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1.2.5标本测定
① 大鼠禁食8～10 h后，从后眼眶静脉丛取血，血糖用葡萄糖氧化酶法测定，胰岛素(Ins)以放射免疫法检测. ②动物空腹采血后恢复2～3 d再行葡萄糖胰岛素耐量实验（GInsTT)测定大鼠胰岛素敏感性. 大鼠于非空腹状态下，腹腔注射20 g/L戊巴比妥钠麻醉，行颈外静脉和股动脉插管，先从静脉注射葡萄糖（700 mg/kg)，以0.175 U/kg注射普通胰岛素，从股动脉抽血用葡萄糖氧化酶法，测定实验前及注射胰岛素完毕后第3, 6, 9, 12, 15 min的血糖值. 胰岛素敏感性用K值表示，具体方法为：以时间为横坐标，血糖值经自然对数转化后为纵坐标，直线回归所得到的回归系数乘以100即为K值. K值减小表示机体对胰岛素不敏感，即有IR. ③取腹腔冻存的脂肪组织（0.9 g)，用TRIzol一步法提取总RNA. 应用RTPCR法检测脂肪组织中肿瘤坏死因子α(TNFα)与瘦素(leptin) mRNA表达水平. 引物序列为：TNFα有义链5′AGGCGCTCCCCAAAAAGATG3′，无义链5′TGGCGGAGAGGAGGCTGACT3′，扩增产物480 bp；Leptin有义链5′ACCCCAGCGAGGAAAATGTG3′，无义链5′GGAAGGCAAGCTGGTGAGGA3′，扩增产物288 bp；内参照GAPDH有义链5′TTCATTGACCTCAACTACATG3′，无义链5′GTGGCAGTGATGGCATGGAC3′，扩增产物443 bp. PCR反应体系为25 μL，其中包括10×PCR缓冲液2.5 μL, 25 mmol/L MgCl2 1.5 μL, 10 mmol/L dNTPs 0.5 μL, 引物 2 μL, Taq酶2.5 μL, cDNA 2 μL. 循环参数：94℃预变性×1 min，58℃退火×1.5 min，72℃ 2 min，循环35次，最后7次延长至10 min，4℃保存. 取产物10 μL用20 g/L琼脂糖凝胶电泳，60 V电泳1 h，透射紫外灯下观察结果并拍照. 通过电泳图像分析仪进行灰度测量，基因表达水平用TNFα和leptin与GAPDH灰度比值表示.
统计学处理： 计量数据用x±s表示，组间比较采用方差分析，应用SPSS11.5软件统计数据.
2结果
2.1血糖的改变GDM大鼠组空腹及餐后血糖较正常对照组升高（P<0.05)；与GDM大鼠比较，麦冬治疗组和罗格列酮治疗组空腹及餐后血糖均下降（P<0.05)，罗格列酮+麦冬治疗组空腹及餐后血糖均下降（P<0.01)；与麦冬治疗组比较，罗格列酮治疗组空腹及餐后血糖无明显变化（P>0.05)，罗格列酮+麦冬治疗组空腹及餐后血糖下降（P<0.01)；与罗格列酮比较，罗格列酮+麦冬治疗组空腹及餐后血糖下降（P<0.01,表1).表1各组大鼠血糖的改变（略)
2.2胰岛素的改变GDM鼠组空腹胰岛素水平较正常对照组升高（P<0.05)；与GDM大鼠比较，麦冬治疗组和罗格列酮治疗组空腹胰岛素水平均下降（P<0.01)，罗格列酮+麦冬治疗组胰岛素水平下降更明显（P<0.01)；与麦冬治疗组比较，罗格列酮治疗组空腹胰岛素水平无明显变化（P>0.05)，罗格列酮+麦冬治疗组空腹胰岛素水平下降（P<0.01)；与罗格列酮比较，罗格列酮+麦冬治疗组空腹胰岛素水平下降（P<0.01,表2).表2各组大鼠血胰岛素水平的改变（略)
2.3腹腔内脂肪组织中TNFα的改变与对照组比较，GDM组TNFα的表达水平显著升高（P<0.01)；与GDM组比较，麦冬治疗组TNFα的表达水平降低（P<0.05)，格列酮治疗组与罗格列酮+麦冬治疗组TNFα的表达水平显著降低(P<0.01)；与麦冬治疗组比较，格列酮治疗组和罗格列酮+麦冬治疗组TNFα的表达水平显著降低(P<0.01,图1).
2.4腹腔内脂肪组织中leptin的改变与对照组比较，GDM组leptin的表达水平显著升高（P<0.01)；与GDM组比较，麦冬治疗组leptin的表达水平降低（P<0.05)，格列酮治疗组与罗格列酮+麦冬治疗组leptin的表达水平显著降低(P<0.01)；与麦冬治疗组比较，罗格列酮治疗组和罗格列酮+麦冬治疗组leptin的表达水平显著降低(P<0.01,图2).
3讨论
GDM指妊娠期发生或发现的不同程度葡萄糖耐量异常,若发生在妊娠早期不排除葡萄糖耐量异常在妊娠前就已经存在［5-6］. GDM病因不明. 经典的观点认为孕期胎盘生乳素、催乳素、糖皮质激素、孕激素等拮抗胰岛素激素水平升高，造成胰岛素抵抗状态是主要原因. 近年研究发现GDM的发生除与胰岛素分泌及功能异常有关外,可能还与一些炎症因子、脂肪因子参与.
