实验四 有机磷农药的检验
【目的要求】
1．掌握有机磷农药的提取净化和检验方法。
2．掌握根据有机磷农药结构的特点进行定性分析。
【实验内容】
一、检材采取
如系口服中毒，可取呕吐物，胃内容，剩余饮食物，血液、肝脏等。
如系呼吸道吸人中毒，可取血液、肺、肝等。
如系皮肤，粘膜接触中毒的，应取接触部位的局部组织，血和肝脏。
二、检材的提取
取死者胃内容物2~5克，置乳钵中，少量多次地加人无水硫酸钠研磨至干沙状后，移于150ml碘量瓶中，加人二氯甲烷20ml，振荡浸提l0min，残渣再用二氯甲烷20ml 重复提取一次，过滤合并滤液，滤液于60℃水浴上浓缩至2毫升，或在K·D浓缩器上减压浓缩至2ml。
经上述方法提取的有机磷，如果杂质比较少，即可用于检验，如果杂质较多，则需进一步净化。
三、净化
取直径2厘米，长30厘米的层析柱一支，底部放一团脱脂棉，管内加人2厘米厚的无水硫酸钠，然后填人氧化铝混合吸附剂（活性炭2克，硅藻土4克，氧化铝4克混合而成)最上层再加无水硫酸钠2厘米，加满二氯甲烷后，打开下面水止，待二氯甲烷流至柱顶端水平时，将上面所提取的浓缩液5毫升加人，打开水止待流至柱顶端水平时，再用100毫升二氯甲烷淋洗（柱流出速度控制在5m1/分)，收集二氯甲烷淋洗液置K·D浓缩器另一个蒸馏瓶中于60℃水浴上减压浓缩至10毫升，留作下面的试验用。
四、显色反应
（1)间苯二酚——氢氧化钠反应（灵敏度1~5微克)
敌百虫，敌敌畏和二溴磷水解后生成二氯乙醛，在碱性情况下与间苯二酚缩合生成红色化合物。
试剂：
5％间苯二酚乙醇溶液
5%氢氧化钠溶液
操作：
取检液一滴于滤纸上，稍干，加间苯二酚醇溶液和氢氧化钠溶液各1滴，在酒精灯上微烤片刻，如有敌百虫、敌敌畏或二溴磷，即显红色。
水合氯醛有同样作用，如将操作改在试管中进行，氢氧化钠溶液改用饱和碳酸钠溶液，则水合氯配合呈黄红色，敌百虫等仍为红色。
(2)偶氮色素反应（灵敏度1:500,000)
有机磷农药中的硝基苯基，经还原可变为苯胺基，苯胺基可经重氮化生成重氮盐，重氮盐再与酚或芳香胺类偶合生成偶氮色素，1605、甲基1605、杀螟松等均有作用。
试剂：
10％盐酸溶液
锌粉
乙醇
0.25％亚硝酸钠溶液
2.5%氨基磺酸铵（或2.5%脲素)溶液
碱性乙萘酚溶液：0.5克乙萘酚溶于50毫升10%氢氧化钠中。
0.5%N萘基乙二胺盐酸盐溶液
操作
取检材提取的浓缩液约3-4滴于试管中，加乙醇液2~3毫升稀释，加锌粉0.1克。10%盐酸1毫升于水浴中加热使检液充分还原至基本上无色，取出放冷，用滴管吸取清液于另一试管中，加0.25％亚硝酸钠1~2滴，振摇，放置1~2分钟，再加2.5％氨基磺酸铵4~5www.lindalemus.com/sanji/滴，振摇，以除去过剩的亚硝酸，待无气泡发生后，将试液分倒在二个小瓷皿中，分别加入乙萘酚和萘基乙二胺试剂数滴，如有1605等有机磷农药则分别显橙一红色或红一紫红色。
〔说明〕
1．本反应的关键一是要还原好，二是过剩的亚硝酸要除尽，尤其是用萘基乙二胺时，亚硝酸盐要除尽，否则空白也可能出现微弱的红紫色。
2．1605还原后的重氮盐与萘基乙二胺偶合，需在酸性溶液中进行，偶合时，如酸度不够，则可能导致阴性，此时，再加数滴10％盐酸即可。
P—S— |
RO |
RO |
O(S) |
有机磷农药中凡有 结构的，在碱性水溶液中易水解生成硫
化物，与亚硝酰铁氰化钠作用，生成紫红色络合物。
Na2S+Na2〔Fe(CN)5NO〕→Na4〔Fe(CN)5NOS〕
试剂：
10%氢氧化钠
1%亚硝酰铁氰化钠溶液（新配)
操作：
取检材浓缩液3~4滴于试管中加入乙醇1~2毫升稀释，加蒸馏水1毫升，加10%氢氧化钠0.5毫升，在沸水浴中加热10分钟，取出放冷，滴加1％亚硝酰铁氰化钠溶液3~4滴，如有1059、3911、1240、4049、乐果等有机磷农药即显紫红色，但很快消失。
五、薄层层析法：
吸附剂：硅胶G或硅胶GF254
展开剂：
① 环己烷：氯仿＝1:1
② 苯：醋酸乙酯＝www.lindalemus.com/kuaiji/9:1
③ 苯：石油醚：丙酮＝7:2:1
④ 苯：环己烷＝4:1
⑤ 环己烷：丙酮＝4:1
显色方法：
1．溴酚蓝—醋酸法（灵敏度1~5ug)
2．间苯二酚—氢氧化钠法（灵敏度1~5ug)
试剂：
1)溴酚蓝试剂：0.1g溴酚蓝溶于10ml 丙酮中，再用1％硝酸银丙酮水溶液（丙酮：水＝1:3)稀释至l00ml
2)5%醋酸溶液
3)1%间苯二酚醇液
4)5%氢氧化钠溶液
操作及结果：
（一)含硫类有机磷农药的检验：
将检液及标准样品点于一薄层板上，同法点另一块薄层板，然后分别在两种展开剂中展开后，稍晾干，喷溴酚蓝至板上呈现均匀蓝色，置60℃烘箱中加热5~10分钟，再喷5％醋酸溶液至背景为浅黄色，含硫有机磷即呈蓝色斑，有机磷含量大时，斑点中心呈黄色，外圈呈蓝色，测定Rf值同标样比较即可判定为何种有机磷。
（二)非含硫类有机磷农药的检验：
将检液及标准DDVP标准液点于同一薄层板上，同法点另一块薄层板，然后分别在环己烷：氯仿（1:1)及苯：醋酸乙酯（9:1)两种展开剂中展开后稍晾干，即喷间苯二酚—氢氧化钠试剂稍加热。敌敌畏、敌百虫及二溴磷等有机磷农药显红色斑点，背景无色或污绿色，其他有机磷不显色，氯醛、水合氯醛同样显色。
