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研究不同浓度地塞米松对腭胚突间充质细胞作用规律

来源:本站原创 更新:2013-5-28 论文投稿平台

2.3 地塞米松对腭胚突间充质细胞的抑制率图像结果表明 Dex 浓度为1×10-6mol/l 组抑制率明显较其他组高。各组在第3 天时抑制率分别达到一个峰值,过后随着时间延长,抑制率逐渐降低。

2.4 不同浓度地塞米松对腭胚突间充质细胞凋亡影响的PI 染色Dex 浓度为1×10-6mol/l 组通过PI 染色后,荧光显示,整个视野几乎50%以上的均为凋亡细胞和死细胞,这些细胞整个收缩为圆形,发红发亮,其余细胞亮度低,形态较为正常,胞内核有轻微着红色(图4)。浓度为1×10-7mol/l,1×10-8mol/l 组视野中凋亡细胞和死细胞约占总数的40%左右(图5,6)。浓度为1×10-9mol/l 组约有20%~30%的为凋亡细胞和死细胞,其余绝大多数的细胞着色浅(图7)。未加药对照组该类细胞约占总数的10%左右,并且总体上对照组的着色都比加药组要浅,亮度也较低,大多数细胞都只有核轻微着色,胞内核数目清晰可见。

3 讨论

有研究发现,在小鼠腭突发育过程中给予大剂量的地塞米松,可抑制腭胚突生长并导致腭裂,这可能是因为影响了细胞的正常代谢[4-5]。但地塞米松作用的作用规律尚不明了。本研究观察了不同浓度地塞米松对离体腭胚突间充质细胞的量-效关系及时效关系,发现:

第1、2 天,每个实验组EPM 细胞OD 值增高,与对照组有差异( P<0.05),说明Dex 已经发生药效。但各相邻浓度组OD 值组间差值很小,各组变化趋势尚不明显,曲线较平缓,各浓度梯度间没有统计学差异(P>0.05)。此时不同浓度药物的作用差异还没有显现出来。

但第3 天各浓度组间差距开始显现。差值最小0.008,最大为0.032,与对照组相比差值更为显着。第4、5 天曲线又趋于平缓,各组OD 值增加缓慢。这些现象说明,第3 天达到了Dex药物作用的最高峰,第4、5 天随着药物的代谢,其对细胞生长的抑制作用逐渐减小。随着时间的延长,各浓度组生长曲线与对照组相似,但增殖活跃度明显较对照组差。这说明选择的这四个Dex 浓度对于EPM 细胞的正常生长产生了影响,阻碍其正常增殖,达到了预期的地塞米松的药理作用,是符合实验要求的有效浓度。说明第3 天既是EPM 细胞增殖最活跃的时间,也是Dex 药效最大的时间。医.学.全.在.线www.lindalemus.com

地塞米松的量-效关系及时-效关系还表现为,第1 天各浓度梯度组与对照组相比均有统计学意义;第2、3、4 天前三个浓度组有统计学意义;第5 天只有前两组与对照组有统计学意义。而所有5 天中Dex 浓度为1×10-6mol/l 组与对照组均有差别(P<0.01),这说明这个浓度对于EPM 细胞增殖的药理作用最为持久、有效。通过对腭胚突间充质细胞凋亡的PI荧光染色发现,浓度为1×10-9mol/l 组仅有20%~30%的为凋亡细胞和死细胞,浓度为1×10-6mol/l 组通则有50%的细胞凋亡,地塞米松对腭胚突间充质细胞作用的有效性更加明显,而该浓度作用下的存活的腭胚突间充质细胞又能在第4、5 天后快速增殖并接近其他组细胞的增殖水平。本实验显示:地塞米松浓度为1×10-6mol/l 时,既能在一定程度上抑制EPM 细胞的生长,便于观察的地塞米松药理作用,又不会导致离体的腭胚突间充质细胞的大量死亡,保证细胞良好的增殖能力。说明这一浓度可以作为在细胞水平研究地塞米松致畸的生物学机制的参考浓度。

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