 |
 |
(electrochemiluminescence)试剂联吡啶钌配合物Ru(bpy)2+3发生的电化学发光反应，建立了对其进行含量测定的新方法。
毛细管电泳(capillary electrophoresis)已成为一种重要的分离技术。在分析科学尤其是生命科学及临床医学中起着很重要的作用[6]。在电化学发光体系中，电化学发光试剂联吡啶钌配合物Ru(bpy)2+3已被成功地用于免疫分析、DNA分析、药物分析和机理的研究等诸多领域[78]。把毛细管电泳与电化学发光分析法有机结合起来，可以将毛细管电泳的高分离能力与电化学发光高灵敏度检测优点相结合[911]。CEECL联用同时测定复方磷酸可待因口服溶液所含多种混合物中三种药物含量的方法未见报道。本文建立的新方法对于科学准确地控制和管理麻醉及精神药品起到了很好的作用。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
MPIA型毛细管电泳电化学发光检测器(西安瑞迈电子科技有限公司)。pHs2C型酸度计(上海华侨仪器厂)。KQ218超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。毛细管长50cm、内径为25μm (河北永年光导纤维厂)。联吡啶钌(Sigma公司)储备液0.1mol/L：取联吡啶钌约2.0g，精密称定至1.8715g，用二次蒸馏水稀释并定容至25mL，即得100mmol/L的储备液，使用前逐级稀释至所需浓度。用Na2HPO4和NaH2PO4(西安化学试剂厂)配制一系列pH值的磷酸盐缓冲液。实验中所用试剂均为分析纯，水为二次蒸馏水。实验中所有进入毛细管的溶液须用0.22μm醋酸纤维素膜过滤。
磷酸可待因和盐酸麻黄碱对照品均由中国药品生物制品检定所提供，纯度分别为99.8%和99.7%。马来酸溴苯那敏原料药执行企业内控质量标准，由沈阳新地药业有限公司提供，含量在98.5%以上(国药准字H20052113)。复方磷酸可待因口服溶液购自香港澳美制药厂。批号：0706302，0803302，0804302;规格：每5mL样品中含有磷酸可待因4.5mg，马来酸溴苯那敏2.0mg，盐酸麻黄碱5.0mg和愈创木酚甘油醚。
1.2 实验方法
混合对照品溶液的配制：准确称取经105℃干燥至恒重的磷酸可待因、盐酸麻黄碱、马来酸溴苯那敏对照品分别约为45，50，20mg，置50mL量瓶中，用二次蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液1mL，置10mL量瓶中，用二次蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，得混合对照品溶液。用0.22μm醋酸纤维素膜过滤,取过滤液进行测定。用前逐级稀释至所需浓度。
样品溶液的配制：取复方磷酸可待因口服溶液1mL，置10mL容量瓶中，用二次蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，再用0.22μm醋酸纤维素膜过滤,取过滤液进行测定。
毛细管的预处理与检测池的安装：将未涂层的新毛细管使用前依次用1mol/L NaOH溶液在60℃冲洗30min，使毛细管内壁生成硅醇基，再依次用0.1mol/L NaOH溶液、二次蒸馏水、运行缓冲液各冲洗10min。每次使用前毛细管分别以NaOH溶液、二次蒸馏水、磷酸盐缓冲液各冲洗5min。两次进样中间可仅用缓冲液冲洗。
2 结果
2.1 分离条件的优化
分离高压对ECL光强的影响： 当毛细管两端所加分离高压在3～19kV范围内变化时，发现当其高于15kV时，基线噪音变得明显，可能是由于较大的分离电压使毛细管内焦耳热效应增加，峰形变差。另一方面，参照进样体积公式[12]：Vi=Ei ×ti ×Vcapillary/Es×tm，Ei表示进样电压，Es表示分离电压，ti表示进样时间，tm表示分析物的迁移时间，Vcapillary表示毛细管的体积。可看出随着分离高压的增大，进样量的减少可能导致发光效率的降低。实验中采用15kV作为分离电压医.学全.在.线网站www.lindalemus.com。
