氨在肝性脑病发病机制中的作用
实验性质：综合性
实验学时：4学时
实验分组、人数：共分为5组，其中甲兔3组、乙兔2组；4~5人/组 。
（一)实验目的（原理)
1. 观察血氨增高对中枢神经系统的毒性作用有哪些。
2. 验证肝脏对氨具有解毒作用。
3. 启发、引导同学思考血氨增高对呼吸系统及酸碱平衡的影响，并探讨三者之间的关系。培养同学应用已学过的知识进行横向联系和综合分析能力。
（二)实验材料
1. 实验动物：成年家兔，雌雄不拘
2. 实验仪器：微机BL420-E生物记录系统、722分光光度计或酶标仪或血气酸碱分析仪、婴儿称
3. 实验用药：1%普鲁卡因，1%肝素（1250单位/ml)，复方氯化铵溶液，复方谷氨酸钠溶液，生理盐水。
4. 器械：图固定台1个，搪瓷圆盆1个，兔急性手术器械一套（止血钳10把，手术刀1把，剪毛剪刀、组织剪刀、剪线剪刀、眼科剪刀各一把，镊子4把，气管插管1个，小圆针2个)，动脉夹2个，连接三通的动脉插管1个，Y型气管插管1个，空心橡胶/或塑料导管1根， 粗棉线1根，缝合线1轴，5ml、 l0ml、50ml注射器各一个。
（三)实验方法
1.对甲兔进行肝脏大部分结扎，肠腔内注入复方氯化铵溶液。
(1) 将家兔称重后仰卧位固定于兔台上。
(2)以1%普鲁卡因进行局部浸润麻醉，行颈部正中切口（由甲状软骨向下逐层切开颈部皮肤、皮下组织、肌肉，切口长度约5 cm)，分离气管、颈总动脉。插入Y型气管插管；由耳缘静脉注入肝素溶液（1250 单位/公斤)，插入动脉插管。
(3) 以1%普鲁卡因进行局部浸润麻醉，行上腹部正中切口，从胸骨体与剑突的交界处起，长约8cm。左手按压肝膈面，剪断肝与横膈之间的镰状韧带，再将肝叶上翻，使肝脏的左外叶、左中叶、方形叶和右中叶(注意右中叶上附有胆囊)完全游离。然后以右手食、中指夹持粗棉线沿肝左外叶、左中叶、方形叶和右中叶之根部绕一周，并结扎以阻断血流。如果上述肝叶变为暗褐色，证明肝脏大部分结扎成功。由于供应右外叶及尾状叶之门脉血管为独立分支，不会同时被结扎，因而得以保留。
(4)沿胃幽门找出十二指肠，在肠系膜的对侧肠壁表面进行浆肌层荷包缝合，然后用眼科剪在肠壁作一个全层小切口，将细胶管沿肠壁插入肠腔内约5cm（注意：指向空肠的方向，而不要指向胃的方向)，荷包缝合固定，将导管的另一端移到腹腔外，然后用止血钳夹住腹壁切口边缘，关闭腹腔。观察动物呼吸、角膜反射、从动脉插管放血并测定血气的变化，作为对照。
(5)每隔五分钟向十二指肠插管中注入2.5%复方NH4Cl混合液5ml(注意注射量要准)。观察动物呼吸、角膜反射、抽搐及痉挛发生所需的时间，再次从动脉插管放血并测定血气的变化。计算所用复方氯化铵混合液的总量和每公斤体重的用量。
(6)自耳缘静脉推注标准复方谷氨酸钠溶液，直至症状缓解(用量约20~30ml/kg)，并可继续观察，病情再度恶化乃至死亡之可能性。
计算症状出现后的存活时间。并将上述各项指标与乙兔的各项结果相比较。
2、乙兔除不结扎肝脏和不进行实验性治疗外，其余方法步骤同甲兔。
（四)实验注意事项
1. 本实验手术操作及观察指标较多，实验者要明确分工各负其责，以保证前后结果的可靠性。
2. 牵拉肝脏及胃肠时，动作宜轻柔，避免过度刺激。
3. 剪镰伏韧带时，慎防刺破横膈。游离肝脏时动作宜轻巧，以免肝叶破裂出血。结扎线应扎于肝叶根部避免勒破肝叶。
4. 手术操作时要注意及时止血，以防失血过多。
5. 复方氯化铵溶液的配执业兽医方
氯化铵25g, 碳酸氢钠15g, 以5%葡萄糖溶液稀释至1000ml。
6. 复方谷氨酸钠溶液的配方
谷氨酸钠25g, 碳酸氢钠15g, 以5%葡萄糖溶液稀释至1000ml。
（五)思考题
1. 肝脏是如何对氨进行解毒的？
2. 氨对中枢神经系统的毒性作用有哪些？
3. 招生简章血氨增高对呼吸中枢的影响有哪些？最易引起那种类型的酸碱平衡紊乱？该种类型的酸碱平衡紊乱对机体的影响如何？
张 敏
2007-5-5
