 |
 |
2.2 标准储备溶液的配制
标准储备溶液的配制：精密称取5-HMF对照品12.5 mg，置25 ml容量瓶中，加水溶解并稀释置至刻度，摇匀，使成0.5 mg/ml的标准储备液，备用。 2.3 系统适用性试验
取5-HMF标准储备溶液10 μl，注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，根据保留时间tR和半高峰宽（W1/2h)计算色谱柱的理论板数。理论塔板数n=5.54(tR/W1/2h)2以5-HMF计算，n=14 029。
2.4 标准曲线的制备
精密量取5-HMF 标准溶液0.2 ml、1 ml、2 ml、3 ml、4 ml分别置于100 ml容量瓶中，加水分别制成1 μg/ml、5 μg/ml、10 μg/ml、15 μg/ml、20 μg/ml的溶液。按上述色谱条件进行测定，记录峰面积。以峰面积均值A对其浓度C线性回归，得到回归方程A=4100.91+53467.52C,（r=0.9999,n＝5)。结果表明，5-HMF在浓度1 μg/ml～20 μg/ml的范围内线性良好。
2.5 检测限的确定
检测限是指试样中被样检测物能被测出的最低量。检测方法为信噪比法，即：将低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能检测出的最低浓度或量。一般以信噪比为3：1或2：1时相应浓度或注入仪器的量确定检测限。精密称取5-HMF10 mg，以流动相稀释至50 ml，制备成浓度200 μg/ml的高浓度溶液，再分别稀释制成20 μg/ml和40 μg/ml的溶液。取三种样品各10 μl注入高效液相色谱仪中，信噪比符合3：1或2：1的样品浓度即为5-HMF的检测限。
2.6 精密度试验
取5-HMF标准储备液配制成5 μg/ml的溶液，重复进样5次，测定5-HMF面积积分值，代入标准曲线计算浓度，并计算出RSD＝0.22 %。
2.7 稳定性试验
由于采用本品注射液直接进样，因此方法学研究中无需考虑本项内容。
2.8 重复性试验
取同一批样品，重复测定5次，RSD＝0.76 %。
