主要为组织细胞,另可见多核巨细胞、浆细胞,偶见中性粒细胞、淋巴细胞、坏死细胞(Fig2).组织细胞及多核巨细胞胞质内见大量溶酶体样结构(Fig3).
图2 多核巨细胞(MN)、组织细胞(H)、淋巴细胞(L)、浆细胞(P)、坏死细胞(D),坏死的细胞内有残留细胞器.Fig2c中有可疑的球菌(C)及杆菌(B)(略)
Fig2 Pictures show multinuclear giant cells(MN),histocytes(H),lymphocyte(L),plasmocyte(P),necrosis cell(D).There are organelles in the necrosis cell.The coccus(C)and bacilli(B)can be seen in the Fig2c
图3 多核巨细胞(a)及组织细胞(b)内均有大量溶酶体样结构(略)
Fig3 There are a lot of lysosome-like structures in the multinuclear giant cells(a)and histocytes(b)
图4 典型的球菌(a)及杆菌(b)Fig4 Coccus(a)and bacilli(b)(略)
2.2 细菌
第一次观察时主要注意到少数细胞内有典型的球菌(Fig4a),并发现一典型的细胞外杆菌(Fig4b),未发现真菌、病毒颗粒及其他病原体.对多核巨细胞及组织细胞中的溶酶体样结构反复观察分析,发现大部分具有杆菌的特点,多为双层膜结构,有空泡,大小0.3μm×1μm(Fig5a~g),少数直径约2μm(Fig5m~o),有缺少界膜呈空泡状的核区;细胞质膜多较清楚(Fig5a~p),由二个电子致密层与一个电子透明层构成,厚度5~10nm(Fig6);细胞壁仅见于一个细菌中,基本结构为二个电子致密层与一个电子透明层,厚度不均,约30~60nm(Fig6).
图5 多核巨细胞及组织细胞内的溶酶体样结构中,部分具有典型的细菌形态,有核区;细胞质膜多较清楚(略)
Fig5 Part of lysosomoid structures in the multinuclear giant cells and histocytes show typical bacilli form.There are nuclear area and clear cytoplasmic membrane in most of them
3 讨论
对于怀疑由病原体所致的疾患,电镜下发现损害中的病原体是最具说服力的证据.此类病例中,多位学者曾认真进行过细菌分离等探讨,但一直未能找到病因及挽救患者的生命.我们第一次采用透射电镜对该病进行观察,找到了病原菌,虽然第一例患者仍未能被救活,但电镜下观察到当时认为的“杆菌”,并依据此发现推断以往反复细菌培养均未获得成功可能是该菌为严格厌氧菌,为此进行严格的厌氧培养并分离出病原及救活了患者,即电镜观察为该病确定奠定了非常重要的基础.
行电镜观察的两个病例中,均找到了球菌,细菌分离培养第1例每次均为表皮葡萄球菌,第2例为头状葡萄球菌.表皮葡萄球菌及头状葡萄球菌均系凝固酶阴性的葡萄球菌,易于分离培养.以往的研究者均未获结果,其失败原因有三种可能:一是细菌培养前应用抗生素使其被杀灭;二是我们的两例患者均碰巧伴有混合感染,其他的为单一感染或伴有另外的细菌感染;三是此类葡萄球菌为最常见的污染菌,检验人员将其视为污染菌未予报告,因为我们的第一例中曾发生过此种情况.各种凝固酶阴性的葡萄球菌在患者抵抗力低下时可以作为一种条件致病菌造成化脓性感染,因其对多数抗菌素敏感,易于治疗.本病的皮损从不发生化脓,使用对分离出的葡萄球菌敏感的抗菌素未能挽救患者的生命,提示致患者死亡的细菌不是它,而是厌氧性放线菌.葡萄球菌或许在本病中的作用只是消耗氧,为厌氧菌的生长创造条件.
图6 Fig5局部放大,示细胞壁(空十字)有2个电子致密层与1个电子透明层,厚度不均,约30~60nm.细胞质膜(弯箭头)也由2个很薄的电子致密层与1个电子透明层构成,总厚度约10nm(略)
Fig6 It is local magnification of Fig5to show cell wall(empty cross),which consists of2electron-dense layers and1electron-lucent layer.It is uneven in thickness.Cytoplas-mic membrane(curve arrow)also consists of2electron-dense layers and1electron-lucent layer but much thin