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1.2 研究方法
1.2.1 外周血白细胞的分离
提取病例组及对照组肘静脉新鲜全血15ml，立即用EDTA抗凝。离心弃去血浆后再加淋巴分离液，移液器收集界面上的白细胞层，离心弃上清可见白色的沉淀，加入Trizol试剂，用移液器充分抽打、混匀，直到形成清亮不粘稠的液体。
1.2.2细胞总RNA的抽提与鉴定
Trizol法抽提细胞总RNA，样品经紫外分光光度计检测A230、A260、A280值，甲醛变性胶电泳检测28S、18S条带变化，鉴定样品质量是否符合表达谱芯片的实验要求。
1.2.3对样品RNA进行荧光标记
双链cDNA的合成与纯化，以cDNA为模板用随机引物和Klenow酶进行DNA链的标记，并在DNA链延伸过程中掺入荧光素。
1.2.4杂交与清洗
将标记的DNA溶于杂交液中42℃杂交过夜，清洗后玻片甩干即可用于扫描。
1.2.5信号扫描和分析
芯片用ScanArray Express双通道激光扫描仪进行扫描，分别得到子痫前期外周血cDNA的Cy5图像文件和正常妊娠外周血的Cy3图像文件。采用GenePix Pro 4.0图像分析软件分析Cy3和Cy5两种荧光信号的强度和比值，对芯片上的数据用Lowess方法进行归一化；最后以差异为两倍的标准来确定差异表达基因。比值>2.0表示子痫前期外周血基因表达水平高于正常妊娠，比值<0.5则显示子痫前期外周血基因表达水平低于正常妊娠。
2结果
2.1总RNA抽提与鉴定结果医.学全.在.线网站www.lindalemus.com
样本的总RNA经紫外分光A230、A260、A280测定，甲醛变性胶电泳检验RNA样品质量符合表达谱芯片实验要求。OD260/OD280值为1.714～1.965，均介于1.7～2.1之间。结果显示总RNA无降解，28S、18S条带清晰，28S比18S的亮度接近2∶1，提示得到高纯化的总RNA。
2.2基因表达谱芯片杂交结果
图1和图2均为Cy5荧光标记的子痫前期外周血白细胞cDNA杂交扫描图像与Cy3荧光标记的正常妊娠外周血白细胞cDNA杂交扫描图像的叠加图像。在图像中，如果Cy3信号较强，该点呈绿色，表示该基因呈下调趋势；如果Cy5信号较强，该点呈红色，表示该基因呈上调趋势。在两种外周血中表达水平相当的显黄色，而均不表达的则为无色。图1显示肿瘤坏死因子（TNF-α)在子痫前期外周血表达增高，Cy5信号较强，呈红色。图2显示白介素-4受体（IL4R)在子痫前期外周血表达降低，Cy3信号较强，呈绿色。
