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1.2.3 PCR扩增及其产物检测
参照Kupari等〔1〕使用的引物，上游序列5′CAG GAG GAG ACC CCA TGT GAC3′，下游序列5′CCT CCA CCC TGT TCA GCCC3′。PCR反应体系：10×PCR缓冲液(加Mg2+)2.5 μl,引物各1 μl,10 mmol/L dNTP 1 μl,1 U Taq酶,DNA模板1 μl，加灭菌去离子水至总体积25 μl。PCR扩增条件：94℃预变性5 min，继35个循环进行扩增(94℃变性1 min，68℃退火1 min，72℃延伸1 min)，最后72℃延伸5 min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳鉴定。
1.2.4 DNA多态性分析
限制性酶切反应体系： PCR产物10 μl，HaeⅢ内切酶10 U，10倍缓冲液2 μl，加灭菌去离子水至20 μl。酶切条件37℃ 2～3 h，酶切产物经2.0%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察电泳带并照相。
1.3 统计学处理
应用SPSS13.0统计软件分析，计量资料采用x±s表示。基因型和等位基因频率用基因计数法，等位基因频率比较及检验基因型频率与HardyWeinberg平衡定律符合程度，均用χ2检验。组别间比较采用t检验或χ2检验。
2 结果
2.1 两组CYP11B2基因
344C/T多态性频率分布特点 PCR产物长537 bp。CYP11B2基因344位点可发生胸腺嘧啶(T)与胞嘧啶(C)的互换,即T344C。344C等位基因有HaeⅢ酶切位点，而344T等位基因无该酶切位点，所以，TT型酶切片段为273 bp,CC型为202 bp，CT型酶切后产生273和202 bp片段，各基因型均含有多个小片段。见图1。结果表明，武汉地区汉族老年人CYP11B2基因344C/T多态性以TT和CT基因型占优势，经HardyWeinberg遗传定律检验，达到遗传平衡，具有群体代表性(χ2=0.003，P>0.05)。
2.2 两组CYP11B2基因
344C/T多态性分析 由于CC基因型在研究对象中频率较低，为了便于进行统计学分析，故在本研究中将携带C等位基因的基因型合并后进行分析(即CC+CT基因型与TT基因型进行比较)。结果显示：在病例分组的EH组中，CC+CT基因型分布频率明显高于对照组(χ2=4.52，P<0.05)。见表2。表2 两组CYP11B2基因各基因型及等位基因频率的比较(略)
3 讨 论
CYP11B2是体内生物合成醛固酮过程中最后一步生化反应的催化酶，属于线粒体细胞色素P450酶超家族〔2〕。CYP11B2基因定位于8号染色体上(8q22)，总长约7 kb，含8个内含子和9个外显子〔3〕。该基因有两种常见变异：CYP11B2基因的第2个内含子中大部分碱基可被CYP11B1基因的相应部分取代;另一种变异位于启动子区域344处，该处是类固醇转录因子(steroidogenic factor1，SF1)的结合位点，该位点可发生C与T交换。醛固酮作为体内重要的盐皮质激素，在高血压的形成和发展过程中具有重要作用医.学全.在.线www.lindalemus.com。
本研究发现，武汉地区老年汉族人群CYP11B2基因344C/T多态性以TT和CT基因型占优势，C和T等位基因频率分别为0.25和0.75，与早先报道的一个没有年龄限制的样本研究结果一致〔4〕。但与国外报道结果存在明显差异〔1，5〕。种族差异可导致CYP11B2基因344C/T多态性频率分布的不同。
国外有关CYP11B2基因344C/T多态性与EH关系的研究结果不尽相同。
