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中药学论文不同浓度地塞米松对腭胚突间充质细胞作用规律
腭裂动物模型是研究先天性腭裂发病机理的主要手段。通常采用将致畸剂注入正常孕鼠母体内诱导胎鼠产生腭裂，建立腭裂动物模型。本课题组从上世纪90 年代即开始通过对地塞米松诱导的腭裂动物模型进行发病机理的系列研究。以往的研究主要采用孕鼠腹腔注射地塞米松的方式进行胎鼠畸形的诱导和组织切片观察。为了进一步阐明地塞米松诱导腭裂畸形的具体生物学机制，在细胞水平上进行研究已成为必然。然而，要在细胞水平研究地塞米松的作用机理，需要找到一个适宜的浓度，既能发挥地塞米松的致畸作用，又不能产生过强的毒性而导致细胞大量坏死，以保证实验顺利进行。本研究旨在观测不同浓度地塞米松对EPM 细胞生长的作用规律，选择出适宜的地塞米松浓度，为在细胞水平研究地塞米松的致畸作用机理奠定实验基础。
1 材料和方法
1.1 材料DMEM/F12（1：1)细胞培养基（Hyclone，美国)；DispaseII 酶（Sigma，美国)；胰蛋白酶；青霉素；链霉素；乙二胺四乙酸（EDTA)（Sigma，美国)；胎牛血清（Fetal bovineserum FBS)（Hyclone，美国)；地塞米松（dexamethasone，Dex)（Solarbio)；3-（4，5- 二甲基噻唑-2 ) -2 ，5- 二苯基四氮唑溴盐（3－（4 ， 5dimethythiazol-2-yl ) -2 ，5-diphenyterazolium Pomide，MTT)（Sigma，美国)、二甲基亚砜（Dimethylsulphoxide，DMSO)（Sigma，美国)；碘化丙啶（Propidium lodide，PI)（Sigma，美国)。倒置相差显微镜（Olympus LX50，日本)；二氧化碳恒温孵箱（SANYO MCO-17AI，日本)；酶联免疫检测仪（Microplate Reader Model 550，Bio-Rad，美国)；体视显微镜（OLYMPUS，日本)。
1.2 小鼠腭胚突间充质细胞的体外培养与观察将 GD12.5 天的C57BL/6J 小鼠断颈处死，无菌条件下取出胚胎，按照肖[3]的方法获取腭胚突间充质单细胞悬液。以5×105 个/瓶接种到75ml 培养瓶中，以及2×104 个/ml 密度接种于6 孔板中盖玻片上。将培养瓶移至二氧化碳恒温孵箱培养。待EPM 细胞铺满盖玻片的80%左右时，进行HE 染色以及采用SP 法免疫组织化学染色，运用Vimentin， CK 单克隆抗体鉴定EPM 细胞特异性抗原表达。脱水，透明，封片，显微镜下观察结果。
