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1.2方法
1.2.1动物分组及模型建立选健康活泼BALB/c 小鼠60只(第四军医大学实验动物中心)，雌雄各半，2 mo龄，体质量(25±5)g. 自由饮食饮水，昼夜12 h交替光照，室温25℃，湿度60% 左右. 每日21∶00 雌雄合笼，次日晨查精栓或阴道涂片，以精栓或阴道涂片查到精子做为受精标志，记为E0d. 将体质量相近的实验动物随机分为海洛因组和盐水组. 从E0～E8 各组动物自由进食, E9～E18 d，盐水组于21∶00在小鼠大腿外侧皮下注射生理盐水20 mL/（kg·d)，1/d，海洛因组组给予海洛因10 mg/（kg·d) 注射，1/d，将药物溶于生理盐水中，0.5 g/L. 子代分组同亲代孕鼠.
1.2.2蛋白印迹实验仔鼠30 d龄时在各脑区取材，0.16 mol/L戊巴比妥钠腹腔麻醉，速断头、开颅、分离各脑区，即刻入液氮，冻存管分装，-80℃贮存. 用时加入4℃胞质蛋白提取液裂解，20∶1 加入蛋白酶抑制剂PMSF，高速分散器组织匀浆，冰浴1 h，12000 g 4℃离心10 min，沉淀加入4℃预冷核蛋白提取液，震荡混匀，冰浴1 h，再12000 g 4℃离心30 min，取上清为核蛋白，其蛋白浓度经考马斯亮蓝法定量，取上清加等体积2×SDS 样品缓冲液，煮沸5 min 使蛋白变性. 取50 μg待测蛋白加入等体积2×上样缓冲液煮沸5 min，行SDSPAGE 电泳，蛋白半干转至PVDF膜. 100 V 恒压转移2 h后，将PVDF 膜在含5%脱脂奶粉的TBST中室温下封闭1 h，与1∶1000一抗pp38 MAPK 兔多抗4℃孵育过夜，PBST 缓冲液洗膜3次，每次10 min；随后加入羊抗兔 IgGHRP 37℃孵育1 h，洗膜3次，每次10 min. ECL化学发光试剂显影，胶片曝光，UVP 凝胶成像系统扫描目的条带，Labworks 软件测量各阳性条带的光密度，将pp38 MAPK阳性条带与相应的βactin 条带吸光度比值作为其蛋白的相对表达量医.学全.在.线www.lindalemus.com.
统计学处理：所有数据均采用SPSS12.0进行处理，多样本均数比较采用单因素方差分析.
2结果
分析各组间相应蛋白带的平均吸光度值，以βactin作内参蛋白，调整后进行半定量分析. 与盐水组相比，海洛因组动物的前额叶皮层、海马、伏核和杏仁核4个脑区组织的p38 MAPK磷酸化蛋白表达均明显增加（P< 0.05，图1，2).
3讨论
MAPK信号系统作为真核细胞内各种信息传递的最后通路和共同通路，能够将细胞外的各种刺激信息转移到细胞核内，是神经细胞发生一系列可塑性变化的分子基础. p38 MAPK 多见于促炎和促凋亡的途径中，它在细胞分化、凋亡、迁移和增殖等基本生理过程中也发挥着不可忽视的作用［5］，许多细胞外刺激如应激刺激、炎性细胞因子、细胞因子、脂多糖、生长因子等通过细胞内信号转导通路激活p38 MAPK，进而磷酸化激活 MAPK APkinase2 等，并最终激活ATF2，Max 和MEF2 等转录因子而产生生物学效应［6］，但其具体调制及与其他信号通路之间的关系尚未明了.
