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分别取pRNATSurvivin组、阴性对照组、空白对照组的对数生长期细胞接种于96孔培养板内，每孔加入细胞1×104个，24 h后加入含抗癌药物的完全培养基,分别加入5FU(美国Sigma公司，1、4、8 μg/mL)或优福定(广州市振康医药有限公司，1、4、8 μg/mL) ,每组设3个复孔,继续作用24 h,每孔加入20 μL MTT(5 mg/mL)继续培养4 h,弃去培养液,加入DMSO 150 μL,酶标仪测定570 nm处吸光度(A)值。根据3孔平均A值计算细胞生长抑制率(%) = (1-A实验组/A对照组)×100%医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
1.5 统计学方法
使用SPSS 11.5软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差(x±s)表示，组间比较采用方差分析，P<0.05为有统计学意义。2 结果
2.1 Survivin siRNA转染HEP2细胞后对Survivin mRNA表达的影响
pRNATSurvivin组309 bp处的条带亮度显著低于其余各组(图1)，pRNATSurvivin组在24、48、72 h mRNA表达抑制率分别为67.15%、75.13%和75.43%，与空白对照组比较有显著性差异(P<0.01)，且其抑制作用随处理时间延长而呈增长趋势。
2.2 Survivin siRNA转染HEP2细胞后对Survivin蛋白表达的影响
pRNATSurvivin组转染24、48、72 h后Survivin表达抑制率分别为63.15%、77.76%、79.27%，与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01，图2)。
2.3 Survivin siRNA对HEP2细胞药物敏感性的影响
pRNATSurvivin转染HEP2细胞后不同浓度的5FU和优福定的生长抑制率明显高于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)，而空白对照组和阴性对照组的生长抑制率差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。表1 MTT法检测Survivin siRNA对HEP2喉癌细胞药物敏感性的影响
3 讨论
化疗在喉癌的综合治疗中占有重要地位,多药耐药是影响治疗效果的主要原因之一[3-4]。如何克服肿瘤化疗耐药性是值得深入研究的课题。研究表明,化学药物所致细胞毒作用的终末效应均为诱导细胞凋亡[5],抗肿瘤药物的疗效主要取决于其激活细胞凋亡的能力[6],由于肿瘤细胞常存在凋亡信号转导途径缺陷,导致许多肿瘤对化疗药物产生耐受[5]。因此,通过活化凋亡信号关键分子而促进细胞凋亡,为提高肿瘤化疗敏感性提供了新思路。
Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis protein,IAP)家族中一类抑制凋亡，调节细胞分化调节因子[2]。目前已有研究发现在胃腺、乳腺等高度恶性转移性肿瘤中Survivin过度表达[7],在一些喉癌细胞系中也有证据证明Survivin呈高度表达[8]。因此抑制Survivin在恶性肿瘤中的高度表达成为增强肿瘤细胞对化疗药物敏感性及凋亡能力的关键所在医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
