 |
 |
1.2.5 免疫组化检测淋巴细胞表面Fas、FasL表达：分离的淋巴细胞滴加在防脱片载玻片上，晾干后放入4%多聚甲醛中浸泡,室温下固定2 h,蒸馏水洗涤2 min×2次,室温下凉干即成标本片;标本片放入-20℃冰箱存放待用。按照试剂盒说明书操作，阴性对照用PBS代替一抗，余步骤相同。封片后每张切片选择5个不同视野采用IMAGEPRO PLUS图像分析系统进行定量分析，结果以光密度值表示。
1.2.6 肺组织标本留取及组织形态学观察：取未经支气管灌洗的大鼠肺脏，观察肺脏大体病理改变。左肺上叶注入4%多聚甲醛5 ml,取下置于4%多聚甲醛中固定1周。取固定的肺组织常规石蜡包埋、切片，常规HE 染色;普通光学显微镜下观察肺脏组织形态结构。
1.3 统计分析 实验数据以x±s表示，应用SPSS13.0统计学软件进行分析，用F检验进行两样本方差齐性检验，重复测量资料用方差分析，两组间比较采用t检验，多组间比较采用q检验。显著性水准α=0.05。
2 结果
2.1 哮喘组大鼠临床症状及组织病理学观察 哮喘组大鼠在卵白蛋白激发过程中，表现出蜷伏不动，呼吸急促，口唇爪有不同程度紫绀，张口呼吸，大小便失禁，连续激发后毛色失去光泽，烦躁不安。刺激数天后部分大鼠症状逐渐加重。对照组大鼠无上述变化，治疗组变化明显减轻。
光镜下哮喘肺组织支气管黏膜增厚,大量炎性细胞浸润,管腔狭窄,肺泡上皮细胞破坏，对照组大鼠支气管壁光滑、完整,支气管、血管周围未见炎性细胞浸润。治疗组变化较哮喘组明显减轻。
2.2 淋巴液、血液、BALF中的淋巴细胞△·ψm水平比较 哮喘组大鼠在2、6、12、24、48 h各时间点淋巴液中的淋巴细胞△·ψm峰值较对照组和治疗组明显升高(P<0.001);血液中的淋巴细胞△·ψm峰值均较对照组和治疗组明显升高(P<0.05);BALF中的淋巴细胞△·ψm峰值均较对照组和治疗组明显升高(P<0.01);治疗组各时间点淋巴液、血液和BALF中淋巴细胞△·ψm峰值与对照组均无显著性差异(P>0.05)，详见表1。表1 淋巴液、血液、BALF中的淋巴细胞△·ψm水平比较
2.3 淋巴液、血液、BALF中淋巴细胞Fas蛋白表达比较 哮喘组大鼠在2、6、12、24、48 h 各时间点淋巴液中淋巴细胞表面Fas蛋白表达均较对照组和治疗组明显降低(P<0.001), 血液中的淋巴细胞表面Fas蛋白表达均较对照组和治疗组明显降低(P<0.05)，BALF中的淋巴细胞表面Fas蛋白表达均较对照组和治疗组明显降低(P<0.01)，治疗组各时间点淋巴液、血液和BALF中淋巴细胞表面Fas蛋白表达水平与对照组均无显著性差异(P>0.05)，详见表2。表2 淋巴液、血液、BALF中淋巴细胞表面Fas蛋白表达比较医.学全.在.线网站www.lindalemus.com 支气管哮喘大鼠淋巴液中淋巴细胞线粒体跨膜电位变化及地塞米松对其干预的影响
