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引言
c-myc基因是myc癌基因家族中最重要的一员，它与细胞周期、增殖、分化、凋亡以及肿瘤发生发展等密切相关，目前已经成为肿瘤分子机制研究领域中的热点.近年来，许多学者对该基因在宫颈癌、肝细胞癌、胃癌、何杰金氏淋巴瘤等肿瘤中的表达及作用进行研究，但对该基因在外阴白斑和外阴鳞癌中表达的研究甚少.我们采用c-myc单克隆抗体(mAb)，对外阴白斑及外阴鳞癌进行了免疫组化检测，并探讨了该基因蛋白表达与外阴白斑及外阴鳞癌的关系医.学.全.在.线www.med126.com.
1 材料和方法
1.1 材料
西安市3家医院1982/2000年病理诊断确诊的外阴白斑71例，根据1976年国际外阴疾病年会(ISSVD)制定的标准[1] 命名，其中外阴白斑增生型23例，硬化萎缩型21例，混合型17例，不典型增生型10例.外阴鳞癌21例，根据WHO标准进行病理诊断与分级，其中Ⅰ级9例，Ⅱ级7例，Ⅲ级5例.另设正常对照组20例，标本取自门诊手术室良性病变手术切缘胸腹部正常皮肤.
1.2 方法
标本经100mL?L-1 中性甲醛溶液固定24h，常规石蜡包埋，连续切片5μm厚，玻片用APES胶处理.免疫组化试剂c-myc mAb(9E10)，HIGH-SABC试剂盒(SA1080)，DAB(ED1022)均购自武汉博士德生物工程有限公司.操作步骤:常规脱蜡至水;蒸馏水新鲜配制3mL?L-1 H2 O2 ，室温10min以灭活内源性酶;微波抗原修复20min;滴加抗原修复液I，室温20min后;滴加正常山羊血清封闭液，室温20min;滴加一抗单克隆抗体c-myc工作液，置湿盒中4℃过夜;滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37℃20min;滴加试剂HIGH-SABC，37℃20min;DAB室温显色，镜下控制反应时间，及时终止;苏木精复染，乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片.镜下观察:免疫组化阳性信号为棕黄色颗粒，阴性为无颗粒或可疑者.每次试验均设对照实验:阳性对照:用已知c-myc阳性的切片重复染色;空白对照:用PBS代替第一抗体;替代对照:用正常鼠血清代替的抗体.统计方法为χ2 连续校正检验.
2 结果
2.1 c┐myc基因蛋白细胞定位和分布特点
c-myc基因蛋白在正常组织中呈表皮弥漫性或散在分布，以细胞核阳性为主，细胞质阳性散在分布(Fig1);外阴白斑增生型呈表皮全层分布，以细胞质阳性为主，细胞核阳性散在分布，为粗细不一的棕黄色颗粒而且染色较深(Fig2，3);外阴白斑硬化萎缩型和混合型主要分布在基底层，棘层也有散在分布，以细胞质阳性为主(Fig4);不典型增生组织和鳞癌组织中主要分布在间变和癌变的细胞质内，呈局灶性或弥漫性分布(Fig5，6).
2.2 c┐myc基因蛋白表达
正常组织、外阴白斑及外阴鳞癌中均有c-myc蛋白阳性表达，而阳性率各不相同(Tab1).各组与鳞癌组相比较，正常组(χ2 =11.027)、增生组(χ2 =5.692)、硬化萎缩组(χ2 =16.488)和混合组(χ2 =6.497)均有显著差别(P<0.05)，不典型增生组(χ2 =1.072)无显著差别(P>0.05);各组与硬化萎缩组相比，正常组(χ2 =0.847)和混合组(χ2 =3.412)无显著差别(P>0.05)，增生组(χ2 =5.361)和不典型增生组(χ2 =7.682)有显著差别(P<0.05).不同组织分级的外阴鳞癌中c-myc 基因蛋白的表达阳性率也不相同(Tab2).
表1 外阴白斑和外阴鳞癌中c-myc基因蛋白的表达(略)
Tab1 c-myc gene protein expression in genitalia leukoplakia and squamous cell carcinoma of vulva
表2 不同组织分级的外阴鳞癌中c-myc基因蛋白的表达(略)
Tab2 c-myc gene protein expression in squamous cell carci-noma of vulva of different histology grades
3 讨论
