病例组选自2005年8月-2007年12月期间就诊于武汉同济医院,武汉协和医院和武钢总医院的冠心病患者。CHD诊断依据WHO诊断标准或经冠脉造影显示有一支或一支以上冠脉狭窄≥50%者。对照组来自2007年夏季武钢总医院体检人群。正常对照组均经过严格病史询问、体格检查、心电图检查和一般生化指标检查,检查结果无CHD、严重的肝、肾疾病者入选,有周围血管疾病或周围血管栓塞疾病者均未入选。
1.2 DNA 的提取
基因组DNA抽提使用PUREGENE DNA提取试剂盒(德国 Gentra公司)从全血中提取DNA,并于-80 ℃冰箱长期保存。
1.3 基因型的测定
扩增HSP701基因的上游引物为5′CTTCCCAGAGCGAACCTGTG3′,下游引物为5'GCAGAACACCGTGTTTGACG3′,用25 μL PCR反应体系,反应条件为94 ℃预变性5 min后、按94 ℃变性30 s、61 ℃退火45 s、72 ℃延伸1 min,进行30个循环,末次循环后72 ℃延伸10 min;20 μL酶切体系包括10 μL PCR 产物和5U限制性内切酶BsrB I,37 ℃酶切4 h。酶切及琼脂糖凝胶电泳后可见在 351 bp的HSP701 PCR产物中,GG基因型携带者为171、116、64 bp共3个片段,GC基因型为287、171、116、64 bp共4个片段,CC基因型为287、64 bp的2个片段。
1.4 统计学处理
采用SPSS 13.0软件处理,等位基因频率采用频率计数法计算。组间基因型和等位基因频率及计数资料比较用χ2检验。以α=0.05为差异显著性水平。
2 结果
2.1 研究对象一般人口学特征
纳入本次研究的均为中国汉族人,冠心病组217例,其中男性133例,女性84 例,平均年龄(61.24±9.34)岁。对照组217例,其中男性133例,女性84例,平均年龄(62.08±8.17)岁。两组性别、年龄构成差异均无统计学意义(P>0.05)医.学.全.在.线www.lindalemus.com。
2.2 遗传平衡检验
将对照组的HSP701基因各基因型代入HardyWeinberg遗传平衡定律,进行群体代表性检验。结果HSP701各基因型频率与期望值基本吻合(χ2=0.318,P>0.05),基本符合HardyWeinberg遗传平衡定律。
2.3 HSP701各基因型在病例组和对照组的分布
HSP701基因190位点各基因型及等位基因基因频率在两组人群的分布差异有显著性(P<0.05),见表1。表1 HSP701基因各基因型在病例组
3 讨论
热休克蛋白是生物细胞受到高温、感染、炎症、缺血等应激刺激时产生的一种在进化上高度保守的蛋白质,具有广泛的生物学功能。HSP70是HSP家族中最保守和最主要的一类,HSP70具有多种生物学功能,包括分子伴侣功能,参与免疫反应,抗细胞凋亡功能,抗氧化功能,提高细胞的应激耐受性,促进细胞增殖,参与细胞骨架的形成和修复等,广泛的生物学功能使其成为当今生命科学研究中的热点[1]。