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2实验方法与结果
2.1HPLC法测定硫酸吗啡的含量与限度
2.1.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-乙腈-0.5%醋酸铵溶液-三乙胺(12.5∶12.5∶75∶0.06)为流动相;检测波长为287 nm。流速：1.0 ml/min。理论塔板数按硫酸吗啡峰计算应不低于3 000。
2.1.2对照品溶液的制备取硫酸吗啡对照品约10 mg，精密称定，置50 ml容量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1毫升含硫酸吗啡0.2 mg)。
2.1.3供试品溶液的制备取本品约10 g,精密称定，置具塞锥形瓶中加浓氨水20 ml,碳酸氢钠4 g,搅拌均匀，放置30 min，加入乙醚150 ml,振摇10 min，超声提取10 min，离心,浸出上清液，残渣再用乙醚超声提取两次，每次120 ml,合并提取液，水浴下挥干，残渣用无水甲醇溶解，并转移至10 ml容量瓶中，用无水甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。
2.1.4阴性样品溶液的制备取缺罂粟壳的阴性样品10 g，精密称定，依供试品溶液同法操作制备阴性样品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。记录色谱图，按外标法以峰面积计算硫酸吗啡的含量。色谱图见图1。
图1HPLC色谱图(略)
a: 样品溶液; b: 对照品溶液; c: 空白
2.2系统适用性试验理论塔板数：n= 5.54(tR/Wh/2)2=5.54(3.67/0.15)2 =3316。分离度：R=2(tR2-tR1)/(W1+W2)=2(3.7-3.4)/(0.15+0.4)=1.1。
2.3线性范围的考察精密称取硫酸吗啡对照品，加甲醇制成每毫升含吗啡0.5 mg的溶液。精密吸取储备溶液0.4、2、4、6、8 ml置10 ml容量瓶中,用甲醇稀释至刻度。吸取对照品溶液10 μl注入高效液相色谱仪，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得标准曲线方程。在21.8～436.0 μg/ml范围内，硫酸吗啡有良好的线性关系，线性回归方程为：Y=1 417.9X+1 330.7，r=0.999 8。含量测定样品浓度与添加回收实验样品浓度均在此范围内。
2.4检测限和定量限的考察取硫酸吗啡对照品溶液，用甲醇依次稀释制成一系列溶液，按信噪比(S/N)为3，测得硫酸吗啡检测限为0.005 53 μg/ml;按信噪比(S/N)为10,测得硫酸吗啡定量限为0.016 6 μg/ml。
2.5精密度考察取同一批样品(批号：060801)制备供试品溶液1份，重复进样6次，记录硫酸吗啡峰面积，并计算出RSD为0.87%，表明仪器精密度良好医.学.全.在.线www.lindalemus.com。
2.6重复性考察取同一批样品(批号：060801)制备供试品溶液6份，按“2.1”项下方法平行制备样品溶液并测定，结果硫酸吗啡RSD为1.34%，表明本方法重复性符合分析要求。
2.7稳定性考察取供试品溶液在0、2、4、6、8、12、24、48、72 h分别进样测定硫酸吗啡含量,考察其72 h内稳定性。结果日内和日间RSD分别为0.80%、0.89%。其峰形和含量变化不大，表明样品溶液在72 h稳定。
2.8加样回收率实验精密称取供试品5 g共9份，另取0.218 mg/ml的硫酸吗啡对照品溶液5 ml置50 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，三组分别加入上述稀释的硫酸吗啡对照品溶液各1、2、3 ml，一份不加对照品溶液，依供试品溶液制备方法同法操作，滤过后，分别取上清液进样10 μl，结果见表1。
表1回收率结果(略)
