型维管束分布在髓内;薄壁细胞内含草酸钙簇晶和众多淀粉粒。
每个异型维管束自外向内有以下构造。
木质部:位于形成层外侧,导管径向排列,稀疏。
形成层:环状,由数列扁平细胞组成。
韧皮部:位于形成层内侧,有时可见大型粘液腔。
射线:由1至数列薄壁细胞组成,自韧皮部向外星芒状射出,细胞内含深棕色物质。
2、取何首乌横切片,置显微镜下观察:
木栓层:为多列整齐扁平的木栓细胞,充满红棕色物质。
皮层:较宽,由何种细胞组成?皮层内散生的异型维管束为近圆形的复合维管束,偶有单个维管束,均为外韧型。
韧皮部:窄小。
形成层:呈环状。
木质部:导管较少,周围有管胞及木纤维环绕,中心可见初生木质郡,薄壁细胞内可见淀粉粒和草酸钙簇晶,有些薄壁细胞中充满红棕色物质。
3、取黄连(味连)根茎横切片,置显微镜下观察可见。
木栓层:为数列扁平的木栓细胞,有的其间散有石细胞,木栓层外侧常有残留的表皮层和鳞叶维管束。
皮层:宽广。其间散有单个或成群的石细胞,可见横走的根迹维管束。
韧皮纤维:位于韧皮部外恻,成束,外方常伴有少数石细胞。
维管束;外韧型,成断续的环状排列,束间射线宽广;束间形成层不明显。木质部细胞均木化。
髓:由薄壁细胞组成。雅连可见单个或成群的石细胞。
取黄连粉末做成临时装片,镜检可见。
石细胞:多见。淡黄棕色,类多角形.纹孔明显。
木纤维:多成束。黄色、壁厚。
韧皮纤维:成束。黄色、壁厚。
另外可见木栓细胞(表面观);鳞叶细胞(细胞长方形,壁弯曲);导管碎片等。
4、取附子根横切片,置显微境下观察可见:
后生皮层:位于最外方,为数列棕色木栓化细胞,多破裂,皮层细胞间散在石细胞,单个或3~5个成群。
内皮层:明显。为一列排列整齐的扁平细胞,换高倍镜观察可见凯氏点。
韧皮部:宽广,小型筛管群径向散列,细胞内无淀粉粒。
形成层:呈不规则多角形。
本质部:导管多呈“V”字形排列,有时可见初生木质部。
髓:明显。
薄壁细胞中充满淀粉粒。
(三)理化鉴别
1、微量升华:取何首乌粉末少许,微量升华后,在显微镜下可见何种类型结晶?加碱液有无颜色变化?
2、Borntrager反应:取大黄粉末0.5克,置试管中,加10%氢氧化钠5毫升,微振摇,观察颜色变化。取上清夜2毫升加盐酸至溶液为黄色;再加等量乙醚,轻轻振摇,放置片刻。醚层应显黄色。分取醚层,加氨试液,振摇,氨液层应显红色,醚层变为何色?上述颜色变化的原理是什么?
3、黄连的定性反应(示教)
取黄连粉末少许于载玻片上,加30%硝酸1-2滴,放置5-10分钟后镜检,可见针簇状的硝酸小檗碱结晶。为何产生此反应?
又取黄连饮片,置紫外灯下观察,显金黄色荧光,木质部尤为明显。
四、实验报告
1、绘黄连根茎横切面简图。
2、记述何首乌、大黄、黄连理化鉴定结果。
五、思考题
1.附子根的组织构造与正常双子叶植物次生根的构造有何不同?
2.味连性状,显微结构上有哪些鉴别特征?它所含的主要成分是什么?如何鉴别?
3.大黄药材断面有哪些突出特征?横切面髓部常见什么样的结构?
实验五 yin羊藿、防己、厚朴、五味子、肉桂等生药的鉴别
一、实验目的
1.掌握yin羊藿、防己、厚朴、五味子、肉桂等药材的实验观察各项内容
二、实验材料、仪器及试剂
1.药材及饮片:yin羊藿、防己(广防己、木防己)、厚朴、五味子、肉桂(桂枝)、北豆根、辛夷、乌药
2.药材横切片:yin羊藿、五味子、肉桂
3.药材粉末:肉桂、防己
三、实验内容与方法
(一)性状鉴别
1.yin羊藿:Herba Epimedii 茎细长平滑,黄绿或棕黄色,叶片卵圆形,中间片较两侧叶片大,先端尖,叶基部深心形,两侧小叶基部偏斜,边缘有细毛状锯齿,上表面绿色或黄绿色,无毛,下表面灰绿色,有稀疏毛茸,叶片近革质而脆,气弱,味极苦。
2.防己(粉防己):RadixStephaniae Tetrandrae 根在形状上有何特征?表面何色?具明显横向突起的皮孔。纵剖面黄白色,有维管束条纹。质坚重,断面平坦,灰白色、粉性。另取广防己生药,比较两者的异同点。
3.厚朴:Cortex Magnoliae 观察厚朴生药(包括干皮、枝皮与根皮)的性状特征,注意其卷曲形式,外表面与内表面色泽、断面特征,质地与气味。
4.五味子:Fructus Schisandrae 北五味子果实呈皱缩的不规则形,表面紫红色或暗红色,显油润,果肉柔软,内含种子1—2粒;种子肾形,表面黄棕色,具光泽,种皮硬脆,种仁淡黄色,果肉味酸甜,种子破碎微有香气,味微咸而辛。
南五味子:取南五味子与北五味子生药进行比较,注意两者的异同点。
5.肉桂:Cortex Cinnamomi 取企边桂和油桂筒观察:注意两者的外表面颜色,特征,内表面颜色,划痕,折断面特征,气味等方面的异同点。注意板桂的形状。
6.参照讲义,观察北豆根、辛夷、乌药的性状特征。
(二)显微鉴别
1.yin羊藿:取yin羊藿叶横切片,置显微镜下观察可见
上表皮:1列细胞近方形,外具角质层。
下表皮:l列细胞近方形,有气孔,有时可见残留非腺毛。
叶肉:栅栏组织2—3列细胞,短小,排列不整齐,有的细胞中含深色物;海绵组织细胞排列疏松,支脉维管束明显,周围异细胞中含草酸钙棱晶或柱晶。
主脉:薄壁细胞木化,维管束3个,外韧型;木质部具导管与纤维。
2.厚朴干皮横切面镜检可见
木栓层:由多列细胞组成,栓内层为2~4列石细胞。
皮层:较宽厚,散有多数石细胞群,石细胞多呈分枝状,靠内层有切向延长的椭圆形油细胞散在,壁稍厚。
韧皮部:占大部分,射线宽1~3列细胞,韧皮纤维众多,壁极厚,油细胞散在。
3.取五味子横切片观察
(1)果皮:外果皮 为1列长方形表面细胞、壁稍厚、外被角质层、间有油细胞。
中果皮 10余列薄壁细胞,其间散有小形外韧型维管束。
内果皮 细胞1列,方形,较小,排列紧密。
(2)种皮:最外层1列栅状石细胞,其下为3~4列类圆型石细胞,较大;石细胞层内侧为数列薄壁细胞,种脊部位有维管束;往里为油细胞层,由l列长方形油细胞组成,含有棕黄色挥发油,再往里为3~5列小形细胞,最里面为内种皮,细胞壁增厚。
(3)胚乳:细胞多角形,细胞壁较厚,细胞内含脂肪油滴及糊粉粒。
取五味子粉末做成临时装片镜检可见:
①种皮外层石细胞:表面观多角形或长多角形,壁厚孔沟极细密。
②种皮内层石细胞:呈类多角形或不规则形,纹孔较大而密。
③外果皮细胞:表面观类多角形,垂周壁连珠状增厚,角质线纹明显;油细胞散在于表皮中,类圆型,内含挥发油。尚可见中果皮薄壁细胞、纤维、淀粉粒、内胚乳细胞等。
4.取肉桂横切片观察
木栓层:木栓细胞数列,最内层木栓细胞外壁增厚,木化。
皮层:散有石细胞、油细胞及粘液细胞。
中柱鞘:有石细胞群,排列成环,外侧伴有纤维束。
韧皮部:较厚。可见厚壁纤维和油细胞,射线l~2列,含细小草酸钙针晶,薄壁细胞中含有淀粉粒。
取肉桂粉末做成临时装片,镜检可见:
①纤维:大多单个散在,长梭形,壁极厚,木化,纹孔及孔沟不明显。
②石细胞:较多,类方形或类圆型,壁厚,有的一面菲薄。
③油细胞:类圆型或长圆形,有时尚会有黄色挥发油滴。
④草酸钙针晶:众多,细小散在或成束,常存在于射线细胞中。
⑤木栓细胞:表面观呈多角形,木化,常含棕色物质。
四、实验报告
绘肉桂粉末特征图。
五、思考题
1.防己的药材性状有哪些主要特征?其所含的主要成分是什么?如何鉴别?
2.厚朴有哪些规格,各有何特征?
3.南五味子与北五味子有何异同点?
4.肉桂的商品规格有哪些,药材性状、显微方面有哪些鉴别特征?
实验六 延胡索、板蓝根、大青叶、山楂、苦杏仁等生药的鉴别
一、实验目的
1、掌握延胡索、板蓝根、大青叶、山楂、苦杏仁实验观察的各项内容
二、实验材料、仪器及试剂
1、药材及饮片:延胡索、板蓝根、大青叶(蓼兰叶、菘兰叶)、山楂(野山楂)、苦杏仁、浸泡苦杏仁(甜杏仁)、青黛、杜仲、枇杷叶、木瓜
2、药材横切片:延胡索、板蓝根、苦杏仁
3、透化标本:蓼兰叶
4、腊叶标本:蓼兰、菘兰
5、药材粉末:延胡索、蓼兰叶
6、仪器试剂:研钵、酒精灯、具塞试管、试管夹、苦味酸钠试纸、稀盐酸、0.5N硫酸、l%铁氰化钾、1%三氯化铁、重铬酸钾溶液。
三、实验内容与方法
(一)性状鉴别:
1、延胡索:Rhizoma Corydalis 块茎呈不规则扁球形,有的呈倒圆锥形。表面灰黄色或灰棕色,有不规则网状细皱纹,上端有略凹陷的茎痕,底部中央略凹呈脐状,有数个圆锥状小凸起(根痕)。质坚硬,断面棕黄色角质样,有蜡样光泽,味苦。
2、板蓝根:Radix Isatidis 圆柱形、淡棕黄色,表面有横长皮孔样突起,有支根痕。根头部膨大,顶端有盘状凹陷的茎基。周围有轮状排列的叶柄残基和密集的疣状突起。质坚实,断面粉性,味微甜而后苦涩。
3、大青叶:Folium Isatidis 结合原植物标本观察菘蓝与蓼蓝叶,注意二者在颜色、叶片形状、叶缘、叶基、托叶及质地、气味等方面的不同点。
4、山楂:Fructus Crataegi 类球形,深红色,有光泽,表面有细小白色斑点。顶有凹窝,边缘有宿萼,基部有细果柄或柄痕。果核5枚,弓形。果肉深黄至淡棕色。气清香,味酸微甜。
5、苦杏仁:Semen Armeniacae Amarum 取浸泡的苦杏仁,注意其形状和颜色,基部对称否?基部中央有一棕色合点,由此散出行多深棕色的脉纹,种子尖端为种孔,近尖端边缘处有短线状种脐,种脐与合点间为线形种脊。剥开种皮可见两枚白色肥厚子叶,加水研磨,有苯甲醛气味。味苦。
甜杏仁:较大,基部对称,味淡,加水研磨苯甲醛气味较弱.
6、参照讲义,观察青黛、杜仲、枇杷叶、木瓜等药材的性状特征。
(二) 显微鉴定
1、延胡索:取延胡索块茎横切片显微镜下观察
①皮层细胞10余层,扁平。外侧2~3层常木化,具细密纹孔.
②韧皮部宽广,筛管与管状分泌细胞伴生,成环状散列。
③木质部常分为4~7小束,疏列成环状,中央有较宽的髓。
粉末观察:
①薄壁细胞类多角形,类方形或类圆形,含糊化淀粉粒。
②厚壁细胞类多角形,长条形,壁念珠状增厚,木化、纹孔密集。
③石细胞单个散在或少数成群。
④管状分泌细胞、导管可见。
2、板蓝根:取板蓝根横切片镜下观察
①木栓层为数层细胞。
②韧皮部宽广,射线明显。
③形成层成环。
④木质部导管类圆形,木纤维成束。
⑤薄壁细胞中含淀粉粒。
3、取已透化好的蓼蓝叶和蓼兰粉末,做成临时装片,镜检可见:
气孔:表皮细胞间嵌有气孔,为不典型的平轴式(两个付卫细胞不等大)
草酸钙簇晶:位于叶肉细胞内,多而明显。
多列式非腺毛:以叶缘、叶脉、侧脉上多见,壁厚、木化、有纹孔。
腺毛:以下表皮为多,为黄色圆点状,高倍镜下可见腺毛头部由2~8个细胞组成。
4、取苦杏仁种子横切片观察
①种皮:表皮细胞1例,其间有近圆型橙黄色的石细胞,上半部突出于表皮外,下半部埋在表皮组织中,有大的纹孔。
②营养层:位于表皮下方,细胞皱缩,散有细小维管束。
③内种皮:细胞1列,含黄色物质。
④胚乳:外胚乳为1列颓废细胞,内胚乳为1列长方形细胞,内含糊粉粒及脂肪油。
⑤子叶:由薄壁细胞组成含有糊粉粒及脂肪油。
(三) 理化鉴别
1、取延胡索粉末2g,加0.5N硫酸溶液10ml,振摇,滤过。取滤液2ml,加1%铁氰化钾溶液0.4ml与1%三氯化铁溶液0.3ml的混合液,显深绿色,渐变蓝色,放置后有深蓝色沉淀;另取滤液加重铬酸钾数滴,产生黄色沉淀。
2、苦杏仁甙的鉴别:取苦杏仁l~2枚研碎,放人试管中加水或稀盐酸湿润,再取苦味酸钠试纸一条悬挂于试管口,管口用塞子连同试纸上端一同塞住;然后稍加热,过几分钟后试纸由黄变成砖红以,为什么?
四、实验报告
1、绘延胡索、蓼蓝叶粉末特征图。
2、记述延胡索、苦杏仁理化鉴别结果。
五、思考题
1、延胡索的主要化学成分是什么?有何药理作用?若想增强其疗效,应采用何种炮制方法?
2、如何进行叶类药材的鉴别研究?
3、北方常用大青叶有哪几种?在性状、显微上它们有何区别,为什么都能做大青叶使用?
实验七 黄芪、甘草、槐米、黄柏等生药鉴别
一、目的要求
(一) 掌握黄芪、甘草、黄柏、槐米的性状显微特征
(二) 掌握槐米的理化鉴别
二、实验用品、试剂、材料
黄芪、红芪、甘草、槐米、番泻叶、川黄柏、关黄柏生药及饮片,黄芪的伪品。黄芪、甘草、黄柏的横切片。甘草、黄柏粉末。槐米甲醇提取液、盐酸、镁粉、试管。
三、实验内容与方法
(一) 性状鉴定
1、黄芪Radix Astragaly:圆柱形。表面灰黄或浅棕。有纵皱、皮孔及支根痕,外皮脱落处可见网纹。质柔韧,纤维性强,具粉性,断面显菊花心。味甘而有豆腥气。
类同品:红芪。表面红棕色,栓皮易脱落,质坚硬,致密。
注意伪品黄芪与正品的区别。
2、甘草Radis Glycyrrhizae根呈圆柱形。表面红棕色或灰棕色。有明显的皱纹和横长的皮孔,外皮有时呈鳞片状剥裂而露出黄色内皮。质坚实。折断时有粉尘散出。断面纤维性、淡黄色,形成层环明显,气微,味甜而特异。
根茎:园柱形,表面可见芽或芽痕,断面中央有髓。
3、槐米Flos Sophorae lmmaturus:注意花蕾的形状,大小和颜色。上部为黄白色的花冠,下部为黄绿色的钟状花萼。
4、黄柏Cortex Phellodendri观察黄柏生药(川黄柏和关黄柏)的性状特征,注意木栓层的有无与厚度,表面特征,平滑或粗糙,有无皮孔,分布及形状如何?色泽如何?二种有无不同?折断面和横断面特征各如何?同时注意气味及粘性。
5、番泻叶 Folium Sennae:狭叶番泻叶:卵状披针形。革质。先端尖而有锐刺,叶基不对称。有的表面有横斜压纹。
尖叶番泻叶:宽披针形或长卵形,光端尖或微突,叶基不对称。无横斜压纹。
我们实验所用药材有混合品。其中还有少量耳叶番泻叶,小叶片呈卵圆形或倒卵形,先端钝圆,微凹或具刺突、叶基对称或不对称,表面多为红棕色,被有灰白色毛茸。
(二)显微鉴定
1、黄芪根横切片:
木栓层:数列木栓细胞,栓内层由厚角细胞组成,切向延长。
韧皮部:纤维成束或单个散在,纤维与筛管群、薄壁细胞交互排列,近栓内层处有时可见石细胞及纵向管状木栓组织(外为数层木栓细胞,中央为木化纤维及薄壁细胞,细胞内含棕色物质)。
木质部:导管单个或2~3个相聚,导管间有木纤维束及木薄壁细胞。
射线:发达,辐射状排列,外侧常弯曲,有裂隙。
薄壁细胞中含淀粉粒。
2.甘草:
取甘草根茎横切片:自外向内观察其组织的特征是:
木栓层:为数列至20~30列细胞,红棕色;排列整齐。
皮层:较窄。为数列薄壁细胞,纤维群散在。
韧皮部:筛管群常压缩变形而颓废成条状;韧皮纤维壁厚、成束,微木化其周围薄壁细胞中多含草酸钙方晶;韧皮射线多弯曲,常有裂隙。
形成层:束内形成层明显,为数列扁平细胞,束间形成层不明显。
木质部:导管较大,木纤维多成群,其周围薄壁细胞中也含草酸钙方晶,木射线较平。
髓部:根中心无髓。根茎中心有髓。薄壁细胞中含众多细小淀粉粒。
取甘草粉末,制成临时装片镜检可见:
①晶鞘纤维:众多,多成束;含晶细胞的壁增厚,非木化。纤维细长壁极厚,微木化,孔沟不明显。②导管:主为具缘纹孔导管较大,多破碎。③草酸钙方晶:呈类双锥形、长方形或类方形;④木栓细胞:棕红色。表面观呈多角形,壁薄、微木化⑤淀粉粒:多单粒,椭圆形,卵形或类球形,脐点点状或短缝状;复粒稀少,此外,有射线细胞及少数黄棕色色素块。
3.黄柏:自外向内注意观察下列组织特征。
木栓层:残存木栓细胞。
皮层:由薄壁细胞组成,石细胞与纤维成群或散在。石细胞形状多样,常呈分枝状或不规则状,孔沟明显。
韧皮部:射线细胞l至数列,细胞径向延长,纤维群成层,径向排列,木化。
皮层与韧皮部内均有粘液细胞,并有众多草酸钙方晶。
取黄柏粉末做成临时装片,镜检可见:
纤维:鲜黄色,常成束,多碎断,边缘微波状,周围细胞含草酸钙方晶,形成晶纤维,含晶细胞壁木化增厚。
石细胞:鲜黄色,分枝状,类圆形或纺锤形,分枝状者形大,壁厚,层纹明显。
草酸钙方晶较多,有的呈双锥形。
淀粉粒:很小,单粒,球形。
(三)理化鉴定
槐米:
盐酸镁粉反应:取槐米甲醇提取液lml;置试管中,加盐酸2~3滴,再加少许镁粉,提取液显樱红色。为什么?
四、实验报告
(一)绘甘草粉末特征图。
(二)绘黄柏横切面简图。
(三)记述槐米理化鉴定结果。
五、思考题
(一)什么是晶鞘纤维?
(二)黄柏粉末中有哪些鉴别特征?
(三)黄芪、甘草在性状方面如何区别?
(四)槐米中含有哪类化学成分,用何种方法鉴别?
实验八 人参、三七、沉香、丁香等生药鉴别
一、目的要求
(一) 掌握人参的四大鉴别特征,了解人参有关商品规格及常见伪品。
(二) 掌握沉香、丁香、三七的性状显微特征。
(三) 掌握人参、丁香的理化鉴别。
二、实验用品、试剂、材料
试管、烧杯、滤纸、漏斗、酒精灯、三角架、石棉网、小勺、蒸发皿、95%乙醇、冰醋酸、浓硫酸、氯仿、3%NaOH的氯化钠饱和液、三氯化锑氯仿饱合溶液。人参腊叶标本及浸制标本,野山参、生晒参、红参、糖参、高丽参、西洋参、人参常见伪品;国产沉香、进口沉香、丁香、三七及其伪品、五加皮。人参、三七、沉香、丁香横切片。人参、丁香粉末。
三、实验内容与方法
(一)原植物鉴定
观察人参Panax ginseng C.A.Mey腊叶标本,注意根茎特征。茎直立,单一。掌状复叶轮生茎顶,注意小叶形态特征,叶片数目。植令几年?何种花序?
(二)性状鉴定:
1、人参Radix Ginseng:观察野山参的外部形态特征,搞清什么是“雁脖芦”枣核宁”,“横短体”、“铁线纹”、“珍珠点”。观察园参浸制标本,注意芦头、芦碗及主根、支根、须根各部特征。观察并比较生晒参、红参、糖参、高丽参性状特征,注意生晒参断面,形成层环纹棕黄色。皮部可见放射状裂隙及黄棕色点状树脂道。气特异,味甜,微苦。红参侧根多已除去,棕红色,半透明,偶有暗褐色斑块,质硬脆,断面平坦角质中心部较浅。糖参表面淡黄白色,质松泡,断面白,有菊花纹,味甜。注意伪品人参与正品的区别。
2、三七Radix Notoginseng:根呈纺锤形或类圆锥形,表面灰黄或灰褐色,有蜡样光泽,有断续的纵皱纹及少数横长皮孔,顶端有茎痕,周围有瘤状突起,下部有支根断痕,质坚实。击碎后皮部与木部分离,皮部可见棕色细小树脂道斑点。气微味苦后微甜。注意伪品三七与正品的区别。
3、沉香Lignum Aquilariae Resinatum药材呈不规则块状或小片状,表面有刀削痕及不规则凹凸,并有黑褐色及黄白色相间的斑纹。质坚硬折断面刺状,具特异香气,味苦。燃烧时可产生浓烟,伴有浓烈香气和黑色油状渗出物。进口沉香表面密布棕黑色树脂斑痕或细纵纹,能沉或半沉于水,气味较浓烈。
4、丁香Flos Caryophylli药材略呈研棒状,花冠圆球形,花瓣4,覆瓦状抱合,棕褐色,花瓣内为雄蕊和花柱。萼筒圆柱状,棕褐色上部有4枚三角状萼片,十字状分开。质坚富油性、气芳香浓烈,味辛辣,有麻舌感。
对照讲义观察五加皮的性状特征。
(三) 显微鉴定
1.人参在显微镜下可见
木栓层:数列扁平的木栓细胞。
皮层:狭窄。
韧皮部:外侧常有大形裂隙和颓废的筛管组织,内侧细胞较小,排列紧密;每个韧皮部束常有2—3个树脂道径向散列,近形成层处较多,树脂道呈园形或长园形,由多个扁小肾形分泌细胞组成。
形成层:为三至数层扁平细胞组成完整的环层。
木质部:射线宽广,导管单个或数个相聚,径向断续排列,薄壁细胞中含多数淀粉粒及草酸钙簇晶。
2.三七:横切面镜下可见
木栓层为数列细胞。韧皮部散布树脂道。形成层成环。木射线宽广,无裂隙,木质部导管近形成层处稍多,薄壁细胞中含有淀粉粒,并有少数草酸钙簇晶,棱角钝,射线细胞中淀粉粒较多。
3.白木香横切面:
木射线宽l一2列细胞,含棕色树脂。导管圆形,多角形,有的含棕色树脂,木纤维多角形,壁厚木化。木间韧皮部呈扁长椭圆状,常与射线相交,细胞内含树脂。
薄壁细胞中含草酸钙柱晶。
参照讲义,观察沉香不同切面的显微特征。
4.丁香 花托中部横切片
(1)表皮细胞l例,外被厚的角质层和气孔。
(2)皮层外侧有2~3层径向排列的椭圆形油室,其周围薄壁细胞的壁较厚。
(3)维管束双韧型,环状排列,维管束外围有木化的厚壁纤维,周围薄壁细胞中含有小簇晶。
(4)通气组织 由薄壁细胞组成,排列疏松,细胞间隙较大形成大气室。
(5)中心轴部为薄壁细胞,其间散列多数细小维管束。
粉末:红棕色,香气浓烈。
(1)油室:椭圆形,多破碎、有的含黄色油状物。
(2)纤维:单个散在梭形、壁厚、微木化
(3)花粉粒众多,极面观三角形、淡黄色,具三孔沟
(4)草酸钙簇晶众多较小,存在于薄壁细胞中
(5)花托表皮细胞多角形,有不定式气孔,副卫细胞5—7个。
(四)理化鉴定:
1.醋酐浓硫酸反应:取人参粉末0.2g,加冰醋酸4ml,水浴加热2分钟,过滤。取滤液置干燥试管中,倾斜试管,小心沿管壁加浓硫酸0.5m1,成二液层,二液交界面呈红棕色。
2.取人参粉末0.5g加乙醇5ml,振摇、过滤,滤液蒸干滴加三氯化锑氯仿饱和溶液,显紫色。
3.取丁香粉末少许于载玻片上,滴加氯仿混匀,加3%氢氧化钠的氯化钠饱和液l滴,加盖玻片镜检,有针状丁香酚钠结晶析出。
四、实验报告
(一)绘人参根横切l/4简图、绘丁香粉末特征图。
(二)记录人参、丁香的理化反应结果。
五、思考题
(一)人参的商品规格主要有哪些?其主要鉴别特征是什么?
(二)人参和三七横切面有什么不同。
(三)国产沉香与进口沉香如何区别。
(四)人参、丁香的主要成分是什么?用何种方法进行鉴别?
(五)三七的性状特征习惯上如何描述。
实验九 当归、川芎、柴胡、白芷、小茴香、马钱子等鉴别
一、目的要求
(一) 掌握当归、川芎、柴胡、小茴香、马钱子的性状显微特征。
(二) 掌握白芷、连翘的主要性状特征。
二、仪器用品、药品:
酒精灯、三角架、试管、滤纸、甲醇、二甲氨基苯甲醛的甲醇溶液(1:30)、磷酸、l%钒酸铵硫酸溶液、浓硝酸。当归、柴胡、川芎、白芷、小茴香、秦皮、连翘、防风、马钱子的药材及饮片。当归、川芎、柴胡、小茴香、马钱子的横切片。当归、柴胡的粉末。
三、实验内容与方法:
(一) 性状鉴定:
1、当归Radix Angelicae Sinnesis:根头及主根粗短,略呈圆柱形,支根扭曲,表面黄棕色,有横向椭圆形皮孔。顶端有残留的叶鞘及茎基,质柔软,断面黄白色或黄棕色,皮部厚,有棕色油点,形成层环棕色,木部色较淡。有浓郁香气,味甘辛微苦。
2、柴胡Radix Bupleuri:根呈圆柱形或圆锥形,常有分枝,表面淡棕色或棕色,近根头部有横皱纹,下部有不规则纵皱纹并有细小支根痕及皮孔,根头部多有残留茎基。质坚韧。断面片状纤维性、皮部淡棕色木质部淡黄白色。气微芳香,味微苦。
3、川芎Rhizoma Chuanxiong:结节状团块,注意隆起的轮节,瘤状根痕,断面颜色和特征,气浓香而特异,味苦辛。
4、小茴香Fructus Foeniculi:药材呈长椭圆形,似稻谷状。表面黄绿至淡黄色,分清柱基和果柄。再取浸泡材料,轻轻将二分果分开,可见各由一细小的分果柄连在果柄上。分果长椭园形,背面具5条纵棱,腹面稍平,用刀将分果横切,可见断面边缘波状,中心为灰白色的胚乳和胚。中果皮内二棱脊间可见棕色油管断面,腹面有2个。气特异,味微甜辛。
5、马钱子Semen strychni:扁园形、扭扣状;表面密生匍匐的银灰色丝状毛茸,自中心向四周放射;底面中心有一稍突起的圆点状种脐,种脐与边缘小突起状种孔间常有一条棱线。纵剖面可见淡黄白色角质肥厚的胚乳。近种孔处子叶两枚,心形,掌状脉5~7条。味极苦,有毒。注意云南马钱与马钱子有何不同。
6、对照讲义观察白芷、秦皮、连翘、防风的性状特征。
(二) 显微鉴别:
1、当归:
取当归横切片,镜下观察:①木栓层4~7列木栓细胞。②皮层:狭窄,细胞切向延长,有时可见多数小型分泌腔。③韧皮部:宽广,多裂隙,有油室散在,外侧较大,向内渐小多为圆形,高倍镜下可见周围分泌细胞。④形成层:明显成环。⑤木质部:导管单个散在或数个相聚,木射线宽。⑥薄壁细胞中含淀粉粒。
粉末 淡黄棕色。(1)纺锤形韧皮薄壁细胞,壁稍厚,表面有斜向交错纹理。有的具菲薄横膈。(2)油室。(3)具缘纹孔导管,螺纹导管。(4)淀粉粒
2、柴胡:取柴胡横切片镜下观察:
木栓层:为7~8列木栓细胞。
皮层:狭窄,可见类圆形油室,油室周围分泌细胞6—8个。
韧皮部:油室较小。
形成层:多成环。
木质部占大部分,具大型导管,老根木纤维聚积成群,排成环状。
3、川芎:川芎根茎横切片置显微镜下,从外到内可见:
木栓层:木栓细胞数列。
皮层:较窄,细胞呈切向延长,散有根迹维管束和类园形油室。
韧皮部:宽广,筛管群散列。
形成层:呈波状或不规则环状。
木质层:导管多角形或类圆形,单列或排成“V”字形,偶具木纤维束。
髓:较大,薄壁组织中散有多数油室。
4、小茴香:取小茴香横切片,镜下观察。
外果皮:一列,为切向延长的扁小细胞。
中果皮:主要为薄壁细胞,注意棱脊处的维管束柱,由两个外韧维管束通过木化的纤维连接而成,韧皮部位于维管束柱两侧,由小型细胞组成,木质部导管,纤维均木化,不易区分。维管束柱周围(内、外侧多见)有大型木化的网纹细胞。棱脊间和腹面可见椭园形油管横切面,共几个?换高倍镜观察油管由20扁平的分泌细胞组成。
内果皮:一列,由长短不一的扁平细胞组成,有的切片仅在腹面明显。
种皮:为一列扁长细胞,结合面中央可见种脊维管束,由细小导管组成。
内胚乳:细胞呈多角形,内含众多细小糊粉粒,其中有草酸钙小簇晶。
有的切片中央可见胚。
5、马钱子:取马钱子横切片、置显微镜下观察:
①种皮:每一个表皮细胞均向外延长,形成单细胞非腺毛,并向一方倾斜,壁极厚,强木化,有纵肋约10条,基部稍膨大,形似石细胞。种皮内层为数列棕色颓废的薄壁细胞。
②胚乳:细胞呈多角形,壁厚,细胞中含有脂肪油滴和少量糊粉粒。
(三) 理化鉴定:
1、马钱子:
取干燥马钱子做径向切片,分别做下列试验。
(1)厚切片加1%硫矾酸试剂l滴,显蓝紫色,胚乳内层明显,(检查番木鳖硷,以胚乳内层含量较高)
(2)厚切片加浓硝酸l滴,显橙红色。胚乳外层较明显(检查马钱子碱,胚乳外层含量较高)。
2、柴胡
取粉末0.5g加乙醇10ml,用力振摇放置30分钟,滤过,取滤液0.5ml加二甲氨基苯甲醛的甲醇溶液(1:30)0.5ml及磷酸2ml,混匀,水浴加热,溶液显淡红色至淡红紫色。(柴胡皂甙)
四、实验报告
(一)绘小茴香横切面简图。
(二)绘北柴胡根横切面1/4简图。
(三)记录马钱子、柴胡理化鉴别结果。
五、思考题
(一)当归含有的主要化学成分是什么,有何性状显微特征?
(二)南柴胡与北柴胡在性状特征方面有可区别?
(三)进口马钱子与国产马钱子在性状显微方面如何区别?
(四)秦皮中含有哪几种化学成分属于哪类,用什么方法进行鉴别?伪品秦皮是什么?如何区别?
实验十 龙胆、薄荷、丹参、黄芩等生药鉴别
一、目的要求
(一)掌握龙胆、薄荷、丹参、黄芩实验观察的各项内容。
二、仪器用品、药品。
临时装片用品、水合氯醛试剂、蒸馏水、镁粉、盐酸、醋酸铅试液、试管、酒精灯、小勺、漏斗、滤纸;薄荷、丹参、黄芩、关龙胆、坚龙胆、香加皮、益母草、夏枯草药材;薄荷茎、叶横切,龙胆、坚龙胆横切,丹参、黄芩根横切片;黄芩粉末。
三、实验内容与方法
(一)性状鉴别
1、龙胆Radix Gentianae:关龙胆 根茎不规则块状,根细长丛生,上部细密横纹理,断面木部色浅;坚龙胆根外皮膜质、易脱落,木部与皮易分离。
2、薄荷:Herba Menthe,茎方柱形,有的对生分枝,表面黄棕色或带紫色、质脆、断面白色、中空、叶多卷曲舒缩,长圆形或卵形,被柔毛,有凹点状腺鳞,茎上部腋生轮伞花序,花冠带紫色,叶搓揉时有特异清凉香气,味辛凉。
3、丹参Radix Salviae Miltiorrhizae:根呈圆柱形或圆锥形,栓皮易剥落、注意外皮颜色,维管束的颜色与排列。
4、黄芩Radix Scutellariae:多为长圆锥形,扭曲不直,外表棕黄色,具明显纵皱及网纹。可见残茎痕或侧根痕。质硬脆,断面黄色。“子芩”内部充实;老根内部暗棕或枯朽称“枯芩”。味极苦。
(二) 显微鉴别
1、龙胆:取龙胆横切片、镜下观察
表皮:1列,有时残存。
皮层:外层细胞壁稍厚,中皮层多裂隙,内皮层细胞切向延长,并由纵向壁分隔成数个小细胞。
韧皮部:宽阔、多裂隙
木质部:导管成束或成“V”字形排列
髓:明显
注意:坚龙胆的鉴别。
2、丹参:取丹参横切片,镜下观察
木栓层:4~6列,可见落皮层。
皮层:宽广。
韧皮部:半月形.,束间形成层不甚明显。
木质部束8~10,放射状,导管近形成层处较多,呈切向排列,渐至中央导管呈单列。中央有否纤维束?
3、黄芩:取黄芩横切片,镜下观察
木栓层:木栓细胞中有石细胞散在,有时木栓层中间夹有皮层死细胞。
皮层:散有多数石细胞和纤维,石细胞多分布于外侧,纤维多分布于内侧。
韧皮部:与皮层界限不明显,由筛管、薄壁细胞组成。
形成层:细胞多皱缩。
木质部:由导管、木纤维及木薄壁细胞组成,导管数个,切向排列。老根中央可见栓化细胞环,单环或数个同心环。无明显的射线。
4、黄芩粉末:先以蒸馏水装片,再以水合氯醛试液透化后装片、镜检下列主要显微特征:
(1)淀粉粒:细小、单粒类球形,复粒少见,由2—3分粒组成。
(2)韧皮纤维:单个或成束、梭形,壁厚、木化、孔沟明显。
(3)石细胞:壁甚厚、孔沟有时分叉、形状?
(4)韧皮薄壁细胞:纺锤形或长园形、壁连珠状增厚。
(5)导管碎片:多为网纹导管,具缘纹孔及环纹导管少见。
(6)纺锤形木薄壁细胞常与导管相伴存在,壁稍厚、有横隔。
5、薄荷:
①叶横切片:上表皮细胞长方形,下表皮细胞较小,具气孔,上下表皮有凹陷,内有大型特异的扁球形腺鳞,可见腺毛和非腺毛,叶异面型,栅栏组织为1—2列细胞,海绵组织4—5列细胞。叶肉细胞中含针簇状结晶。
主脉维管束外韧型、木质部导管常2~6个排列成行,韧皮部外侧与木质部外侧均有厚角组织。
②茎横切片:呈四方形
表皮:为1列长方形细胞,外被角质层,有腺鳞、腺毛、非腺毛
皮层:薄壁细胞数列、四棱角处由厚角细胞组成。
内皮层:明显
韧皮部:狭窄
形成层:成环
木质部:四棱处发达,导管类多角型。
髓薄壁细胞大,中心常空洞。
(三)理化鉴定:
1、取黄芩粉末2g,加乙醇20ml,回流加热15分钟,滤过,取滤液lml,加醋酸铅试液2—3滴,即生成桔黄色沉淀。
2、取黄芩滤液lml,加镁粉少许及盐酸3~4滴,显红色。
四、实验报告
(一) 绘黄芩横切面简图、粉末中韧皮纤维、韧皮薄壁细胞、石细胞图。
(二) 记录黄芩理化鉴定结果。说明反应原理。
实验十一 洋金花、地黄、金银花、天花粉等生药鉴别
一、目的要求
(一) 掌握洋金花、地黄、金银花、天花粉性状,显微及理化特征
二、仪器用品药品
临时装片用具,酒精灯、小勺、分液漏斗、蒸馏水、水合氧醛试液、金银花甲醇冷浸液、氯原酸甲醇(1mg/m1)溶液、乙酸丁酯、甲酸、硅胶H预制板、紫外灯(365nm)、南洋金花、北洋金花、生地黄、熟地黄、金银花、天花粉、玄参、钩藤、巴戟天、栀子药材,洋金花、金银花、天花粉粉末,金银花透化材料。
三、实验内容与方法
(一)性状鉴定
1、金银花Flos Lonicerae:花蕾呈细棒状,表面淡黄至黄棕色,密被短柔毛及腺毛;下部有细小的花萼。花冠二唇形或稍开裂。雄蕊5枚。气清香。味甘微苦。
2、地黄Radix Rehmanniae:多呈不规则的团块或长园形,中间膨大,两端稍细,表面棕黑或棕灰色,极皱缩。质较软而韧,断面棕黑色或乌黑色,有光泽,具粘性。味微甜。
3、洋金花Flos Daturae:取两种洋金花,观察其性状。南洋金花多皱缩成条状,长9~15cm,花萼筒状,长为花冠的2/5,表面微有毛茸,通常已除去。花冠喇叭状,淡黄色,先端5浅裂,裂片有短尖,短尖下有3条明显的纵脉纹。雄蕊5枚,花丝贴生于花冠筒内,雌蕊l枚,柱头棒状。
北洋金花多具花萼,外表灰黄色,有短柔毛,花冠裂片间有三角形突起,气味同南洋金花。
4、天花粉Radix Trichosanthis:纺锤形或块瓣状。去栓皮、断面粉性、黄色小孔放射状排列,纵切面为黄色条纹。
(二)显微鉴定:
1、金银花:先取一朵透化的标本,分别作花冠、雄蕊和雌蕊的整装片,观察其特征:
花冠:外表面密被腺毛和非腺毛。腺毛头部倒圆锥形,顶端平、内含黄棕色分泌物,腺柄为多细胞。偶见头部呈类圆形者。非腺毛执业药师多为单细胞,壁厚、腔小,壁上具小疣状突起,有的具角质螺纹。花冠内表面腺毛较少。基部非腺毛较长,弯曲,壁疣明显。薄壁细胞内含草酸钙小簇晶。
雄蕊:花粉粒类球形,黄色、外壁具短刺及颗粒状雕纹,有的可见到萌发孔。压开的花药可看到花粉囊内层细胞壁上增厚的条状,观察花药边缘可见花粉囊壁外层细胞向外突出呈乳头状,花丝基部有非腺毛。
雌蕊:柱头顶端表皮细胞呈乳头状或绒毛状突起,其下方薄壁细胞内含小簇晶。
挑取金银花末少许,置载玻片上,透化后镜检,并注意与整体装片的异同:
花粉粒:多见。
腺毛:散在,多不完整。
非腺毛:多为单细胞,一种壁厚,略具壁疣或光滑;另一种壁薄,长而弯曲,壁疣明显,多断裂。
花冠外表皮细胞,垂周壁呈不规则弯曲,其间嵌有不定式气孔,付卫细胞5~9个。花的各部碎片均可见到,但一般不做鉴别依据。
2、洋金花:取粉末少量于载玻片上,水合氯醛装片观察:
花粉粒:类球形或长园形、表面条状雕纹
花萼:非腺毛1~3细胞、壁具疣状突起,腺毛头部l~5细胞,柄1~5细胞 花冠:边缘非腺毛l~10细胞,壁微具疣状突起
花丝:基部非腺毛粗大、顶端圆钝。
花萼花冠薄壁细胞中有草酸钙砂晶、方晶、簇晶。
3、天花粉:
淀粉粒:粉末的主体,单粒较少、脐点点状、星状、人字形,大粒层纹明显;复粒由2~14(~18)分粒组成。常有一个大的盔帽形分粒,下端与10多个小分粒复合。
石细胞:单个或数个相接,黄绿色,呈长方形,椭园形,类三角形,有的一端或各边略凸起,少数具短分枝,有一侧较薄。层纹多不明显,孔沟细密,偶有石细胞延长纤维状,有的石细胞与韧皮纤维毗连。
导管:主为具缘纹孔导管,多破碎,偶见网纹导管。
木纤维:多为纤维管胞,较粗,具缘纹孔较稀疏,纹孔口斜裂缝状,少数呈十字形。
韧皮纤维:较细长,纹孔稀少,斜裂缝状,胞腔具横隔。
(三) 理化鉴定
薄层色谱 供试品溶液:金银花粉末0.lg,甲醇1ml,冷浸12h滤过供试。
对照品溶液:绿原酸甲醇液lmg/m1
层析板 羧甲基纤维素纳为粘合剂的硅胶H薄板。
展开剂 醋酸丁酯:甲酸:水:(7:2.5:2.5),取上层,上行展开8cm
显色:紫外光(365nm)
供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置显相同颜色荧光斑点。
四、实验报告
(一) 绘金银花粉末特征图
(二) 绘洋金花粉末特征图
(三) 金银花薄层色谱图,并计算氯原酸的Rf值
五、思考题
(一) 金银花与洋金花的粉末特征有哪些异同点:
(二) 忍冬属植物资源丰富,在考虑其是否可以入药时,可以用什么指标进行判断?
(三) 地黄可作几种生药,炮制的目的是什么?
实验十二桔梗、茵陈、红花、苍术、木香等生药鉴别
一、目的要求
(一) 掌握桔梗、木香、茵陈、红花、苍术、实验观察的各项内容
二、仪器用品、药品:
试管、蒸发皿、酒精灯、三角架、石棉网、滤纸、漏斗;a-萘酚—浓硫酸、烧杯、醋酐、浓硫酸、稀甘油、水合氯醛试剂、无水乙醇。
桔梗、茵陈、红花、藏红花、苍术、白术、木香、党参、南沙参药材。
桔梗、木香、苍术切片。
桔梗、红花粉末。
三、实验内容和方法
(一) 性状鉴定:
1、桔梗Radix Platycodi:注意桔梗形状。表面白色或淡黄白色。有短根茎(芦头),根茎上有数个半月形茎痕(芦碗)。全体具扭曲纵沟。断面有菊花心,具浅棕色环纹(形成层)。质脆,木部较紧密。味微甜后苦。
2、木香Padix Aucklandiae.圆柱形或半圆柱形。表面黄棕至灰棕色,栓皮多除去,具侧根痕。质坚硬,断面有深褐色油室小点散在,具放射状纹理。老根中心多枯朽。具浓郁特异的香气。
3、绵茵陈Herba Artemsiae Scopariae:全株密被毛茸,灰绿色,基生叶为几回羽裂?终裂片形状?
4、红花Flos Carthami:为不带子房的管状花、外色红黄或红色。花冠筒细长,先端5裂、裂片呈狭条形,雄蕊5,花药聚合成筒状,黄白色,柱头长园柱形,顶端微分叉。
注意观察番红花入药部位,性状的差别。
5、苍术Rhizoma Atractylodis:北苍术,不规则块状,多分枝,表面黑棕色,断面纤维性,质较疏松,有黄棕色油点散在。观察茅苍术,白术的药材,比较三者的主要区分点。
6、观察党参、南沙参的性状特征
(二) 显微鉴定:
1、木香横切片,置显微镜下观察:
木栓层:2~6列,其外侧时有残存落皮层。
韧皮部:宽厚、筛管群明显。有较大油室散在
形成层:断续成环。
木质部:导管单个散在或数个相连,木纤维少,近中心处纤维较多。
薄壁细胞中有否菊糖。
2、桔梗:横切片置显微镜下观察:
木栓层:多列、黄棕、偶含草酸钙棱晶。去栓皮者或有残存。
皮层:狭窄,有裂隙,散有乳汁管群。
韧皮部:宽广,乳汁管散在。
形成层:成环。
木质层:导管单个散在或数个相聚,径向排列
注意薄壁细胞中有否菊糖。
取桔梗粉末:
菊糖:众多,呈扇形,多在薄壁细胞中,久置消失,用乙醇装片,菊糖呈不规则团块,久置不消失。
乳汁管:联结呈网状。
导管:梯纹、网纹及具缘纹孔状。
木薄壁细胞:长方形,末端壁微波状弯曲。
3、红花:取红花粉末,水合氯醛试液装片镜检,可见下列特征:
花粉粒:深黄色,圆球形或长球形,外壁有短刺及疣状雕纹。具三个萌发孔。
分泌管:由分泌细胞单列纵向连接而成,细胞内充满黄色至红棕色分泌物。
花冠顶端细胞:分化成乳头状毛。
柱头表皮细胞:分化成圆锥形单细胞毛,末端较尖。
花粉囊内壁细胞:细胞壁条状增厚。
草酸钙结晶:方形或长方柱形。
4、取苍术横切片置显微镜下观察:
木栓层:多层细胞,夹有石细胞环带,环带由2~3层石细胞集成。
皮层:散有大型油室。
韧皮部:较窄
形成层:成环
木质部:纤维群和导管群相间排列
射线、髓部:均有油室散在。薄壁细胞可见细小草纹钙针晶。
北苍术横切面:皮层有纤维束。木质部纤维束较大。
(三) 理化鉴别:
1、桔梗粉末少量置载玻片上,加a—萘酚—浓硫酸试液2滴,显紫堇色
2、取桔梗粉末约0.2g,加醋酐2m1,水浴加热2分钟,过滤。;滤液1ml置干燥试管中,沿壁加入浓硫酸lml,接触面呈红棕色环,上层呈蓝色至绿色。
四、实验报告
(一) 绘木香横切面简图,绘桔梗粉末特征图。
(二) 记录桔梗、理化鉴定结果。
五、思考题:
(一) 木香横切面有哪些鉴别特征?
(二) 哪些生药薄壁细胞中含有菊糖?
(三) 苍术、白术横切面特征。
(四) 桔梗和南沙参外形相似如何性状上加以区别。
实验十三 麦冬、知母、砂仁、半夏、天麻等生药的鉴别
一、目的要求:
(一) 掌握知母、半夏、天麻、麦冬、砂仁的性状,显微特征和半夏的理化定性反应。
(二) 掌握川贝、浙贝、天南星、莪术的商品规格和性状鉴别特征。
(三) 了解知母的定性反应。
二、仪器用品、药品:
具塞试管、三角架、酒精灯、蒸发皿、试管、烧杯、吸管、吸水纸、小勺、5%HCI、5%NaOH、95%乙醇、蒸溜水、50%乙醇、0.2%茚三酮试剂。
知母生理盐水提取液,兔红细胞生理盐水悬浮液。
知母、天南星、松贝、炉贝、青贝、浙贝、莪术、天麻及伪品、半夏、水半夏、砂仁、麦冬。
知母粗粉、半夏粉末、粉末。
横切片:知母、半夏、天麻、麦冬、砂仁、山麦冬。
三、实验内容与方法:
(一) 性状鉴定:
1、知母Rhizonm Anemarrhenae:毛知母长条状,顶端有何特征?上面有何特征?环节排列紧密,残留黄棕色叶基,下面有何特征?断面何色?中部是否散布浅黄色小点?光知母与毛知母有何不同?
2、半夏Rhizoma Pinellie:块茎呈类球形或稍偏斜。表现黄白色。顶端稍平,中心有凹窝,中间有芽痕和叶痕;周围密布棕色凹点(须根痕),下端钝圆,较光滑。质坚,断面粉性。味辛辣而麻舌,有毒,法半夏、姜半夏与生半夏比较有何不同?水半夏与半夏有何区别?
3、天麻Rhzoma Gastrodiae:天麻块茎呈扁园形,冬麻一端有红棕色干枯芽胞(习称鹦哥嘴或红小辫),春麻有残留茎基。表面可见多轮点状环纹,另一端有自母麻脱落留下的园形疤痕。断面平坦,角质样。冬麻实满为优,春麻中空为次。
常见伪品:
紫茉莉根:紫茉莉科植物紫茉莉Mirabilis jalapa的干燥根。长园锥形,无环节,有纵皱纹和凹陷的细根痕,断面有数个黄白色同心性环纹,嚼之有刺喉感。
芭蕉芋:美人蕉科植物芭蕉芋Canna odulis的干燥根茎,卵园形或长椭园形,外表常见白色粉霜,顶端残留茎基,除去外皮者,露出纤维,断面角质样,可见点状维管束散在,嚼之粘牙。
大理菊根:菊科植物大理菊Dahliapinnata的干燥块根,纺锤形。有宽纵沟。体轻、断面纤维性,有木心或中空。
羊角天麻菊科植物羽裂解甲草Cacaliatangutica的干燥根茎。纺锤形,两端尖,有明显的环节(习称玉带缠腰),散有点状凸起的须根痕。断面多中空。
4、川贝母:Bulbus Fritillariae Cirrhosae
松贝:形状和颜色如何?二鳞片大小悬殊,相互抱合,称怀中抱月。顶部闭合。底部平,微凹。
青贝:二鳞片大小相近,顶端多开口,中心包着心芽和小鳞叶。
炉贝:和青贝比较有何异同?突出特征是什么?
浙贝母:分为几种规格,注意其特征。
5、麦冬Radix Ophiopogois:块根多呈纺锤形。黄白色或浅黄色。半透明,质柔韧,干后硬脆。断面角质,中央有细小中柱。味微甘,嚼之发粘。
6、天南星:Rhizoma Arisaematis:块茎扁球形,顶面较平坦,中心浅凹,周围有麻点状须根痕、粉性、刺喉麻舌。
7、莪术:Rhizoma Curcumae:注意根茎形状、表面有无环节和点状根痕,质硬、皮部木部易分离,用放大镜观察散在的维管束和棕色油点。
8、砂仁Fructus Amormi:阳春砂果实椭圆形或卵圆形(壳砂)。具不明显的三钝棱。红棕色或棕褐色,密生柔软短刺状突起,果皮薄,易纵裂。剥开果皮可见园形或长园形种子团(砂仁),三瓣,每瓣有种子6~15粒,排列紧密。种子呈不规则多面体,外被膜质的假种皮。外露面平坦,有细皱纹。小心剥下一粒种子,用放大镜观察,内侧较小端可见凹陷的种脐,侧面种脊成一纵沟,合点在较大的一端。气芳香,味辛凉,微苦。
附:缩砂:为缩砂ArranonumXanthioides Wall的干燥果实及种子团;又名西砂仁。果皮表面密具片刺状突起。种子团较园,外被一层白粉霜。气味稍淡。
砂仁的混淆品及伪品:
艳山姜Alpinia zerumbot的果实:卵园形、色黄或棕,皮厚无刺纵棱线突起,种子团易松散,种子外被白膜质假种皮。
山姜Alpimia japonica的果实,又称福建土砂仁、果皮橙黄色,被短柔毛,种子团瘦小,卵园形,三棱不明显,每瓣有种子3~8枚,质硬。
华山姜:Alpinia chinensis的果实,类球形,黄色或红棕色,光滑,种子团类球形,每瓣有种子1—3粒,排成一列,种子具细皱纹,但不成网状。
光叶云南草蔻:Alpinia blephayxk Schum varglabrior干燥果实。果实类球形,无刺,有三条稍突起的纵棱线,薄而脆。种子团类球形,由白色隔膜分戒三瓣,种子呈锥状四面体,粘结紧密,背面稍隆起,合点约在中央,种脐为一凹点,在背侧面种脊为一纵沟,经腹面而至合点。质硬。气香。
(二) 显微鉴别:
1、知母
栓化皮层:由20~30余层不规则的和扁平的栓化细胞组成,其间散有少数叶迹维管束。
皮层:多为圆形或椭园形的薄壁细胞。内皮层不明显。偶见叶迹维管束。
中柱:中柱鞘处常有横走的根迹维管束,中间散在多数外韧型维管束,其外周细胞壁稍厚,微木化,形成维管束鞘。薄壁细胞间有多数大型的粘液细胞,内含草酸钙针晶束,在维管束周围的薄壁细胞中常含草酸钙柱状结晶,多碎断。
2、半夏横切面:外侧细胞不规则多破裂,含淀粉粒极少,向内细胞完整,淀粉粒渐增多,细胞间散在较大类圆形的粘液细胞,内含草酸钙针晶束。维管束,为外韧型或周木型,纵横散布。
3、天麻横切片:
表皮:有时残存,成为外皮层组织,淡棕色。
下皮层:2~3列,略呈切向延长,细胞壁增厚栓化,可见稍疏的壁孔
皮层:数列多角形细胞,有的可见针晶束。
中柱:周韧型或外韧型维管束散在,粘液细胞含针晶束,薄壁细胞或见团块状物(多糖类物质)。
4、麦冬:取麦冬块根横切片,置显微镜下观察,自外向内可见:
表皮:一列薄壁细胞(多萎缩、脱落)。
根被:3~5列木化细胞,有的可见壁孔。
皮层:为多层大型薄壁细胞,含有针晶束的粘液细胞多见。内皮层细胞壁均匀加厚,通道细胞对着木质部束。内皮层外为1列石细胞,其内壁和侧壁增厚。
中柱鞘:紧接内皮层,为1~2列薄壁细胞。
维管束:辐射型维管束,韧皮部束16~22个,各位于木质部束的弧角处,木质部由木化组织连结成环。
髓:由类园形薄壁细胞组成。
附:山麦冬(土麦冬)Liripe spicata的块根,药材似麦冬,但表面粗糙,色泽差,断面中柱甚细、纤维性较强。
横切片:内皮层外侧石细胞少数散在,各木质部束之间为非木化的薄壁组织。
5、砂仁:取阳春砂种子横切片置镜下观察
假种皮:长方形薄壁细胞,壁不甚清楚。
种皮:表皮细胞一列,径向延长,壁较厚,排列整齐,外被厚的角质层。下皮细胞一列,细胞切向延长,充满棕色物。油细胞一列,切向延长,壁薄。色素细胞层为2~3列多边形含色素的薄壁细胞。内种皮为一列径向延长的石细胞。内侧壁极厚,胞腔内含硅质块。
外胚乳:细胞略呈园柱形。辐射状排列,含淀粉粒。
内胚乳:细胞多角形、不规则。
胚:居于内胚乳的中央,由小多角形细胞组成,内含糊粉粒及油状物。
(三)理化鉴定:知母根茎中主要含甾体皂甙,其主要鉴别方法如下:
溶血试验:取兔红细胞悬浮液l~2滴于载玻片上,做成临时装片,置显微镜下观察,可见许多淡黄色,圆形或椭圆形的细胞,找到后从盖玻片一侧边缘滴加1~2滴知母皂苷生理盐水提取液,可在另一侧用吸水纸接触液体,迅速观察视野中红细胞的溶解情况。
泡沫试验:取知母粉末2g加95%乙醇8m1,约20分钟后取上清液4ml,置蒸发皿中蒸干。残渣加水4ml溶解,分置二试管中,一试管加5%NaOH 2m1,另一试管加5%HCl 2m1,用力振摇一分钟后,放置片刻观察,加碱试管泡沫的高度应为加酸试管的数倍。
半夏定性反应:取粉末lg,以50%乙醇10m1浸半小时,滤过,滤液浓缩至2ml,加0.2%茚三酮试剂、煮沸数分钟,显蓝紫色。
四、实验报告:
(一) 绘天麻根茎横切面简图。
(二) 记述知母理化反应结果。
(三) 绘麦冬横切面简图。
五、思考题:
(一) 如何用理化方法鉴别含皂苷的中药?
(二) 半夏的商品几种?主要性状及应用时有何区别?如何与水半夏区别?
(三) 天麻的主要性状特征是什么?常见哪几种伪品?
(四) 传统使用的川贝母有几种商品规格?注意其特征。
(五) 麦冬与山麦冬显微鉴别要点是什么?
实验十四 动物矿物类生药
一、目的要求:
二、仪器、用品、药品
酒精灯、金属环、石棉网、三角架、试管夹、吸管、试管、水合氯醛、蒸馏水、石油醚、硫酸(比重1.77)、对二甲氨基苯甲醛硫酸液。
斑蝥、麝香、朱砂、蟾酥、全蝎、龟甲、蛤蚧、鹿茸、羚羊角、牛黄、生石膏、朱砂、雄黄、芒硝等药材和饮片。
斑蝥粗粉、石膏粗粉、麝香粉末。
三、实验内容与方法
(一) 性状鉴定:
1、斑蝥Mylabris:南方大斑蝥,成虫体较大,头略呈三角形,黑色。复眼大。触角鞭状(多脱落),末端数节膨大,末节基部较前节细。背部有革质鞘翅一对,可见三条明显的淡棕色横纹。鞘翅下有两片棕褐色膜质的后翅。胸腹部黑色。胸部有足三对,腹部呈环节状。有特殊的臭气,刺激性强,不可口尝。黄黑小斑蝥形体小。触角末节基部与第十节等宽。鞘翅黄色斑纹上具黄色短毛。
2、麝香Moschus:
毛壳麝香:扁园形或椭园形囊状体,残存密或稀疏的短毛、白色或灰棕色,从周围向囊口伏生,中央有一小孔(囊孔)皮膜棕褐色,剖开后,内含颗粒状、粉末状的香仁和少量细毛及脱落的内皮层膜(习称银皮)。
麝香仁:野生者质柔,油润、疏松。其中颗粒状者习称“当门子”,表面紫黑色,油润光亮,断面深棕色,粉末状者棕褐色或黄棕色,有少量脱落的内层皮膜和细毛。饲养者,呈颗粒状,短条形或不规则团块,紫黑色或深棕色,并有少量毛和脱落的内层皮膜。香气浓烈而特异。伪品麝香与正品的性状有何不同?
3、朱砂Onnabaris:
呈大小不一的块片状、颗粒状或粉末状。鲜红色,具金刚光泽,半透明。质重而脆。
朱宝砂:呈细小颗粒状或粉末状,色红鲜亮,触之不染手。
镜面砂:呈不规则板片状,斜方面或长方形,大小厚薄不一。边缘一整齐,色红而鲜艳,光亮如镜面而半透明,质较松脆。
豆瓣砂:块较大,方圆形或多角形,颜色发暗或呈灰褐色,质重而坚。
4、石膏Gyposum Fibrosum:长块状,板块状或不规则块状,类白色,常附有青灰色或灰黄色片状杂质。有的半透明体重、质松软,手捻能碎,易纵向断裂,纵断面具有纤维样纹理和丝样光泽。横断面平滑,味淡。
5、蟾酥Venenum Bufonis团蟾酥多呈扁园形,黑褐色,不透明,角质,较脆,无臭,舌尖尝之有麻舌刺激感;片蟾酥的形态、颜色、外部特征同团蟾酥有何不同。
6、羚羊角Cornu Saigae Tataricae长园柱状、弓形弯曲;嫩者光润如玉,有血丝,老枝有细纵裂纹;下部有10—20个手握合适的隆起环脊;注意横断面骨塞的边缘,上部无骨塞部分对光观察有“通天眼”直达尖端;质硬、镑片白色透明,具丝状波曲的细纹。
7、鹿茸Cornu Cervi Pantotrichum“二杠茸”外皮红棕色,表面密生红黄色细茸毛,锯口黄白色,外围无骨质,中部密布细孔。“三岔茸”下部多有纵棱线及瘤状突起,茸毛较稀。
8、参照讲义观察全蝎、蛤蚧、龟甲、鳖甲、牛黄、芒硝、赭石、雄黄等药材。
(二) 显微鉴定
取麝香粉末用水合氯醛装片观察
分泌物团块:由多数颗粒状物聚集而成,黄色、淡黄棕色或棕色,包埋或有方形八面体或簇状的半透明结晶。
油滴:类圆形,散在或存在于团块中。
表面组织碎块,无色或淡黄色,半透明有多条纵纹。
(三) 理化鉴定
1.、斑蝥:
取斑蝥粗粉少许,进行微量升华,镜下观察升华物,可见无色透明的柱形或棱形斑蝥素结晶。并作下述试验。
将升华物用石油醚洗2~3次,加硫酸2~3滴,微热,转入试管内,小火加热至发生气泡,稍冷,加二甲氨基甲醛硫酸溶液l滴,显樱红色或紫红色。
2、生石膏:取生石膏粗粉约2g,放入干燥试管中,用塞子塞住管口,于酒精灯上灼烧,管壁上有水珠凝结,同时石膏变的不透明。为什么?
四、实验报告
(一) 绘麝香显微特征图
(二) 记述斑蝥理化鉴定反应。
五、思考题
(一) 麝香的商品规格和性状鉴别特征是什么?
(二) 什么是二杠茸、三岔茸、单门、莲花?
(三) 羚羊角的性状鉴别特征有哪些?
(四) 朱砂、石膏、麝香、斑蝥的化学成分是什么?
实验十五 中成药的显微鉴定
我国目前所用的中成药、大部分由生药的粉末制成。由于品种多、故鉴定其中组成时如采用理化鉴定方法,可因各类成份的交叉而专属性不强而难以达到鉴定目的。但其显微特征则各生药均不相同,因此,用粉末显微特征作为依据,加以鉴定,是一种简便可行的定性方法。
在鉴定时,取样方法因剂型而异:
1、散剂:挑取少量粉末装片。
2、水丸或片、锭、切开后在剖面中部和刮取粉末或用研体将丸、片等研碎、挑取少量装片,如有朱砂包衣、也可将丸衣及丸心分别制片。
装片的方法同生药粉末,以蒸馏水装片观察淀粉粒,用水合氯醛试液不加热装片观察菊糖,透化装片观察其它组织。
一、目的要求:
掌握中药成药显微鉴定的方法。
二、仪器用品、药品
水合氯醛液,蒸馏水、临时装片用具,镊子,酒精灯,党参、白术、茯苓、甘草、猪苓、泽泻、肉桂细粉;
四君子丸:党参、白术、茯苓、甘草(2:2 :2:1)水丸。
五苓散:茯苓、猪苓、白术、泽泻、肉桂(3:3;3:5:2)粉剂。
三、实验内容与方法:
(一)取各单味药材粉末制成临时装片,镜检后,制定该药的显微鉴定标准。
(二)取四君子丸按上述方法装片,镜检、观察下列特征:
1.菌丝无色或棕色;不规则分枝状菌丝团块(茯苓)。
2.纤维束周围薄壁细胞中含草酸钙方晶,形成晶鞘纤维(甘草)。
3.草酸钙针晶细小,不规则地充塞于薄壁细胞中(白术)。
4.乳管碎片,或含颗粒状物(党参)。
(三)取五苓散少量,装片镜检,观察下列特征:
1.菌丝无色或淡棕色,菌丝团不规则分枝状。(茯苓)。
2.草酸钙方晶,正八面体形,菌丝粘成团。(猪苓)。
3.石细胞类园形成类方形,壁一面菲薄(肉桂)。
4.草酸钙针晶细小,不规则地充塞于薄壁细胞中(白术)。
5.薄壁细胞类园形,有椭园形纹孔,集成纹孔域(泽泻)。
四、实验报告:
绘图示明显中成药镜检所见特征。
五、思考题
(一)二妙丸由苍术、黄柏(1 : 1)组成,你能写出其中各味药的鉴定特征吗?
(二)逍遥丸由柴胡、当归、白术、白芍、茯苓、甘草、薄荷(1:l:1:l:l:0.8:0.2)组成,你能写出其中各味药的鉴定特征吗?
实验十六 生药的综合鉴定
一、目的要求
初步了解生药鉴定的程序和方法,练习书写中药鉴定报告。
二、实验报告
写出所给药材的综合鉴定报告书。
附录一
显微绘图法
在显微鉴定和研究工作中,对于观察到的物象除了应作文字记录外,也应描绘其图形,以供日后查询和核对之用。因为图形能更好地表示实物的形态特征,有助于文字叙述的不足。
显微绘图的方法主要有徒手绘图简法、网格绘图法、利用显微描绘器的绘图法和投映绘图法等四种。现在常用的徒手绘图法及描绘器的绘图法简介如下。
一、徒手绘图简法:
欲将所观察的物象记录下来,可采用最简单的按比例绘制的绘图法。将图纸放在显微镜的右侧,用左眼观察内物象,右眼注视图纸,用绘图铅笔(2H或3H)轻轻描绘物象的轮廓和内部结构注意按比例画,以免失真。审查图稿,详加修改,最后用削尖的绘图铅笔(2H或3H)描绘,要求线条均匀、清晰.切勿涂抹。
画在绘图纸上的布局,亦应适当安排,如图的内容复杂,图形要求画得大一些,一张绘图纸上就只画一图,可将图安排在绘图纸的中央,略偏左侧,右侧以便注字;如图的内容较为简单,一张绘图纸上可以安排两个画,图形可略画小些。
注字要求平行画横线向右侧引出,所注名称应上下列齐,不要斜线交叉,要求画图均匀整齐。每个图的下面,应注明图的名称和放大倍数。
二、利用显微描绘器的绘图法:
显微描绘器是利用两组光学系统配合,将显徽镜中的物象和图画的象迭合,同时送到观察者眼中,以利准确描绘的装置。
显微描绘器的式样很多,着重对阿培式描绘器加以说明。
(一)阿培式描绘器的结构和使用
阿培描绘器由棱座杆和套环以及带长柄的平面镜组成。
使用方法:
1.将目镜从镜筒中取出,装上描绘器,用左面的螺丝轻轻夹紧,将棱镜座杆翻到后面,再将目镜插入镜筒。
2.将反光镜杆从右侧插入描绘器的孔中,注意将孔中的销子和杆上的口对准,推到底。
3.转动反光镜,使镜轴上的刻线和连接块上的刻线对齐。
4.调节显微镜使成象清晰。
5.将棱镜杆翻至前面,调节燕尾使其尽可能靠近目镜,此时即可同时看到物体和旁边的纸张。
注意事项:
1.调节物体视野与绘图纸上的亮度相等是极其重要的。
2.当物体视野较亮时,可缩小聚光镜光栏,或转动显微镜底部的反光镜,以减少反射光强或用台灯来增加纸上的照明。
3.当物体视野较暗,并且无法再增加物体的照明时可选取适当的滤色片装上。以减少纸上反射而透过棱镜的光强。
装在目镜上方的棱镜是一块立方形玻璃斜向切割成两块直角棱镜合成,棱镜ABC的接合 面AB上镀银,仅中央留有一个圆形小孔,显微镜中的物象通过这个小孔进入观察者的眼中,而画面的象则经面镜反射到棱镜ABC的镀银面AB上,再经反射而进入观察者眼中。因此,观察者可同时看到显微镜中的物象和图面的象互相叠合在一起。
(二)图形放大倍数的计算和调整;
如上安装好描绘器后,把台微尺的刻度线画在纸上(一般画大格线,倍数很高时画小格
线),用直尺测量刻度线的间距,除以台微尺刻度线间的实际距离,即得图形的放大倍数。如纸面大格线间距=10mm,则放大倍数=10÷0.1=100,余类推,有人把显微镜的放大倍数当作图形的放大倍数,这是错误的。放大倍数以用整齐的数字为宜,如500、400等.如计算出来的放大倍数不为整齐数字,如235,则可伸缩镜筒或调节绘图纸面的高低,使放大倍数变为整齐数字。
阿培式描绘器的光学系统如图:
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(三)描绘方法:
先把目的物(如细胞、淀粉粒)的轮廓描出来,再把较明显的特征如放大的纹孔或较粗的层 纹等描出。当描绘一个视野容纳不下的大形或长形物象时,可以先描绘完一个视野,然后微微移动标本片,再描绘连续的邵分。需要注意的是,移动前要确定2~3个明显的标志,以免在移动后物象与图象不能衔接;移动时标片和图纸要平行移动,每次移动距离不宜超过2/3个视野。
(四)草图的加工:
利用显微描绘器描好的草图中,有些张条可能不够完整圆滑或精确衔接,有些细节由于在 描绘器中看不清楚而未能描出,所以在草图描好后,还要卸豫描绘器,仔细观察显傲镜中的物
象并和图形核对,作进一步的加工,补充必要的细节,如细胞壁上的纹孔和层纹等,特别要注意细胞壁的厚度是否准确。在进行图形的加工补充时,可用削尖的铅笔用重笔勾划,但不必擦掉原来画的线条。
附录2
显微测量法
鉴定药材时,经常要测量某些物体的大小、如细胞,毛茸、淀粉粒、结晶等的长度和宽度。这就需要采用显微长度测量的方法。显徼长度测量需要用两种标尺,镜台测微尺和目镜测微尺。
一、镜台测微尺(载台测微尺):简称台微尺,它的外形和载玻片相似,中央部分印有一条微细的标尺,标尺全长1mm分10大格,每一大格又分成10小格,因此每小格的长度是0.01mm即10μ。标尺的外围有一黑色的小圆环,以便在显微镜下寻找标尺的位置。标尺上面往往附有一个圆形的盖玻片以资保护。也有的标尺10大格中仅第一大格分成10小格的。还有的标尺全长2mm分成20大格,其中仅第一大格分成10小格的。(图一)。
镜台测微尺是显微长度测量的标准,它并不直接用来测量物体的长度,而是用来校正目镜测微尺和其它有关的测量工具的,它的质量好坏对各种显微测量以及显微绘画放大倍率的计算等都有很大的关系。因此,应选择刻度线条纤细、均匀而清晰的,长度准确性可靠的进行核对。
二、目镜测微尺:简称目微尺,它是放在目镜内的标尺,是一个圆形的小玻片,形状和圆形的盖玻片相似而较厚,一面印有标尺,标尺的长度通常是1cm,分为100小格;也有全长5mm分为50小格的。使用时,拧开目镜的上透镜,把目微尺轻轻地放在目镜中部的环形光阑上,须注意使用时刻度的一面朝下,这样在观察时标尺的数字才不会是反的。(图二)。
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三、校正:目镜测微尺是用来直接测量物体的长度的,但是它的刻度所代表的长度,是依显微镜的放大倍数而改变的。因此,在使用前必须用台微尺来校正,以确定在使用此显微镜及特定的止镜物镜和镜筒长度时,目微尺上每一小格所代表的实际长度。校正的方法是将目微尺放入目镜内,插入境筒,必要时转动目镜上透镜,至能清楚地看到标尺为止,再将台微尺放在镜台上,用低倍镜找到台微尺的刻度并适当调焦到能同时看清目微尺和台微尺的刻度。转动目镜使两种标尺相互平行。再移动台微尺,使位于目微尺的稍下方,并使两种标尺的一端刻线互相对齐并重叠,然后观察并记录台微尺的另一端与目微尺另一端那一根刻度对其并重叠,数一数两者对其后各自的个数并计算。图三例如:
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假设在用6×目镜和10×物镜,镜筒不伸长时,目微尺和台微尺对齐后,看到台微尺100小格=目微尺60小格,又知台微尺100小格=1000μ,侧目微尺一小格所代表的长度(校正值)=1000÷60=16.7μ。
如使用40×物镜,其余不变,此时由于放大倍数的增加,视野缩小,只能看到台微尺的一部分。对齐后看到目微尺100小格=台微尺38小格即380μ,此种情况下目微尺一小格所代表的长度(校正值)=380μ÷100=3.8μ。
进行校正时,如果一根标尺的末端刻线与另一根标尺的刻线不对齐重叠,可改变镜筒长度 使之对齐重叠。如筒长不能改变,则可在标尺末端刻线附近寻找另一对互相重叠的刻线,如前记录并计算。
四、实物长度的测量:将准备测量的标本放在镜台上,用校正时所用的目镜和物镜来观察,然后转动目镜使其中测微尺的刻度叠在目的物上,观察该物共长若干格乘校正值即得目的物的实际长度。例如:采用前述的6×目镜,40×物镜,镜筒不伸长时,目微尺每一小格的校正值是3.8μ。测量目的物长26小格,测目的物长度=3.8μ×26=98.8μ。小数点以后四舍五入得个整数即可。
测定实物时,应尽量使用高倍目镜及物镜,此时目微尺每一小时格所代表的长度值较小,测量误差亦较小。只有在测量高倍物镜视野中容纳不下的物体时,才使用低倍镜。
附录三
组织透化法
中草药的组织构造,常因细胞内含有多量的内含物、色素或因细胞皱缩而看不清楚,须用适当的试剂处理。以溶解、除去或使细胞内含物变为透明,或使色素氧化退色,以及使细胞膨胀而透明以利观察。这种试剂称组织透化剂,常用透化剂主要有两类:
(一)稀甘油:能浸润渗入细胞壁或其内含物中,由于它们的折射率比水高,因而起到使组织透化的作用。
(二)水合氯醛溶液:为最常用的透化剂,能迅速渗入组织,使干燥而收缩的细胞重新膨胀,并能溶解多数细胞内含物如淀粉、蛋白质、叶绿素、挥发油、树脂等,而使细胞组织变得通明、清晰。
水合氯醛溶液制透化标本片:
方法l:将需透化观察的材料放在载玻片上,加水合氯醛溶液l~2滴,加盖玻片,在小火焰上缓缓加热,火焰高度1cm为宜,不超过2cm,加热时用手拿住载玻片一端的两侧,保持载玻片的水平状态,在火焰上缓缓地左右移动,保持透化液微沸腾状态并随着透化液蒸发随时由盖玻片一侧补充液体(此时应注意勿使火力过猛,以免液体突然汽化而使盖玻片崩落、破碎)。加热约1分钟左右可放置待凉后在显微镜下检查,若透化不完全,可再反复加热,直至材料透明。
方法2:为避免盖玻片崩落。透化时也可不加盖玻片。于材料上滴加水合氯醛溶液后,同上法用手拿住载玻片在小火焰上缓缓加热,此时因水合氯醛蒸发快,必须随时补加液体或蒸馏水,以免析出结晶,直至材料透明,放冷,盖上盖玻片,再行观察。
若材料较大,且厚,如叶片、萼片、花瓣等用上法不能使材料完全透明时,可剪取所需材料8mm见方小块放在试管中,加透化液2~3ml,在沸腾的水浴中加热约15~20分钟,至材料呈现透明时,将材料小心取出放载玻片上,切成小块,加透化液盖上盖玻片即可观察。
附录四
常用试剂及配置方法
(一)化学成分定性反应试剂
1、5%α-萘酚试剂
α-萘酚5g,加乙醇100ml溶解,如不澄清,可过滤,装棕色瓶备用;
2、费林(Fehling)试剂
甲液:6.92g硫酸铜结晶、溶于100ml水中。
乙液:34.6g酒石酸钾钠的结晶、10g氢氧化钠共溶于100ml水中,贮藏于带橡皮塞的试剂瓶中。
使用时取甲、乙二液等量混合。
3、10%盐酸 盐酸27ml,加蒸馏水使成100ml。
4、10%氧氧化钠 氢氧化钠10g,加蒸馏水使成100ml。
5、苦味酸钠试纸 取滤纸条浸入苦味酸饱和水溶液中,浸透后取出晾干,再浸入10%碳酸钠水溶液中,迅速取出,晾干即得。
6、普鲁土蓝试剂
(1)10%氢氧化钾试液 氢氧化钾6.5g,加蒸馏水使成100ml。
(2)10%硫酸亚铁水溶液 取硫酸亚铁结晶8g。加新沸过的冷蒸馏水使成250ml。应临用时新鲜配制。
(3)10%盐酸溶液。
(4)5%三氯化铁溶液 三氯化铁5g,加适量的蒸馏水使溶解成100ml。
7、1%三氯化铁试剂 三氯化铁1g,加蒸馏水使溶解成100ml。
8、1%氢氧化钠试液 氢氧化钠1g,加蒸馏水使成100ml。
9、1%醋酸镁甲醇液 醋酸镁1g,加甲醇100ml。
10、1%三氯化铝乙醇液 三氯化铝1g,溶解于100ml乙醇中。
11、0.9%氯化钠溶液 氯化钠0.09g,加水100ml。
12、1.8%氯化钠溶液 氯化钠1.8g,加水100ml。
13、2%红细胞生理盐水混悬液 兔血10ml,放在盛有玻璃珠的三角烧瓶中,振摇10分钟,除去纤维蛋白,把脱纤维血倒在离心管中,加生理盐水混匀后,离心,使血细胞下沉,反复2~3次,至生理盐水不再显红色,取以上红细胞2ml,加生理盐水100ml,稀释成2%的红细胞混悬液(本液须置冰相保存,存期2~3天)。
14、0.15%三氯化铁-冰醋酸溶液 1%三氯化铁溶液0.5ml,加冰醋酸100ml。
15、醋酸铅试液 取醋酸铅9.5g,加新煮沸过的冷蒸馏水使成100ml。
16、碱式醋酸铅试液 取一氧化铅14g,加水100ml研成糊状,用水10ml洗入玻璃瓶中加醋酸铅溶液(醋酸铅22g,加蒸馏水70ml制成)70ml,用力振摇5分钟后,时时振摇,放置7天,滤过,加新沸过的冷蒸馏水,使成100ml。
17、稀醋酸 冰醋酸18ml加水稀释至300ml。
18、2%3,5-二硝基苯甲酸试液(Kedde,试剂)。1ml2%3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液,3ml 4%氢氧化钠(钾)乙醇液及7ml蒸馏水混匀。临用时配制。
19、1mol/L盐酸羟胺甲醇液 盐酸羟胺6.95g,加甲醇100ml。(新鲜配制)
20、1.1mol/L氢氧化钾甲醇试液 取6.2g氢氧化钾溶于l00ml甲醇中即得。
21、1%三氯化铁乙醇液 三氯化铁lg,加乙醇使溶解成100ml。
22、1%盐酸溶液 盐酸2.7ml,加蒸馏水使成100ml。
23、碘化铋钾试剂(Drogondorff试剂)
甲液:次硝酸铋0.85g,溶解于蒸馏水40ml、冰醋酸l0ml的混合液中。
乙液:碘化钾8g,溶解于20ml水中(分别贮于棕色瓶内)。
作沉淀试剂:使用前将甲、a,l~i液等量混合。
作喷雾试剂:甲、乙液各5ml与醋酸20ml及水100ml混合。
24、碘化汞钾试剂(Magner试剂) 二氯化汞3.4g,溶解于150ml水中;碘化钾12.5g,溶解于25ml水中,然后将两液混和摇匀,再加水稀释至250ml。
25、碘化钾碘试剂(Wagner试剂) 碘化钾1.5g,碘0.5g,溶解于25ml水中。
26、硅钨酸试剂(Bertrad试剂) 硅钨酸钠5g,溶于l00ml水中,加盐酸少量至pH2左右。
27、磷钼酸试剂(Sonnenschein试剂) 磷钼酸钠10g溶于l00ml乙醇中。
28、氯化钠-明胶溶液 氯化钠10g,明胶1g加水使溶解成100ml。
29、饱和溴水试剂 溴水2~3ml,置于用凡土林涂塞的棕色玻璃瓶中,加水100ml使成饱和溶液。置暗处保存。
30、饱和石灰水 取生石灰,加水振摇使成饱和溶液,放置,取上清液。
31、0.2%茚三酮试剂 茚三酮0.2g,加乙醇溶解成100ml。
32、0.5%硫酸铜试液 硫酸铜0.5g,加水使溶解成100ml。
33、1%氢氧化胺试液 氢氧化胺2ml,加水200ml。
34、1%香荚蓝醛试液 香荚蓝醛lg,加浓硫酸100ml。
35、亚硝酸汞试液 取汞lml(重13.6g),小心溶于9ml浓硝酸(比重1.5g)中,全部溶解后加水10ml。
36、氨制氧化铜试液 硫酸铜10g,加水100ml,溶解后加NaOH溶液适量使有氢氧化铜沉淀产生,过滤后沉淀用冷水洗净,再滴加数滴至洗液不再显硫酸盐反应,将沉淀用少量氨试液溶解即得。
37、1%羧甲基纤维素钠溶液 取lg羧甲基纤维素钠,加蒸馏水100ml,温热使之溶解,放置,取上清液备用。
(二)显微制片及显微化学反应试剂
1、水合氯醛试剂 水合氯醛50g,加蒸馏水15ml、甘油10ml使溶解。
2、稀甘油 取甘油33ml,加蒸馏水100ml,再加樟脑少许或液化苯酚l滴,即得。
3、甘油酒精液 甘油与50%乙醇等量混合。
4、斯氏液(甘油-醋酸液) 水、甘油及36%醋酸等量混合。
5、间苯三酚试液 间苯三酚1g,加95%乙醇100ml。(本液应置玻璃塞瓶内,暗处保存)
6、苏丹Ⅲ溶液 苏丹Ⅲ 0.1g,加95%乙醇50ml。
7、稀碘液 0.5g碘化钾溶于少量水中,加入1g碘,溶解后加水至100ml。
8、FAA固定液(福尔马林-醋酸-酒精混合液)取50%~70%乙醇90ml,福尔马林(36%~40%)5ml,冰醋酸5ml,混合即得。
9、番红染色液 取番红1g,溶于100ml50%乙醇中,即得。
10、固绿染色液 取固绿0.5g,溶于100ml95%乙醇,即得。
附录五
石蜡切片法
一、取材与固定:将新鲜材料切成适当大小,一般以不超过0.5~1mm3为宜。材料切好后,立即投入固定液中,固定的目的是使植物组织很快被杀死,以保持其生科学研究时状态。
固定的时间须视材料而定,常用的固定液为F.A.A固定液。干燥材料不需要固定,可用水或甘油浸软后,切成小块即行脱水。
二、冲洗:材料经固定后,必须充分除去固定液,可以流动冲洗或以清水换洗数次,使固定液全部除净。
三、脱水:一般用乙醇脱水,每次调换乙醇浓度的时间视材料而定,材料坚硬者,每隔3小时为宜。乙醇浓度通常为10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%(二次)。
四、透明:二甲苯为透明剂。一般将二甲苯用无水乙醇配成25%、50%、75%的浓度至纯二甲苯,2~3小时更换一次,至材料透明为止。
五、浸蜡:材料脱水至二甲苯时,可加少量石蜡;以后再逐渐增加熔融石蜡至全部为石蜡浸透止,此操作须在熔蜡炉或恒温箱中进行,一般温度以较石蜡溶点高2~4℃为宜,约3小时调蜡一次。
六、包埋:将烧融石蜡倒在小纸盒(或气埋模子)内,立即将已浸透石蜡的材料放在纸盒中央排列好位置,待石蜡渐泠凝成块状,或石蜡表面冷凝时,即抽入水中,使其迅速冷却成硬块。
七、切片:将包埋的石蜡块切成四方形或略长方形,材料在中央,其四周边距离相等而平整,将下端用蜡粘于金属固定器或木块上使之牢固。夹木块于旋转切片机上,另将刀装妥,并夹紧,然后刀口与蜡块接近,再调节厚度(一般为10~5μm),切片,将切下的蜡片,置于切片盘中。
八、贴片:取蛋白粘贴剂少许,置于洁净的玻片上,均匀涂沫后,加蒸馏水一滴,将蜡片的光滑面置于玻片上,移至烘片台上,待蜡片伸展平直后,倒去多余的水,烘干。
九、溶蜡:将烘干的玻片置于二甲苯中,溶去石蜡,数分钟后,移入二甲苯与无水乙醇的等量混合液中,再移入无水醇中,各需数分钟。
十、染色:材料复水至与染色液浓度相等时可染色,常用番红——亮绿染色,染色时间须视染色液和材料而定,染色过程在染色缸中进行。
十一、脱水与封藏:依次加乙醇、无水乙醇、二甲苯脱水至切片透明清晰为止。然后加加拿大树胶1~2滴于切片上,小心盖上盖玻片。在载玻片左方贴上标签,注明切片名称,切面和日期即可。
附1:F.A.A固定液的配置
50%或70%乙醇 90ml
冰醋酸 5ml
40%甲醛5ml
附2:蛋白粘剂的配制
新鲜鸡蛋白 25ml
甘油 25ml
水杨酸钠0.5g