0引言
随着经济发展和生活方式改变,妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus, GDM)发病率逐渐上升,已经成为威胁母婴健康的严重疾病[1]. 第三届国际妊娠期糖尿病工作会议将GDM定义为妊娠期首次发生或发现的不同程度的糖代谢异常 [2-3]. GDM对母婴影响较大,使自然流产增加达15%~30%,妊娠高血压综合征发病率为正常孕妇的3~5倍,羊水过多发病率为13%~36%,巨大胎儿发病率为25%~40%,还会增加孕妇感染、酮症酸中毒及早产、胎儿宫内发育迟缓、围产儿死亡、胎儿畸形等发病率,而且孕妇将来患糖尿病机会增加,大约50%以上最终成为糖尿病患者[4]. 但GDM发病机制仍不清楚. 我们观察中药麦冬在改善胰岛素抵抗(IR)状态中的作用,探讨其防治GDM的机制,为GDM防治提供理论指导及实验证据.
1材料和方法
1.1材料
选妊娠10 d大鼠(暨南大学实验动物中心提供),体质量180~220 g. 中药麦冬购于广州中医药大学第一附属医院,西药罗格列酮购于暨南大学附属华侨医院. 胰岛素放射免疫试剂盒采用北京北方生物技术研究所产品. 肿瘤坏死因子(TNFα)、瘦素(leptin)及PCR markers引物由华美生物工程公司提供,逆转录酶、Tag酶及缓冲液购自Promega公司医.学全.在.线网站www.lindalemus.com.
1.2方法
1.2.1动物模型建立将上述大鼠高热量饲料(碳水化合物50%,蛋白质13%,动物油脂肪30%,纤维素在内的其他成分7%)喂养8 wk后,给予链脲佐菌素(STZ) 35 mg/kg[STZ用0.1 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠溶液(pH 4.0)稀释成10 mL/L的溶液]一次性尾静脉注射,注射后72 h,测空腹血糖(FBG)稳定在13.5 mmol/L以上者为造模成功.
1.2.2胰岛素抵抗评价采用钳夹试验检测大鼠胰岛素敏感性,判断IR模型是否复制成功. 步骤:①插管前大鼠禁食12 h,第2日上午8:00时进行实验,用药大鼠插管前停药24 h,水合氯醛(10 mL/kg)腹腔注射麻醉. 无菌状态下分离暴露大鼠右侧颈静脉和左颈动脉,进行插管,然后取1.5 mL血液进行血浆胰岛素检测. ②将大鼠颈静脉导管接到三通管一端,另二端分别接上输注胰岛素和葡萄糖的输液管,颈动脉导管接一装有肝素生理盐水(5万U/L)的注射器. 先取颈动脉血样测定基础血糖,然后以恒定速度输注胰岛素,每5 min测定血糖一次,当血糖值超出(基础值±0.5)mmol/L的范围时,输注葡萄糖,使血糖值控制在5.5 mmol/L. l h后当连续3次血糖值均在上述范围时,则达到稳定状态. 连续上述过程,直至120 min为止. ③在钳夹期间60~120 min,每隔5 min测定1次,12个GIR值求平均值.
1.2.3分组正常大鼠组(对照组),随机将40只妊娠糖尿病胰岛素抵抗大鼠分为4组(n=10):GDM大鼠组、GDM大鼠+麦冬组、GDM大鼠+罗格列酮和GDM大鼠+罗格列酮+麦冬组.
1.2.4给药及标本采集
①给药: 治疗组给予麦冬灌胃,0.25 g/(kg·d). 西药对照组给予罗格列酮灌胃,5 mg/(kg·d). 空白对照组及正常对照组均给予同体积的生理盐水灌胃. 正常及空白对照组大鼠以基础饲料喂养. ②标本采集: 从静脉采血后于实验的第12 wk处死动物,并立即取腹腔脂肪组织. 按实验需要制备血清及石蜡切片等.