胎膜具有一定内分泌和保持羊水内环境稳定的功能,在整个妊娠期为胎儿保护和选择的屏障。胎膜分为羊膜和绒毛膜,其中绒毛膜包括中间层、绒毛中胚层和滋养层。而羊膜与滋养层间充斥着细胞外基质(extra cellular matrix, ECM)。ECM是维持胎膜紧张度的重要成分,是抵抗胎儿运动产生的压力、胎盘生长及羊水量增加等必不可少的结构。目前,研究理论认为[2],若ECM降解加速,会使胎膜结构紊乱,胎膜抗张力、强度的能力下降,最终导致胎膜早破。
E26转录因子1(E26 transformation specific1, Ets1)是转录调节因子家族最基本的成员之一,它是编码导致ECM降解和重塑的蛋白酶等许多基因所必需的转录因子[3]。本研究旨在探讨Ets1与PROM的关系。
1 材料与方法
1.1 一般资料
选取西安交通大学医学院第一附属医院妇产科2007年1月至2007年7月住院自然分娩及剖宫产分娩的胎膜早破(PROM)患者75例[其中足月胎膜早破(TPROM)40例,未足月胎膜早破(PPROM)35例],年龄(27.1±3.4)岁,孕次1.33±0.66;足月无产兆择期剖宫产患者70例(其手术指征分别为:臀位8例;头盆不称28例;巨大儿7例;高龄初产5例;社会因素22例),年龄(27.5±4.1)岁,孕次1.47±0.75,作为对照组。两组均为初产妇,单胎,无内外科合并症及病理性产科并发症,近期无外伤和性交等明显诱因,两组患者年龄及孕次均符合正态分布,且二者比较差异无显著性(P>0.05)。两组患者于产后或术后取破口处全层胎膜组织1.0cm×1.5cm,生理盐水清洗至透明,立即置入含40g/L多聚甲醛的0.1mol/L PBS(pH 7.4)溶液中固定,并将标本置于该固定液中4℃下2h。梯度酒精脱水,二甲苯透明,常规石蜡包埋。
1.2 主要试剂
Ets1鼠抗人多克隆抗体(克隆号SC350)为SantaCruz公司产品,工作浓度为1∶25。SP免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司。
1.3 方法
采用免疫组化中敏感性高的亲和组织化学技术:酶标链亲和素生物素技术(SP)法。以PBS代替第一抗体作为阴性对照,以胎膜各层部分细胞胞浆和(或)胞核出现棕色颗粒状物质视为阳性染色。
1.4 结果判定
Ets1蛋白主要着色于细胞核和(或)胞浆。以染色强度与阳性染色细胞百分率的乘积作为半定量标准。高倍镜下每张切片选择10个有代表性的视野,每个视野记数100个细胞。①染色强度计分:0分为无色,1分为淡黄色,2分为棕黄色,3分为黄褐色;②按阳性染色细胞百分率计分。0分为阴性,1分为阳性细胞0%~25%,2分为25%~50%,3分为51%~75%,4分为>75%。两项得分相乘结果为其结果。按积分高低分为:“-”积分为0分;“+/-”积分1~2分;“+”:积分3~4分;“”:积分4~5分;“”:积分≥6分。“+”,“”,“”判定为阳性,“-”,“+/-”,判定为阴性医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
1.5 统计学处理
采用SPSS12.0统计软件t检验和χ2检验进行统计学分析。数据以均数±标准差(±s)表示,显著性检验采用单因素方差分析,检验水准为0.05,差异有统计学意义。