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两组体外培养BMMNCs起始细胞数均为5×106个，体外扩增到P3、P4、P5时获得的细胞数比较，CMS组均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结果见表1～2。表1CMS和对照组骨髓MSCs生长曲线数值比较表2CMS和对照组骨髓MSCs体外扩增的数量
2.5 骨髓MSC传代率比较
15例CMS患者骨髓MSC均可分离培养，其中9例可传代扩增，传代率为60%，对照组各例均可传代扩增，传代率为100%，两组间差异有统计学意义(P <0.05)。经过动态观察发现，随着培养时间的延长，CMS组MSCs的生长速度和增殖能力逐渐下降，正常人骨髓MSC可传代到18代以上，而CMS患者骨髓MSC传代在12代以下。
3 讨论
CMS是长期生活在海拔2 500 m以上高原的世居或移居者，对高原低氧环境逐渐失去习服而导致的临床综合征，主要表现为红细胞增多、血红蛋白增高(女性≥190g/L，男性≥210g/L)和低氧血症[2]。CMS最根本的病因是缺氧，MSC对缺血缺氧的环境敏感，低氧影响着MSC的生理学特征[3]。关于CMS患者的MSCs的生物学特性、功能及其是否参与CMS发病的研究目前无报道。在本研究中我们对此做了初步的实验研究，结果成功地从CMS患者的骨髓中分离、培养、扩增得到MSCs，将其与正常同龄人骨髓来源的MSCs进行了生物学特征的比较，结果表明，来自CMS骨髓的MSCs在形态、表型特点上与正常人MSCs无异，尽管CMS和正常MSCs表面标志无明显不同，细胞生长的形态相似，但CMS患者MSCs体外传代生长较正常困难，而能体外传代生长的CMS骨髓MSCs表现较正常生长旺盛，分化程度较高。上述结果提示，CMS骨髓MSCs存在特有的生物学特点。
MSC是造血微环境的重要组成部分，因其具有自我更新、多向分化等干细胞特性及支持造血、免疫抑制等功能，近年来成为成体干细胞领域的研究热点[4]。MSC作为骨髓基质细胞的前体细胞，是骨髓内造血微环境的重要组成部分。对处于骨髓中的造血干细胞(HSC)不仅有空间位置的机械支持作用，还分泌多种生长因子,如SDF1、MCSF、SCF、FLT3L、TPO、IL7、GMCSF、GCSF、IL6、TGFβ、IFNγ、TNFβ和IL11等支持其造血功能，有助于HSC未分化状态的维持。此外，MSCs及其分化细胞表达的细胞外基质如粘附因子和整合素家族可直接作用于HSC，促进HSC的粘附和归巢。因此，MSC与HSC自我复制、增殖、分化及归巢密切相关医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
本研究发现，在初接种时骨髓MSC呈圆形,贴壁后呈椭圆形;随着时间的推移,贴壁细胞呈成纤维细胞样，沿胞体长轴排列成单层，并以克隆形式增殖，分裂迅速;消化传代后细胞重复贴壁过程，细胞形态和原代无差异。传代培养时，骨髓MSC表现出旺盛的增殖能力，这些与相关报道一致[5,6]。在培养过程中还发现，CMS患者骨髓MSCs原代培养所需时间较长，约20～30 d左右才能达到传代的要求，这可能与CMS患者骨髓成熟红细胞数量多致骨髓液粘稠干扰MSCs的贴壁和生长有关。一旦原代培养成功，传代后细胞同样具有快速增殖能力。CMS患者骨髓MSCs的生长潜伏期为1～3 d，第4天起呈对数增长，至第7天达到高峰，平均8～10d可传一代。
CMS具有很强的体外增殖能力，本研究采用体外培养、传代的方法，观察了CMS患者骨髓MSCs不同代数扩增的细胞数，结果发现，CMS患者第2代、第3代和第4代MSCs扩增数均明显高于对照组，表明CMS患者MSCs具有更强的增殖能力。
