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护理论文小议抗ErbB2嵌合抗体chA21聚集现象
1 引言
目前在抗肿瘤的药物治疗方案中，基因工程抗体以其高特异性和低副作用的特点越来越受到重视。但是作为大分子蛋白的抗体在生产和保存过程中经常有聚集现象的发生，不同抗体聚集情况有所差别。研究表明，抗体聚集的性质有可逆的和不可逆的，聚集部位可位于可变区或恒定区，聚集的程度与抗体本身特性和所处溶液条件密切相关。聚集可能会对抗体的活性和稳定性有所影响，甚至使免疫原性增高，目前已成为抗体药物开发的一大挑战。本实验室研制的嵌合抗体hA21 是将抗肿瘤相关抗原ErbB2 的单链抗体（sFv)与人抗体F 段融合而成（sFv-F)，并在HO 细胞中成功以双价形式表达。实验表明，hA21 具有抑制高表达ErbB2 的乳腺癌和卵巢癌细胞生长的作用，目前已建立了适应大规模生产与纯化的工艺体系，具有潜在的临床应用前景。本文采取液相色谱等方法对hA21 出现的聚集现象进行了分析，并结合抗体本身结构特点对引起聚集的部位和原因进行了初步探索。
2 材料与方法
2.1 材料
2.1.1 嵌合抗体hA21
表达hA21 的HO 细胞为本实验室构建，将细胞表达上清收集并经过ProteinA 亲和层析和SP 离子交换层析两步纯化后保存在0.02 mol/L（pH 5.5，含0.2 mol/L Nal)的醋酸钠缓冲液中，经SDS-PAGE 测定纯度可达95%以上。
2.1.2 仪器
高压液相分析系统为Agilent 公司产品, S300 分子筛层析柱为Phenomenex 公司产品, 动态光散射仪为DynaPro 公司产品, 圆二色谱仪为Jaso 公司产品, Protein A 亲和柱以及Superdex G75 10/30 纯化柱为Amersham 公司产品。
2.1.3 主要试剂蛋
白分子量标准购自Promega 公司，高表达ErbB2 的T6-17 细胞裂解液和不表达ErbB2的3T3 细胞裂解液为本实验室保留，96 孔酶标板购自Nun 公司医.学.全.在.线www.lindalemus.com，HRP 标记的羊抗人多抗和木瓜蛋白酶购自Piere 公司，显色底物OPD 购自AMRESO 公司，甘露醇（200 mg/mL)注射液购自丰原药业，所有化学试剂均为国产分析纯。2.2 方法
2.2.1 高效排阻色谱(HPSE)鉴定hA21 聚集现象将两步纯化后的抗体浓度调整至1 mg/mL，并用0.45 μm 的滤膜过滤，取30 μL 样品用HPSE S300 进行分析。流动相为0.05 mol/L 的pH 7.0 的磷酸钠缓冲液，含0.3 mol/L的Nal，监测波长为280 nm，流速为0.5 mL/min。
2.2.2 动态光散射（DLS)鉴定hA21 聚集现象
将两步纯化后的抗体浓度调整至3 mg/mL 并用0.45 μm 的滤膜过滤，取12 μL 加入样品池。仪器温度设为20，激光波长约824 nm，照射角度为90?，样品加入稳定20 min后开始测量，测定结果取20 个有效数据进行分析。
