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全科医学论文微血栓致缺血性心肌病发病机制的研究
1 材料和方法：
1.1 动物
雄性 SD 大鼠90 只体重 (250±30) g，购于哈尔滨医科大学附属第二临床医学院动物中心。实验动物及实验步均按照合国家实验动物管理条列执行。
1.2 试剂与器材
月桂酸钠 (Sigma，L9755 )，大鼠可溶性血栓调节蛋白（soluble thrombomdulin，sTM)ELISA 试剂盒(美国R&D)，中性甲醛固定液(南京化学试剂公司生产)，戊二醛（湖北新景新材料有限公司) Motec Digital Microscope 成像分析系统 (德国 Motec )，透射电子显微镜(日本JEOL )，超声仪 (GE Vivid7 )，L550 离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司)。医.学全.在.线网站www.lindalemus.com
1.3 实验分组
90 只大鼠随机分成3 组：模型组30 只，假手术组30 只和正常对照组30 只，各组中随机选择12 只进行超声检测，另于术后1、7、28 天每组各选6 只进行组织学检查。
1.4 实验方法
SD 大鼠，10%水合氯醛（0.35ml/100g)腹腔内注射麻醉，常规备皮，气管插管连接呼吸机，右侧卧位固定，于左前外侧第三肋间开胸，逐层剥离进入胸腔，分离主动脉并用血管夹夹闭主动脉后，迅速以微量注射器从主动脉根部注射月桂酸钠(1μg/g)，夹闭20s，松开血管夹，待呼吸心跳稳定后逐层关胸，拔除气管插管，术毕腹腔注射80 万单位青霉素并于术后连续抗炎3 日，普通饲养。假手术组给予同等剂量的生理盐水替代月桂酸钠进行冠脉内注射，正常对照组不进行任何处理，余均同模型组。各组于术后1、7、28 天，分别取6 只鼠处死，取材进行指标检测。
1.5 检测指标
1.5.1 病理组织学检测：
按照时间点取鼠处死，开胸，取出心脏，修剪去除心耳及主要大血管，中性甲醛固定，石蜡包埋。取左室乳头肌段心肌，连续切片，将组织切成4μm 厚的切片。每只鼠随机取两张切片进行HE 以染色观察微血栓的形成。微血栓指在小于150μm 的微血管中，由血小板、纤维素或/和红细胞组成，HE 染色呈粉红色，单纯的红细胞堆积认为是血管中残留的血液，HE 染色呈点样深红色[7]。同时取两张切片进行马休黄－酸性品红－苯胺蓝（改良Lendrum法)染色，观察冠脉微血管原位栓塞组成成分，纤维素呈鲜红色，肌纤维呈红色，细胞核呈蓝褐色，胶原纤维呈蓝色，红细胞呈黄色，陈旧的纤维素成紫蓝色。
