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1 材料和方法
1.1 实验动物
健康雄性SD 大鼠,体重250～280 g,由徐州医学院实验动物中心提供。
1.2 药物与试剂
参附注射液(主要成分为人参皂甙和乌头碱,浓度分别为0.8 g/L和0.1 g/L,批号070703) 由雅安三九药业有限公司提供。ATP购自Sigma公司，硫酸氰四丁胺(TBAHS)购自Aldrich公司，考马斯亮蓝G-250、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶(CK)检测试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。其他试剂均为国产分析纯。
1.3 实验分组及步骤
大鼠戊巴比妥钠(45 mg/kg) 腹腔注射麻醉,开胸取心,用冷灌流液冲掉残留血液,并迅速移到Langendorff 灌流装置上,灌流液为Krebs - Hanseleit 磷酸缓冲液,灌流压为88 kPa。灌流前用95%氧气和5%二氧化碳混合气体向灌流液中平衡20 min。32只大鼠随机分为4组,每组均为8 只。正常对照组(C组):大鼠心脏离体后接在灌流装置上持续灌流110 min。单纯缺氧/复氧组(I/R组):大鼠心脏离体后接在灌流装置上先预灌20 min,然后停止灌流,再恢复灌流60 min。参附注射液30 ml/L组和60 ml/L组(SF30 组，SF60 组):分别在再灌注后加入参附注射液,其他处理同单纯缺血/再灌注组。实验时参附注射液溶解于灌流液中,稀释的体积分数为3.0%和6.0%，即30 ml/L和60 ml/L。灌注结束时,取心脏左室心肌组织制成10%组织匀浆，用于心肌组织ATP含量、MDA活性和SOD含量等测定。
1.4 血流动力学指标测定
左心耳处剪一小口，将带有小乳胶水囊的测压管经二尖瓣口插入左心室，连接压力换能器，经MP-100A-CE模数转换器(BIOPAC System, Inc, USA)与计算机相连。调节左室舒张末压为2～4 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)。Acqknowledge 4.0软件实时采集和记录左室舒张末压(LVEDP)，并计算和显示左室发展压(LVDP)、左室内压上升/下降最大速率(±dp/dtmax)和心率(HR)等。用秒表计数每分钟经冠脉流出的液体量(冠脉流量，CF,ml/min)。
1.5 ATP测定的色谱条件
流动相为215 mmol/L KH2PO4、2.3 mmol/L TBAHS与3.5 %乙腈组成,pH为6.25。流速为0.9 ml/min。紫外检测器,波长为210 nm。
1.6 心肌组织MDA活性和SOD含量的检测
取10%心肌组织匀浆液，用硫代巴比妥法(TBA) 测定MDA 含量，用羟胺法测定SOD 活力。用考马斯亮蓝G-250 测定心肌组织蛋白质的含量。操作步骤按试剂盒说明书进行。
1.7 冠脉流出液CK含量的检测
再灌注60 min时收集冠脉流出液，用分光光度计测量流出液中CK的活性(按试剂盒说明书操作)。
1.8 统计学处理医学 全在.线提供www.lindalemus.com
所有数据均用Prism 3.0统计软件进行处理,数据用±s表示。多组间比较应用单因素方差分析法进行分析,两两比较应用One-way ANOVA的Newman-Keuls法进行q检验。检验水准：α=0.05。
2 结 果
2.1 参附注射液对缺血/再灌注大鼠心脏血流动力学的影响
平衡灌注后(缺血前)，各血流动力学指标均无显著性差异。用含有参附注射液的灌注液复灌后，SF30组的各血流动力学指标和恢复率与I/R组比较也无显著性差异(P>0.05);而SF60组LVEDP、LVDP、+dp/dt和CF均有明显改善(54±15，51±10，1035±240和11.8±2.3 vs. 72±11,35±8,720±206和8.8±1.9)，它们的恢复率与I/R组比较也存在显著性差异(862±365,47±9,49±8和77.6±13 vs. 2400±390,33±7,36±9和59±11)(P<0.05);SF60组HR的恢复率虽有改善趋势，但无显著性(P>0.05)。
2.2 参附注射液对缺血/再灌注大鼠心肌SOD活性和MDA生成以及冠脉流出液CK含量的影响
与正常对照组比较，缺血/再灌注使各组心肌SOD活性下降，MDA含量升高，冠脉流出液CK含量增加。与I/R组比较，SF30组的SOD活性、MDA和CK含量无显著差异(P>0.05);SF60组SOD活性显著升高，MDA和CK含量显著下降(P<0.05)(表1)。
2.3 参附注射液对缺血/再灌注大鼠心肌ATP含量的影响
如表2所示，平衡灌注后(缺血前)，各组心肌ATP含量无显著性差异。缺血/再灌注后，I/R组心肌ATP含量明显低下。与I/R组比较SF30组的心肌ATP含量有所升高，但无显著性差异(P>0.05);SF60组心肌ATP含量则明显升高(P<0.05)。表1 各组大鼠心肌MDA、SOD和冠脉流出液CK活性
的变化(略)表2 参附注射液对缺血/再灌注大鼠心肌ATP含量
