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1.2 方法
1.2.1 制备动物模型 MBP提取方法与动物模型制备方法沿用我们以往建立的方法［2］。EAE的严重程度依据Kono等［3］的标准评定。
1.2.2 免疫组化法检测血脑屏障ICAM1的表达 取发病高峰期的EAE大鼠和对照组大鼠各7只，剥取大鼠的小脑，福尔马林固定，石蜡包埋，连续切片，每隔5张取2张，每份标本选出6张切片。使用ZYMED公司SP试剂盒，采用三步法进行免疫组化染色。用Nikon图像扫描系统进行观测。采用美国IPP图像分析软件进行灰度分析。每只大鼠取12张片子，沿矩形路线观测。
1.2.3 统计学方法 数据资料用SPSS 11.0统计软件包进行处理，采用两组间均数比较的独立样本t检验(双侧)进行统计学分析。
2 结果
2.1 发病情况与体重变化 实验组25只大鼠全部发病，起病时间为(10.74±1.19)d，评分在1分以上者达100%，评分在4分以上者达45%，病死率12%。依照Kono等的评分标准，平均得分为(3.54±0.75)分。从注射抗原后0天到第15天，平均体重减轻(28.6±16.6)g；而对照组25只大鼠无一发病，体重随鼠龄的增大而持续增长，至注射后第15天，平均体重增长(14.2±5.1)g。
2.2 脑、脊髓组织的病理改变 取发病高峰期EAE大鼠和对照组大鼠的脑和脊髓，石蜡切片，常规HE染色，光镜下可见EAE大鼠的脑和脊髓组织中有大量炎性细胞浸润(主要是淋巴细胞和单核细胞)，炎性细胞主要聚集在血管周围，形成典型的“袖套”样改变［46］，而对照组大鼠脑和脊髓组织未见炎性细胞浸润和神经细胞的变性、坏死医.学.全.在.线www.lindalemus.com。
2.3 免疫组化法检测血脑屏障血管内皮细胞ICAM1的表达 镜下观察发现EAE组大鼠脑血管内皮细胞上ICAM1的染色明显深于对照组，血管内皮细胞阳性反应呈明显的棕黄色。尤其在脉络丛的血管内皮细胞处阳性反应更为明显。运用计算机图像分析系统进行分析，测量ICAM1的灰度值(灰度值是反映透光密度的定量指标，它与ICAM1表达的量呈负相关，即灰度值越高，表示ICAM1蛋白表达量越少；而灰度值越低，则表示蛋白表达量越多)［7］。从统计结果可见实验组的灰度值为141.47±6.88，而对照组为166.24±7.24，两组比较，差异有非常显著的统计学意义(P<0.01)。
3 讨论
EAE的病理特征之一是在脑白质部位小血管周围产生以T细胞为主的炎细胞浸润、水肿、脱髓鞘等病理改变。而血脑屏障是一种存在于血液循环与脑组织之间的屏障结构，主要由毛细血管内皮细胞组成。正常情况下，蛋白质一类大分子物质不能通过血脑屏障，甚至一些极性小分子也只能缓慢地进入脑内［8］。因此，在健康动物CNS内很难检测出T细胞及单核巨噬细胞。在本实验中，发病动物的CNS中可见到大量T细胞，说明T细胞通过某种机制穿越了血脑屏障而进入CNS造成炎症损伤。
