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如何提高免疫保护效果一直是疫苗研究的热点。佐剂对免疫效果有一定的影响,依据免疫途径、免疫反应类型、免疫持续时间及抗原质量等因素的不同,选择合适的佐剂[8],可增强疫苗的免疫原性,减少提供保护性免疫所需的抗原或接种次数,优化免疫应答,是有效提高重组抗原免疫保护力的手段之一。目前已使用的佐剂或增强剂有铝盐、矿物油、钙盐、胞壁酰肽、生物降解多聚体、微生物片段、多糖、细胞因子和纳米佐剂等[9]。弗氏佐剂是常见的一种,但鉴于弗氏不完全佐剂(FCA)毒副作用大及在机体内长期残留等难以解决的缺点,因此研究高效低毒的人用性佐剂不失为血吸虫免疫预防的有效途径[10]。Montanide ISA 206佐剂(人用)是一种水/油/水(W/O/W)型的新型佐剂,当油性佐剂与水相混合后便形成水包油乳剂,具有易乳化、黏性低、易注射等特点,W/O/W型的结构使得包含于外部水相中的抗原表位更突出,因而更容易被机体的免疫系统所识别;内部水相中的抗原能颗粒化而缓慢释放,所以它能够持续激发机体的免疫应答[11,12]。Montanide ISA 206与抗原乳化的研究表明,这种乳化剂完全可能保持持续的安全性,乳化物颗粒大小具有良好的可控性,抗原的使用剂量可限制至低量,且在乳化剂中稳定存在,可在人体使用。苏良科等[13]在研制预防猪链球菌病的亚单位疫苗中,经比较发现Montanide ISA 206佐剂的免疫增强作用要高于铝佐剂和CpG佐剂。因此,选择合适的佐剂有助于提高疫苗的免疫原性。
本研究在前期成功克隆表达日本血吸虫HGPRT重组蛋白的基础上,通过改变免疫方式,分别使用Montanide ISA 206佐剂、弗氏佐剂与重组蛋白一起免疫C57BL/6小鼠,大大提高了重组蛋白的免疫原性,诱导出小鼠体内较高水平的特异性IgG。并且重组蛋白加佐剂组诱导的免疫保护力均大大提高,减虫率、减雌雄合抱率和肝组织减卵率分别达到了53.7%、59.3%、44.9%和43.3%、44.1%、33.0%;减虫率均超过了40%。其中Montanide ISA 206佐剂与重组蛋白联合组免疫保护力更加明显,减卵率也超过了40%。因此,日本血吸虫在宿主肝的成熟虫卵数量减少,可能主要是血吸虫细胞中HGPRT分子受到干扰,使得核苷肌苷酸(IMP)或鸟苷酸(GMP)的合成受阻,从而导致雌虫子宫虫卵数、排卵数减少。而此保护力与其诱导的小鼠体内特异性IgG水平的升高有关。
本研究证实日本血吸虫HGPRT在抗生长发育及抗生殖效应方面是一个很有希望的疫苗候选分子,如果选用合适佐剂和免疫途径,可获得理想的免疫效果。进一步优化重组HGPRT抗原的免疫方案,包括理想的佐剂、佐剂使用量以及免疫途径等,正在进一步研究和验证中。
作为疫苗,安全性是不可忽略的一个环节。动物和人体内也存在HGPRT分子,并与血吸虫HGPRT分子有一定的同源性,如人体内HGPRT分子(GENE ID: 3251 HPRT1)与血吸虫HGPRT分子同源性达67%,是否会引起宿主的自身免疫反应?蔡胜蓝等[14]以血吸虫HGPRT的DNA疫苗进行家兔的局部肌肉刺激实验和豚鼠的全身过敏实验,结果肌肉刺激实验反应轻微,未出现变态反应。HGPRT分子作为候选疫苗的安全性值得进一步研究。
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